氰污染环境中细菌质粒的研究

三大氰污染环境中所分离得到的６６株有代表性的优势菌进行了质粒检测和一些带质粒菌的分类学研究。结果为：所选择的三大氰污染样区的细菌质粒检出率均高于非污染样区，且假单胞菌在氰污染中占绝对优势。选择了高效降氰菌株Ｎ４０进行质粒消除的研究，结果表明所得到的高效降氰菌株Ｎ４０的质粒较难被吖啶橙的ＳＤＳ消除。     

pEgr-Endostatin重组质粒联合电离辐射抗肿瘤效应的实验研究

目的研究pEgr-Endostatin辐射诱导肿瘤的表达特性及其抗肿瘤作用,为提高临床肿瘤放疗疗效提供实验证据.方法 Western blotting法检测pEgr-Endostatin重组质粒联合电离辐射诱导黑色素瘤B16细胞蛋白表达;建立动物模型,用ELISA法检测不同处理组Endostatin的剂量水平,比较不同处理方式的差异.结果 Western blotting法检测结果显示:重组质粒转染的黑色素瘤B16细胞上清中均有Endostatin蛋白表达,而未转染重组质粒的B16细胞和转染空质粒的B16细胞上清中未见Endostatin蛋白表达.ELISA法检测结果表明:体外接受2~10 Gy X射线照射,Endostatin表达水平明显增加,且照射剂量为4 Gy时Endostatin的表达水平最高.2 Gy照射8~72 h后,Endostatin表达水平与假照射组比较明显增加,在48 h时Endostatin表达水平最高.动物实验表明:荷瘤+25 Gy照射组、荷瘤+pEgr-Endostatin照射组、荷瘤+pc DNA3.1+25 Gy照射组和荷瘤+pEgr-Endostatin+25Gy照射组肿瘤生长率显著低于单纯荷瘤组(P0.05#0.01),荷瘤+pEgr-Endostatin+25 Gy照射组亦明显低于荷瘤+25 Gy照射组和荷瘤+pEgr-Endostatin组(P0.05#0.01).结论 pEgr-Endostatin重组质粒联合电离辐射能使Endostatin蛋白表达增加,从而抑制血管内皮细胞生长、发挥抗肿瘤作用.     

生长条件对黄瓜线粒体类质粒稳定性的影响

“津新密刺”等一些黄瓜品种的线粒体中存在主基因组以外的3种环形DNA类质粒pC1、pC2和pC3。改变植株生长的温度、pH或以蔗糖溶液代替无菌水培养黄瓜植株，电泳均能检测到上述3种类质粒。应用ImageMaster VDS系统对各类质粒电泳带的密度进行扫描，通过计算3种类质粒的相对拷贝数及类质粒之间的拷贝数比值，分析不同生长条件对黄瓜类质粒稳定性的影响。结果表明，上述3种培养条件均对黄瓜线粒体类质粒的拷贝数有影响，其影响的程度因类质粒而异，pC3与pC1和pC2相比对环境改变更敏感，提示类质粒间的这种差异可能是类质粒复制方式不同引起的。     

β—淀粉酶基因在黄单胞菌中的克隆及表达

广泛寄主范围载体ｐＫＴ２１０可在辅助质粒ｐＲＫ２０１３的协助下转移进入黄单胞菌（革兰氏阴性）中并能稳定存在；来源于枯草杆菌的β－淀粉酶基因与载体ｐＫＴ２１０形成重组质粒ｐＹＬ１，并以其转化大肠杆菌；通过三亲本接合将ｐＹＬ１引入带有利福平抗性的黄单胞菌ＮＫ－０１－Ｒ中，通过抗性选择接合子，并测定接合子的淀粉酶水解能力及产胶能力。本文获得一株黄原胶产量比出发菌株提高２０％，且淀粉酶水解能力显著提高的工     

黄瓜线粒体中DNA类质粒的分离与鉴定

应用琼酯糖凝胶电泳、S1酶处理及电镜技术，从黄瓜线粒体中分离并鉴定了三种环形DNA类质粒，依其分子由大到小，分别称之为pC1、pC2和pC3。以类质粒凝胶电泳带的荧光扫描值与DNA类质粒的分子长度之比作为类质粒拷贝数的参照值，对三种类质粒进行荧光扫描分析，结果表明pC3拷贝数明显高于pC1和pC2；pC2的拷贝数略高于pC1。     

外源基因在球形芽孢杆菌中的转化

为了扩大芽孢杆菌属的受体系统范围，对球形芽孢杆菌进行了质粒消除，并用含有溶葡球菌酶基因的质粒ｐＥ１９４ｃｏｐ６－１转化，结果表明，该酶基因在球形芽孢杆菌中获得了稳定，高效表达。     

阅读框架内乳腺癌cDNA文库的构建

目的:为构建高质量乳腺癌噬菌体展示文库,用pKE-2质粒载体经卡那抗性筛选富集开放阅读框架(open-reading frame ORF)内阳性克隆。方法:用Trizol试剂提取乳腺癌组织总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoR/Hind接头,用EcoR和Hind消化接头,使形成两端分别带有EcoR和Hind粘性末端的双链cDNA,将其连接于带有EcoR和Hind末端的pKE-2质粒载体,转化大肠杆菌DH5α,经卡那抗性筛选,富集ORF克隆。结果:经过ORF筛选,文库中ORF克隆比例达到80%,较筛选前的5%提高75%。     

禽类多瘤病毒APV-1晚期基因多顺反子的EGFP标记载体构建和表达

为研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译起始调控的机制,设计和构建了以增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因替代病毒APV-1野生型的晚期结构蛋白VPs基因的真核双顺反子表达载体,并观察其在转染进入禽类原代成纤维细胞中的表达翻译状态.以APV-1的c DNA克隆(p HL1003)为模板,运用PCR技术扩增出与野生型病毒APV-1相同的Ori区、早期编码区和晚期Agno-1a区序列作为载体片段;从质粒p EGFP-N1中扩增出编码绿色荧光的EGFP DNA片段;经连接构成重组质粒p HL1003-GFP,通过脂质体细胞转染方法将质粒DNA转染到鸡胚胎和鹌鹑胚胎成纤维细胞中,通过细胞培养观察荧光表达状况.DNA序列分析证实了重组克隆中的EGFP序列与已知的质粒p EGFP-N1中EGFP序列一致.转染72 h后观察鸡和鹌鹑胚胎成纤维细胞,转染成功胚胎细胞明显表达较强的荧光,说明GFP可以在构建的双顺反子重组质粒的下游中正常表达并产生荧光.p HL1003-GFP重组质粒的构建及其在禽类原代成纤维细胞中的高效表达,为我们研究多顺反子翻译起始调控中Agno-1a基因的表达对下游病毒结构蛋白基因的翻译调控机制提供了简洁易用的系统和模型.     

水稻基因整合平台系统供体质粒pURKMT的构建

提高水稻产量,改良稻米品质是育种学家广泛研究的课题．随着现代生物技术的发展,水稻已成为植物基因工程的重要研究对象．许多实验室已成功地建立了一系列供外源基因转化水稻的系统．但是这些转化系统主要应用Ｔｉ质粒衍生的载体,通过Ｔ－ＤＮＡ左右两端的序列将目的基...     

A novel gene carrier based on amino-modified silica nanoparticles

Uniform-sized amino-modified silica nanoparticles have been prepared by the controlled synchronous hydrolysis of tetraethoxysilane and N-(β-amimoethyl)-γ-aminopropyltriethoxysilane in water nanodroplet of the water-in-oil microemulsion.These nanoparticles display positive charge potential at definited pH,This is due to the presence of amino groups on the surface of the nanoparticles,Nanoparticles-plasmid DNA complexes can easily form through electrostatical binding between the positive charges of the amino-modified silica nanoparticles and the negative charges of the plasmid DNA,The complexes can be also dissociated under alkaline pH or high ionic strength conditions.And enzymatic digestion of the plasmid DNA is almost inhibited by these nanoparticles complexes.A novel non-viral gene carrier based on the amino-modified silica nanoparticles is proposed under the combination of nanotechnology,biotechnology and gene engineering technology.The plasmid DNA can successfully cross various systemic barriers to COS-7 cells as well as mediate high expression of Green Fluorescence Protein(GFP)gene in cells by use of this novel gene carrier.