半夏研究进展

半夏是一种重要的中药材，其生存环境遭到日益严重破坏，造成半夏资源匮乏。为保护和开发这一重要药材资源，已对其进行了系列的研究。本文介绍了半夏的人工栽培、组织培养与快速繁殖等方面的研究成果，并对半夏研究的趋势进行了探讨。半夏蛋白是一种从半夏块茎鲜汁中提取出来的植物蛋白，它是一种植物凝集素，具有抗肿瘤、抗生育等重要的生理作用,本文对其也进行了阐述。     

半夏生物碱提取工艺的研究

对半夏生物碱提取工艺进行了比较研究,结果表明,氯仿提取法和超声波辅助提取法的生物碱提取率没有显著性差异(t=2.109;df=10,p=0.061).这两种方法各有优缺点,氯仿提取法的生物碱提取率(0.0456±0.0003%)稍高,且提取率较稳定(SD 仅为 0.0002944),但所需提取时间较长.超声波辅助提取法大大缩短了提取时间,但生物碱提取率(0.0451±0.0005%)略低,提取率波动范围稍大(SD为0.0005007).     

聚类分析法对不同产地半夏药材质量的综合评价

目的:综合比较、评价不同产地半夏药材的质量。方法:采用电位滴定法、紫外分光光度法、硫酸-蒽酮法和酸性染料比色法对不同产地半夏药材中的总有机酸、氨基酸、多糖和生物碱含量进行测定,并采用聚类分析法对测定结果进行综合评价。结果:不同产地的半夏药材中总有机酸、氨基酸、多糖和生物碱的含量差异较大。结论:半夏药材的质量受产地影响较大,经聚类分析可将39份来源不同的半夏药材分为Ⅲ类,第Ⅰ类产地主要为云南、贵州地区,这类药材中总有机酸、氨基酸、多糖和生物碱的含量普遍偏低,综合质量较差;第Ⅱ类产地为甘肃,质量居中;第Ⅲ类产地为四川,这类药材中各主要成分的含量较高,综合质量较好。     

植物激素对半夏种子的发芽影响研究

为了探索植物激素对半夏种子的发芽影响,为半夏的品种选育和遗传改良提供技术参考,采用不同浓度的赤霉素(GA)、奈乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2-4-D)处半夏种子的方法研究了GA、NAA、IAA、2-4-D对半夏种子的发芽率、发芽势、活力指数。研究结果表明:一定浓度的GA、NAA、IAA、2-4-D对半夏种子的发芽率、发芽势、活力指数均具有一定的促进作用,当NAA处理浓度为50ppm时,半夏种子的发芽率可提高20%;当NAA处理浓度为75%时,半夏种子的发芽势可提高20%;当IAA处理浓度为50ppm时,半夏种子活力指数可提高1.05。     

半夏属植物凝集素基因片段克隆与序列分析

半夏属植物凝集素同其他天南星科植物凝集素一样,有3个甘露糖专一结合位点,且具显著的抗虫性.本研究根据已知掌叶半夏凝集素基因表达序列的相关信息设计引物,采用RT-PCR方法,分别从滴水珠、石蜘蛛、盾叶半夏、掌叶半夏、三叶半夏中克隆出长约530bp的凝集素基因片段.使用Genescan软件、ORF finder软件、Ex2PASy Proteomics Server软件对5个凝集素基因片段进行分析,结果表明:克隆出的滴水珠、石蜘蛛、盾叶半夏、掌叶半夏、三叶半夏凝集素基因片段分别编码107、171、170、170、170个氨基酸,在它们所编码的肽链中,都具有酪蛋白激酶II磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和N-糖基化位点三类不同的功能位点.但由于编码序列碱基的突变,引起肽链中的氨基酸发生变化,从而导致这五种植株的凝集素基因存在较高的多态性以及存在功能位点的差异.其凝集素基因多态性及功能位点的差异对凝集素功能的影响需进一步分析.本实验为克隆五种植物凝集素基因的表达序列与结构基因以及深入研究半夏属凝集素的功能提供了有意义的参考资料.     

半夏疏松愈伤组织诱导的研究

获得生长快速，疏松型愈伤组织是植物细胞悬浮培养的前提．用半夏叶片作外植体，采用单因子法，在添加不同浓度的2，4-D和BA的MS固体培养基上诱导半夏愈伤组织，比较愈伤组织的诱导率、性状和长势，其中当MS 3.0mg／L2，4-D 0．5mg／LBA时，愈伤组织诱导率和长势最好，为疏松愈伤组织系．结果表明：相同激素，不同浓度配比对愈伤组织诱导率、长势和发生的性状有明显的影响．     

半夏高效液相色谱指纹图谱鉴定

采用Agilent C18色谱柱,以甲醇一水为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm对半夏水提物进行高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测.选取鸟苷峰为参照峰,以相对保留时间和相对峰面积作为技术参数,确定9个峰作为鉴别半夏药材与半夏替用品和伪品的群体特征峰,相对保留时间分别为1.00、1.12、1.50,1.56、1.60、1.67、1.71、1.81和1.87.该结果为半夏药材的鉴定提供了重要参考.     

18srDNA为内参照的Real-Time-PCR方法检测半夏病毒

利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.以带病毒半夏母株为外植体培养的组培苗,其病毒含量以叶片中的相对较高,在块茎和愈伤组织中病毒相对较低.而ELISA方法在检测病毒含量低的样品时有假阴性结果;RT-PCR方法灵敏度可靠但不适宜精确量化.     

几种营养因子对半夏悬浮细胞生长及总生物碱形成的影响

研究了五种营养因子对半夏悬浮细胞生长及总生物碱形成的影响．结果表明,2％～5％的葡萄糖是最为适合的碳源;肌醇对细胞生长的促进效果不大,但100mg／L的肌醇对总生物碱的积累效果显著;钙盐和EDTA-Fe盐对细胞生长和总生物碱形成的影响比较显著,其最适浓度分别为1．8～3．0mmol／L和0．06mmol／L．     

三叶半夏细胞悬浮培养和植株再生的研究

三叶半夏幼嫩叶片在MS+2,4-D2.0mg/L+BA0.5mg/L培养基上一个月内可以诱导出愈伤组织.取颜色鲜黄的愈伤组织进行悬浮振荡培养,经3～4次继代培养得到分散性好的细胞悬浮系.悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养12～16d达对数生长期,细胞鲜重在第18d达到最大值.悬浮液pH值的变化在对数生长期同生长曲线一致.将细胞悬浮液过滤得到的小细胞团接种于MS+NAA0.2mg/L+BA1.0mg/L分化培养基上,40d分化出小植株.