铜绿假单胞菌医院感染流行病学分子研究及基因分型

目的建立随机扩增多态性DNA（RAPD）基因分型方法检测铜绿假单胞菌（PA）,调查铜绿假单胞菌医院感染流行病学的情况,为控制院内感染提供直接可靠的参考依据。方法对2008—2009年分离的180株铜绿假单胞菌进行统计分析其临床分布;通过抗生素敏感性试验进行抗菌谱分型;再采用PAPD基因分型方法进行分析。结果标本主要来自ICU、烧伤科、呼吸内科等。从痰液标本中分离的铜绿假单胞菌占58．9％,其次伤口分泌物标本占18．9％、中段尿16．7％,其它类型标本占5．5％。抗菌谱分型分为5型。180株铜绿假单胞菌用RAPD分型共得178株,分型率98．9％（178／180）,分为9种类型：Ⅰ～Ⅸ。结论RAPD分型技术对铜绿假单胞菌临床分离株分型率较高;同一抗菌谱型的基因型可能不同,同一基因型的抗菌谱也可能不同。     

用正交设计优化甜菜RAPD反应体系

采用正交设计对甜菜的RAPD反应体系进行优化．应用L25（5^6）正交表,研究了Taq、Mg^2＋、随机引物、dNTPs和DNA模板5种RAPD反应组分浓度变化对扩增结果的影响,并进行量化分析,试验结果表明用这种方法建立的甜菜RAPD-PCR优化反应体系为：25μL反应体系中含1×Buffer、1．0mmol／L Mg^2＋、1U TaqDNA聚合酶、0．25mmol／L dNTPs、0．4μmol／L随机引物及25ng DNA模板．     

利用RAPD标记技术对刺槐属（Robinia）种间亲缘关系的分析

用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对刺槐属(Robina)内5种植物进行基因组DNA多态性分析.共选用22个10 bp随机引物扩增出212个DNA片段,进行种间遗传关系分析.片段大小在100～2 200 bp之间,其中多态性谱带为183条,多态率为86.3%;利用UPGMA进行遗传距离计算的结果表明,刺槐、毛刺槐和香花槐分属刺槐属的三个种,红花刺槐和龙槐是刺槐的变型.首次在DNA水平上证明香花槐为刺槐属的一个独立种,且与毛刺槐的亲缘关系较近.为刺槐属植物亲缘关系和系统分类建立了新的分子学证据.     

RAPD技术探讨几种家鸭与野鸭遗传多样性及亲缘关系

用RAPD技术分析我国常见家鸭品种（系）金定鸭(I、II、III系)、绍兴鸭、巢湖鸭、大余鸭、莆田黑鸭(I、II系)、连城白鸭、北京鸭,及引进品种番鸭和野鸭斑嘴鸭、绿头鸭基因组DNA的多态性.24个引物中,有19个共扩增出283条带,分子量约在400～2000bp之间,13个样品共有的条带数只有27条.根据扩增得到的RAPD图谱计算了不同样品间的遗传距离（D）和遗传相似系数.绿头鸭、斑嘴鸭与家鸭品种(系)间的遗传距离分别在0.2240～0.3092和0.2880～0.3735之间,方差分析表明两组数据不存在显著差异(p＞0.05).并依据D值由UPGMA聚类分析软件绘制了它们的分子进化树.     

不同种群灰飞虱(Laodelphax striatellus)的RAPD分析

用RAPD技术对9个不同的灰飞虱地理种群的DNA多态性进行了研究。按Neighbor-joining聚类法构建了这9个种群灰飞虱的分子系统树。该系统树分为2簇,簇1包括我国北京、福建、海南、辽宁、四川、上海、云南地区的灰飞虱种群,簇2包括宁夏地区和日本东京地区的2个灰飞虱种群。研究表明,不同地区灰飞虱种群的遗传距离与其地理距离不呈相关性。     

葡萄抗霜霉病基因RAPD标记的序列分析

用WizardDNAClean upSystem纯化葡萄抗霜霉病基因RAPD遗传标记OPO 0 6 - 150 0片段 ,用T easyVector克隆RAPD标记 ,采用自动荧光DNA测序仪 (型号ABI 377DNASe quencer)测定了该DNA片段的核苷酸组成及其排列顺序 .来自中国野葡萄的RAPD标记OPO 0 6- 150 0从左右两端各测了 586bp和 4 52bp .对两端序列的酶切位点进行了分析 .根据两端序列可以设计专一PCR扩增引物作为合成抗霜霉病检测探针的基础 ,用于检测葡萄抗病育种和抗病品种的霜霉病抗性 .     

9种芦荟亲缘关系的RAPD分析

应用40个引物对中国芦蔡（Aloe vera var.chinese),鹿角芦荟（Aloe arborescens var.natalensis bgr.),库拉索芦荟（Aloe barbadensis L.),木立芦荟（Aloe arborescens),皂质芦荟（Aloe saponaria),Aloe hybrid 1,Aloe vera hybrid2,皮具刺芦荟（Aloe aculeata),朱旺纳芦荟（Aloe juvenna)等9种芦荟的亲缘关系进行了初步分析,其中18个引物的扩增结果具有非常明显的品系间多态性,将结果以Phylip软件包,由程序eighbor-Joining和UPGMA,分别构建聚类图,结果表明中国芦荟,Aloe vera hybrid1和皮具刺芦荟具有较近的亲缘,鹿角芦荟,木立芦荟和库拉索芦荟具有较近的亲缘,其中鹿角芦荟,木立芦荟的遗传距离特别近,可认为是同一品种的变种,由于形态上的一些分化而出现了不同的命名,皂质芦荟,Aloe vera hybrid2的亲缘关系接近,朱旺纳芦荟与各品种之间都保持着相当远的遗传距离,原因可能是该品种未广泛栽培,从而还保持着某些自己的遗传特性。     

螽蟖总科部分属种RAPD带型变异的比较研究

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术 ,对螽总科 1 0种昆虫的RAPD带型变异进行了分析 .带型显示出属、种间多态性明显 ,能够明显区分 .利用NU取得遗传距离与遗传一致性矩阵 ,并用UPGMA聚类法进行分析 ,取得了系统树     

疣蝗5个种群间遗传分化的RAPD分析

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,在DNA分子水平上对疣蝗5个种群间的遗传差异进行了研究.在23个引物中有6个引物出现稳定的扩增带,扩增总带数为66条,其中53条具多态性,占80.3%,平均每个引物8.9条.利用Nei & Li相似系数和UPGMA聚类法对结果进行分析,发现用该法检测到的遗传差异从南向北是连续性梯度差异,因而建议所研究地区疣蝗是一个单型种.     

不同品种果蝇及其杂交后代的RAPD多态性分析

通过果蝇近交系的建立,用ＲＡＰＤ技术研究了不同品种果蝇及其杂交后代的ＤＮＡ多态性。结果表明：（１）近交作为一种育种方法,只要利用得当,得是大于害的,在畜禽育种的某些条件下还是可以采用的;（２）不同品种或系间有特异性的ＲＡＰＤ带;（３）在近交系与它们的杂交后代间的ＲＡＰＤ带中,多数带为正反交子代与双亲均相同或正反交子代与单亲共有的带,但有些带上亲代与子代间存在着擀和量的差异,在质的差异上出现双亲中没