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191.
微生物的腈水合酶是催化丙烯腈生成丙烯酰胺的重要生物催化剂,广泛应用于氨基酸、酰胺、羧酸及其衍生物的合成。通过PCR扩增得到诺卡氏菌的腈水合酶基因。实验先构建得到BL21-pGEX-4T-1/NHase重组菌,表达GST-NHase融合蛋白。由于GST的相对分子质量较大,阻碍了腈水合酶的β亚基与α亚基的正确结合,从而使腈水合酶表现不出酶活。于是又构建了BL21-pET-30c/NHase重组菌,IPTG诱导表达结果显示,腈水合酶α亚基基本没有得到表达,影响了腈水合酶的活性。经生物信息学分析发现,腈水合酶α亚基的起始密码子为gtg,可能不易被大肠杆菌的RNA聚合酶识别,于是通过点突变将gtg替换成atg,阳性重组子经IPTG诱导表达,结果显示腈水合酶β亚基和α亚基的表达量都有所提高。诱导表达的菌液经超声破碎,离心得到粗酶液,用EPI-30-ARG-IDA-Co2+亲和载体纯化带6×His tag的腈水合酶,气相色谱法检测腈水合酶的酶活达到200 U/mL。 相似文献
192.
对分离自四川省卧龙保护区大熊猫肠道的6株大肠杆菌的抗生素抗性与质粒的关系进行了研究,结果显示:6株大肠杆菌中都存在不同大小的质粒DNA;采用SDS高温法处理每株大肠杆菌后,有2类质粒在琼脂糖凝胶上的条带数减少,菌株的抗生素抗性水平也有所降低,有2株菌的某些抗生素抗性完全消失;将分离自6株大肠杆菌的质粒转化大肠杆菌JM109,获得1个氨苄青霉素抗性转化子.这些结果表明,大熊猫肠道中的大肠杆菌的抗生素抗性与它们含有的质粒有关. 相似文献
193.
用大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因,杆状病毒ETL启动子和含多角体基因的病毒DNA片段构建了多角体转移载体质粒pEZGL,还对其特点进行了讨论。 相似文献
194.
195.
196.
Ri质粒转化牛膝及其发状根的培养 总被引:5,自引:0,他引:5
用发根农杆菌的Ri质粒转化药用植物牛膝,诱导出了抗卡那霉素的发状根。将诱导的发状根进行固体平板培养和液体悬浮培养。在附加Km30mg/L的MSo和1/2MSo培养基上,发状根生长良好,而未经转化的对照组则死亡,表现出生激素自主性。在附中外源激素IBA0.1mg/L和NAA0.1mg/L时,能促进发状根的成活,侧根的形成以及提高增殖倍数。表明适量的外源激素能促进发状根的生长。 相似文献
197.
pBR322质粒DNA的原子力显微镜成象及剪切研究 总被引:1,自引:0,他引:1
研究DNA分子间和分子内相互作用力,可以帮助人们了解DNA分子的结构及其功能.由于对这些相互作用力进行直接测量时,不仅需要控制体系的稳定性,同时外加作用力又不能对体系产生影响.因此,目前只是利用X射线,光散射和核磁共振等手段对作用力进行直接的物理或热力学测量.虽然渗透压技术已经应用到DNA双螺旋非特定分子间力的测量,但对于具有特定取向的复杂分子相互作用,就需要在单个分子间进行直接测量.原子力显微镜(AFM)可以检测到10~(-14)N数量级的针尖-样品相互作用力,横向分辨率可达0.01nm,而接触面积只有10nm~2,并且可以在近生理溶液条件下操作,因此它是非常适合研究DNA分子间相互作用力的.事实上,利用AFM研究Biotin-streptavidin体系中的单个分子间相互作用以及DNA双链间的相互作用力已有报道. 相似文献
198.
以酿酒酵母两种不同类型的嗜杀菌株SK4(K1型)和ERR1(K2型)为材料,分析了不同嗜杀酵母的嗜杀特性.证明两株菌产生的毒素蛋白的最适条件不同,最适pH和温度分别为4.8、16℃和4.2、22℃,但均对在对数生长期的敏感细胞作用最显著.SK4和ERR1的嗜杀质粒的比较表明:M1-dsRNA质粒和M2-dsRNA质粒分子量分别为1.7kb和1.5kb,两株菌的L-dsRNA质粒均为4.0kb.用高温和紫外线处理嗜杀酵母,嗜杀活性随之消失. 相似文献
199.
两种氰污染环境降氰菌的类群研究 总被引:3,自引:1,他引:3
本文对昆明大板桥煤气厂污水处理站各处理环节的污水及镇沅金矿3个污水样点中的细菌数量,类群进行研究、比较,筛选高效降氰菌株,并对这两种不同的氰污染环境中的细菌进行质粒检测. 相似文献
200.
从酿酒酵母中筛选出两个具有线状双链RNA质粒的酵母菌株,提取并纯化了它的质粒RNA.用RNase和DNase处理,发现它们能被RNase消化,证明它们是质粒RNA.用电镜观察到它们呈线状,凝胶电泳图谱表明,这些质粒RNA都含有两条带;其分子量分别为3.0×10~6d和1.5×10~6d。 相似文献