肝片吸虫保护性抗原基因在卡介苗中的表达

用ECoR　I酶切合肝片吸虫保护性抗原基因FH3的重组质粒pUC18／FH3，回收FH3(约1．0kb)片段并测定其碱基序列．FH3片段以正确相位插入到E．coli—分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV261中，构建含有肝片吸虫保护性抗原基因的重组穿梭质粒．通过电转移法转化卡介苗，斑点杂交实验汪明，重组卡介苗中含有此抗原基因．热诱导FH3基因在卡介苗中的表达，并对基图表达产物进行别SDS—PAGE分析．结果显示，表达产物相对分子量为22kD．     

SV40T/pcDNA3.1重组质粒的构建及在肝细胞中的表达

构建重组质粒SV40T/pcDNA3.1,为建立永生化肝细胞系奠定基础。pcD2质粒经BamH Ⅰ单酶切获得SV40T基因片段,并将其捕入pcDNA3.1载体,经酶切鉴定证实,SV40T基因片段已成功插入载体中,采用常规方法分离培养肝细胞,用SV40T单克隆抗体进行间接免疫荧光检测,验证其在肝细胞中的表达。     

发根农杆菌诱导植物毛状根的发生及次生代谢物生产的研究进展

发根农杆菌(Agmbacterium rhizogenes)中含有Ri质粒．在自然条件下，发根农杆菌通过伤口侵染植物，使植物产生毛状根，本文从发根农杆菌的特性，及其所含有的Ri质粒的结构和功能，发根农杆菌诱导毛状根发生的机理，毛状根的转化方法，培养和鉴定及用于植物次生代谢生产方面的应用研究进行了综述．     

反义Ki-67和Bc1-2真核细胞双表达载体的构建及鉴定

目的 构建反义Ki-67和Bc1-2双表达栽体用于肿瘤基因治疗的研究.方法 从SGC-7901细胞总RNA中逆转录扩增Ki-67和Bc1-2 cDNA,T-A克隆到pMD18-T Simple栽体.Ki-67经BamH I和Cla I双酶切,Bc1-2经EcoR I和Xho I双酶切后,分别反向插入pVITR02的多克隆位点1(mcs1)和2(mcs2),构建单表达质粒pVITR02-AsKi-67扣pVITR02-AsBc1-2,再将Bc1-2EcoR I和Xho I双酶切,反向插入pVITR02-AsKi-67的mcs2,构建pVITR02-AsKi-67-AsBc1-2双表达质粒.结果限制性内切酶和测序表明单表达质粒pVITR02-AsKi-67和pVITR02-AsBc1-2以及双表达质粒pVITR02-AsKi-67-AsBc1-2构建成功.结论 本研究成功构建了pVITR02-AsKi-67和pVITR02-AsBc1-2单表达质粒,及pVITR02-AsKi-67-AsBc1-2双表达质粒.     

以改建的农杆菌Ti质粒转化外源基因于单子叶植物花叶芋的研究

当前,应用改建和“解除了武装”的根瘤农杆菌的Ti质粒作为植物基因工程载体的研究得到了迅速的发展,并已建成了若干套植物基因工程的实用载体系统,运用这些系统结合叶圆盘转化法(Leaf-disc transformation)已能将不少外源基因引入双子叶植物细胞并使被转化植物产生了新的性状。但由于根瘤农杆菌宿主范围的限制,使得应用这一载体系统的研究存在着很大的局限性。迄今为止,在单子叶植物中仅有石刁柏、水仙、吊兰、黄独四种植物能够     

几种农杆菌质粒DNA提取方法的比较

常规的农杆菌质粒DNA提取常采用碱裂解和酚、氯仿提纯方法，得率较低，一般在50ng／uL以下。就经典的碱裂解法(方法一)和在碱裂解法的基础上改进的方法二(去除了酚、氯仿提取过程，减少了提取过程中对人的伤害，且缩短了提取时间)以及改进的方法三进行了比较，实验结果表明：改进的方法二更适宜于做PCR检测，而方法三则适合于重组质粒DNA的酶切、PCR鉴定等。     

大肠杆菌—枯草杆菌穿梭质料载体pSUGV4的构建

作者用DNA重组技术,构建了大肠杆菌-枯草杆菌空梭质粒载体pSUGV4,它是以大肠杆菌（Es-cherichia coli）质粒载体pUC18为骨架,与来自空梭质粒表达载体pREP9含有革兰氏阳性菌复制起点（ori^ )和卡那霉素抗性（kan^r)基因片段重组而成,上述穿梭质粒载体可用于在大肠杆菌（E.coli）和枯草杆菌（Bacillus subtilis）中进行基因克隆工作。     

大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒载体pSUGV4的构建

作者用DNA重组技术,构建了大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒载体pSUGV4,它是以大肠杆菌(Es-cherichiacoli)质粒载体pUC18为骨架,与来自穿梭质粒表达载体pREP9含有革兰氏阳性菌复制起点(on