桔青霉生产核酸酶P1发酵条件优化研究

选用经紫外线诱变的桔青霉茵株ZM-48，采用单因子和正交试验对生产核酸酶P1的发酵条件进行了优化研究，筛选得到最佳培养基组分为(除麸皮浸出汁为体积分数外，其余均为质量分数)：葡萄糖和麸皮浸出液各3％，蛋白胨和酵母膏各0．3％，K2HPO4和KH2PO4各0．05％，CaCl2 0．08％，MgSO4和MnSO4各0．049／6，ZnSO4 0．02％；发酵条件为：起始pH值5．69，接种量10％，温度34℃，摇床转速180r／min，发酵时间72h。在此优化条件下，桔青霉发酵液的核酸酶P1活力从实验初的140U／ml提高到240U／m1．     

扩展青霉碱性脂肪酶的纯化及N-端氨基酸序列分析

扩展青霉PF898的发酵液经硫酸铵沉淀、DE52纤维素离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤等步骤，其碱性脂肪酶的活性被纯化了79．3倍，回收率约15％，此活为76．9U／mg。纯化蛋白经SDS－PAGE和HPLC TSK－GEL G3000SW凝胶过滤分析显示其分子量约为28kDa。纯化蛋白经氨基酸序列测定仪分析表明，其N－端12个氨基酸的序列为：A－T－A－D－A－A－A－F－P－D－L－H。     

青霉PT95菌株渗出液的产生及理化性质的研究

实验观察发现,青霉PT95菌株渗出液的产生是由于菌丝互相挤压,紧密地缠绕在一起形成菌核,导致菌丝细胞液渗出,在菌落表面形成大量的渗出液.渗出液的物理和化学性质研究结果表明：渗出液的颜色随着培养时间的延长而逐渐变黄;渗出液的体积在第10天达到最大,然后迅速减少,第14天完全消失;干重随着培养时间的延长而减少.渗出液的pH值在5-6之间变化.渗出液中含有无机盐离子、氨、蛋白质、葡萄糖以及一些酶类.随着培养时间的延长,渗出液中的总蛋白、氨和无机盐离子（K^＋、Na^＋、Cl^-、P3^＋和Mg^2＋）的浓度都呈现明显下降趋势.只有Fe^2＋浓度和酸性磷酸酶活性表现为逐渐增高的趋势,葡萄糖在渗出液中含量很低,丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶活力变化不大.     

一种高效的柑橘绿霉菌基因敲除体系的构建

研究目的：提高柑橘绿霉菌基因敲除效率。创新要点：低效的基因敲除与丝状真菌非同源末端链接（NHEJ）的DNA双链断裂修复途径有关。为提高柑橘绿霉病菌基因敲除效率,本研究利用农杆菌介导的转化体系,获得NHEJ途径中关键因子Ku80的缺失突变体（△pdku80）。研究方法：与野生型菌株相比,以△PdKu80作为出发菌株,提高柑橘绿霉病菌PdbrlA和PdmpkA的基因敲除效率（见表1）。重要结论：△PdKu80的营养生长、产孢和致病性与野生型菌株基本一致。△PdKu80作为出发菌株,能显著提高柑橘绿霉菌的敲除效率。     

壳寡糖对扩展青霉菌体生长和毒素分泌量的影响

为了更加全面评价壳寡糖作为抑菌剂对病原菌生长和毒素合成之间的内在相关性,采用液体培养的方式,通过静止培养和摇床培养实验,探究了壳寡糖在不同温度培养条件下对扩展青霉菌体生长和展青霉素分泌的影响。结果表明,静止培养中5,0g/L壳寡糖可明显促进菌体生长,但抑制了毒素的分泌;静止培养和摇床培养实验中,相同浓度的壳寡糖在4,6,25℃培养条件下对菌体生长的影响不同,但是均抑制了毒素分泌;不同温度培养条件下,扩展青霉单位菌体产毒量的大小按培养温度排序为16,4,25℃。因此将壳寡糖用于果蔬采后病害控制时,需要注意贮藏的温度,同时需要考虑其对毒素分泌的影响,以期达到抑菌效果和食用安全性。该研究可为壳寡糖在果蔬采后病害控制中的应用提供参考。     

产转糖基β半乳糖苷酶菌株F3的鉴定 产酶条件及转糖基活性研究

菌株F3从土壤中筛选得到,具有产生转糖基β-半乳糖苷酶(β-galactosidase) 的特性。根据形态观察及18S rDNA序列分析,菌株F3被鉴定为扩张青霉(Penicillum expansum)。通过单因子试验和正交试验,对菌株F3产生转糖基β-半乳糖苷酶的培养基组成及发酵条件进行了优化。优化后的培养基组成为葡萄糖2%、酵母粉1%、蛋白胨1.5%、氯化钠0.3%。在初始pH 6.0,28?℃培养40?h时,其产酶量为2?245.2?U/L, 比优化前提高约3倍。菌株F3产生的转糖基β 半乳糖苷酶以pH 4.5缓冲液配制的30%乳糖为底物,50?℃反应24?h,低聚半乳糖产量为30.6%,其中80%以上为三糖。
     

The Penicillium chrysogenum antifungal protein PAF, a promising tool for the development of new antifungal therapies and fungal cell biology studies

In recent years the interest in antimicrobial proteins and peptides and their mode of action has been rapidly increasing due to their potential to prevent and combat microbial infections in all areas of life. A detailed knowledge about the function of such proteins is the most important requirement to consider them for future application. Our research in recent years has been focused on the low molecular weight, cysteine-rich and cationic antifungal protein PAF from Penicillium chrysogenum, which inhibits the growth of opportunistic zoo-pathogens including Aspergillus fumigatus, numerous plant-pathogenic fungi and the model organism Aspergillus nidulans. So far, the experimental results indicate that PAF elicits hyperpolarization of the plasma membrane and the activation of ion channels, followed by an increase in reactive oxygen species in the cell and the induction of an apoptosis-like phenotype. Detailed knowledge about the molecular mechanism of action of antifungal proteins such as PAF contributes to the development of new antimicrobial strategies that are urgently needed. Received 09 August 2007; received after revision 17 September 2007; accepted 19 September 2007     

青霉菌m8产胞外木聚糖酶的培养条件及其性质研究

适合青霉菌m8产胞外木聚糖酶的培养基含4．00％麦草粉,0．45％（NH4）2SO4,0．10％KH2PO4,0．05％MgSO4·7H2O,0．03％NaCl,0．30％Tween80,0．10％CaCO3在上述培养基中,28℃恒温振荡（120r／min）培养4～5d,木聚糖酶活力可达90u／mL左右．该酶的最适pH值为4．6,最适反应温度为55．5℃;该酶的耐热性比较强,可被K＋、Ca2＋、Mg2＋离子激活,而被Ag＋、Fe3＋、Cu2＋离子抑制;青霉菌ms的Km为5．0×10－2g／L．     

产植酸酶青霉菌株的诱变研究

对产植酸酶的青霉菌株Ａ２进行了诱变研究。分别以ＨＮＯ２－ＵＶ和ＵＶ－５Ｂｕ复合处理，进行了二轮诱变筛选后，得到高于Ａ２５０％以上的变异株６株，其中Ａ２－ＵＶ５９－２０株的酶活达０．８１２±０．０１９ｕ／ｍｌ，为出发菌株Ａ２的二倍多。     

一株高产果胶酶青霉菌株的筛选鉴定

从淤泥中筛选、分离纯化,得到了一株高产果胶酶的青霉菌株,编号为L5.根据培养特征、形态特征和内转录间隔区(ITS)序列分析,将L5菌株鉴定为草酸青霉菌(Penicillium oxalicum).该菌株在28℃,pH 6.0,摇床转速160 r/min条件下培养70 h,其果胶酶活性可达39 940 U.mL-1.min-1.