新型抗乳腺癌治疗性基因疫苗“普聚生”研究

核酸类的DNA疫苗药物是研究开发治疗性疫苗的理想路线。DNA疫苗主要通过内源性途径递呈抗原，同时也可进行交叉递呈，所以能引起细胞和体液双重免疫反应，是强大的疫苗输入系统。DNA疫苗更有利于激活细胞免疫应答，这对发展抗恶性肿瘤、抗慢性感染等重大慢性疾病的治疗性疫苗，是极为有利的，因为针对这些疾病的治疗，细胞免疫发挥着更重要的作用。其次， DNA疫苗成品主要为质粒DNA，可利用大肠杆菌原核系统，进行大规模生产和纯化，成本低廉。在常规条件下非常稳定，可长期保存，不需要冷链运输，对于产业化开发和应用非常有利。     

细菌F质粒转移实验的有效方法的研究

本文报道了一种简易有效的F′质拉转移的方法。这种方法仅用了包含链霉素(str)和氯霉素(cm)的选择性培养基,就能选出转移子。其目的是希望把F′从供体转移给受体,供体不抗str,受体不抗cm,把杂交中的混合菌涂布在LB cm str平皿上,供体和受体均被杀死,只有转移子才能生长。选得的转移子是:F′lac~ ::Tn9 pro~ /Δ(lac pro)gal E str~r重组体。     

一个诱动接合性柯斯载体的构建及其应用

用ｐＨＺ１３２在大肠杆菌中构建基因文库,并用特异的探针进行菌落杂交获得了有意义的ＤＮＡ片段,可将其衍生质粒转化到携带接合性大肠杆菌质粒如ＲＰ４的细胞中。通过与萌发后的链霉菌孢子进行两亲本杂交,或将携带ｐＨＺ１３２的大肠杆菌细胞和携带ＲＰ４衍生质粒ｐＰＫ２０７３的大肠杆菌细胞与萌发后的链霉菌孢子混合起来进行三亲本杂交,在接合性质粒ＲＰ４的转移功能的诱导下,携带插入片段的ｐＨＺ１３２衍生质粒即可转移到     

单质粒哺乳动物单杂交系统的构建及功能评价

对双质粒单杂交系统进行改进研究,将两种质粒的功能进行融合,最终得到单质粒杂交系统,并利用HEK 293T细胞对融合质粒进行了功能测试和评价. 研究结果表明：以RXRα为基础进行活性测试时,该系统对激动剂/拮抗剂响应的灵敏度与双质粒系统相近;该系统也适用于ERα、GRα、RARα、LXRα、PPARγ等多种核受体的活性检测,当添加已知配体时,其激活倍数介于8~36倍之间,Z因子大于0.6,可以作为配体筛选的基本模型;以Nur77为基础进行实验精密度测试时,单质粒系统的CV值较双质粒系统有显著降低,体现出更为优异的精确度和稳定性. 因此,该模型在核受体潜在配体的筛选过程中能够提供更为简便的操作和准确的结果,具有良好的应用前景.     

超顺磁性Fe3O4@SiO2空心亚微球的制备及其在质粒DNA分离纯化中的应用

采用溶剂热法合成超顺磁性空心亚微球,然后通过正硅酸乙酯水解-聚合反应,在亚微球表面包覆SiO₂,形成核壳结构Fe₃O₄@SiO₂空心亚微球。以该Fe₃O₄@SiO₂亚微球为分离介质,实现了大肠杆菌（E. coli）质粒DNA的高效、快速分离。     

重组质粒pMG36e-nisI-gfp在乳酸菌中的应用

本研究将带有nisI和gfp(绿色荧光蛋白)基因的乳酸菌表达栽体pMG36e-nisI-gfp转化至乳酸菌中,观察其在宿主内的稳定性.对重组菌进行了菌体形态、传代培养、质粒验证等研究,考察了该质粒的稳定性.结果显示:重组菌在不含抗生素的培养基中连续传代20代后,质粒丢失率低;菌体大小和形态基本不变;质粒经HindⅢ酶切后大小不变;GFP在第0、5、10、15和20代宿主菌中都可以表达,表达量没有明显差别,在SDS-PAGE中的带型一致;初步的动物实验验证了该质粒作为遗传标记的应用效果.说明该质粒在宿主菌中具有良好的稳定性.     

GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的探讨GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用,并分析相关机制.方法将构建成功的pGRIM-19重组质粒转染DU145细胞株,应用MTT法检测其对细胞增殖能力的影响,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,应用半定量RT-PCR检测GRIM-19及caspase-3 mRNA转录水平.结果流式细胞术结果显示:与对照组比较,pGRIM-19重组质粒明显抑制DU145细胞增殖,并使细胞周期发生改变,多数细胞抑制在G0/G1期,细胞凋亡率增加明显;通过RT-PCR电泳结果证实:pGRIM-19重组质粒明显促进GRIM-19的表达,同时激活caspase-3.结论重组质粒pGRIM-19可明显抑制DU145细胞增殖,并促进其凋亡,其凋亡的发生机制与激活caspase-3有关.     

Lrrc10蛋白表达载体的构建

为了构建重组质粒pET-Lrrc10和Lrrc10蛋白表达,利用Nco Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切载体pMD18-T-Lrrc10,回收目的片段与经同样酶切后的表达载体pET-30a(+),转入E.coli strainDH5α,菌落PCR筛选阳性菌落,提取阳性菌质粒并进行PCR和酶切鉴定;将重组子转入E.coli strain BL21(DE3),于37℃振荡培养,用1 mmol/L IPTG诱导目的蛋白的表达。结果表明,成功构建了融合表达载体并命名为pET-Lrrc10。转入E.coli strain BL21(DE3)进行目的蛋白的表达,获得与预期分子量大小相一致的融合表达蛋白Lrrc10;Lrrc10蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中,且IPTG诱导4小时,目的蛋白表达量最大。