青霉DNA提取方法比较研究

比较了CTAB、SDS-CTAB和氯化苄等3种DNA提取方法提取青霉DNA的效果，结果表明：CTAB法和SDS-CTAB法只适合于部分青霉菌株的DNA提取，另外一些菌株则提取不出谱带清晰的DNA．而氯化苄法适合于供试的所有青霉菌株的DNA提取，所有菌株的DNA凝胶电泳图谱带清晰，效果很好．此外，还研究了液氮研磨和提取液pH对氯化苄法提取DNA效果的影响．     

草酸青霉对小麦苗的促生效果

从土壤和小麦根部分离到100多个草酸青霉菌,从中选出5个分离物,测定其对小麦苗的促生长作用。在温室进行4次试验。试验结果表明,在3次试验中,与对照相比,菌株Po-4l处理组麦苗高,并有统计上的显著差异。Po-41处理还在一个实验中,表现为提高幼苗鲜重,在另一实验中,提高根鲜重,并均有显著性差异。在4个试验中,Po-41处理组的所用其他指标,也都表现比对照好。不过,没有显著性差异。Po-41发酵液中植物激素种类及含量测定表明,在酸性条件下,吲哚乙酸含量高。     

响应面试验设计优化脂肪酶发酵培养基

采用响应面试验设计方法对卡门柏青霉（Penicillium camembertii Thom PG3）发酵生产脂肪酶的培养基进行优化。用部分因子分析法研究原始发酵培养基各成分对响应值的影响程度，发现脱脂豆粕和磷酸氢二铵的质量浓度对脂肪酶活性的影响显著。利用最陡爬坡法逼近最大响应区域。用中心组合设计确定脱脂豆粕和磷酸氢二铵的最优质量浓度。实验结果经过回归分析拟合出一个二次方程的数学模型。并且用实验所得的最优培养基进行发酵试验得到的响应值基本符合数学模型。酶活性比优化前提高了43％。     

扩展青霉碱性脂肪酶cDNA的克隆和表达

采用TRIzol试剂一步法所抽提的总RNA的D（260）／D（280）值为1.82,甲醛变性电泳呈现真核微生物所特有的28S rRNA和18S rRNA条带。根据扩展青霉所产碱性脂肪酶（Lip PE)N末端20个氨基酸残基序列和真核生物mRNA3‘端具有poly(A)等所提供的生物信息,采用RT－PCR技术和3‘－RACE法扩增了Lip PE成熟肽编码区和3‘非编码区的cDNA,直接将该PCR产物克隆至pUCm-T载体中。序列分析表明,该碱性脂肪酶含有258个氨基酸,其中保守的五肽序列为Gly-His-Ser-Leu-Gly。进一步采用Clot Tech公司的SMART^TM PCR cDNA文库构建试剂盒,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段,从而完成了Lip EP完整cDNA的分析测定。最后将编码完整脂肪酶蛋白的cDNA克隆至pGEX-5X-3表达载体中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,SDS－PAGE检测结果表明,所表达的GST－Lip EP融合蛋白分子质量约为53ku;免疫印迹（Western Blotting)技术证明了所克隆的cDNA确为编码扩展青霉WMC20718脂肪酶的基因。     

Penicillium sp.DS9701-09分泌的聚β-羟基丁酸酯(PHB)解聚酶的纯化及性质研究

以Penicillium sp.DS9701-09为研究对象,对其分泌的PHB解聚酶进行分离纯化和表征,通过超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀和SephadexG-100凝胶过滤,从发酵液中纯化了一种对PHB具有高效降解能力的解聚酶,纯化倍数为37.9,酶活力回收率为8.9%.经SDS-PAGE检测,确定酶蛋白的相对分子质量为41.5 kDa.酶反应的最适温度和pH分别为50℃和5.0,在50℃以下和pH=5.0～6.0之间酶的稳定性较好.金属离子对PHB解聚酶具有一定的抑制作用,降解酶对PHB的酶解产物主要是羟基丁酸二聚体.     

软珊瑚Sarcophyton tortuosum共生真菌penicillium sp.的代谢产物研究

 从三亚采集的软珊瑚Sarcophyton tortuosum体内分离得到一株共生真菌Penicillium sp.,该菌在GPY培养基中培养,菌体呈浅红色。对该菌菌体的代谢产物进行了研究,纯化得到1个新化合物：(4E,6E)-2-N-十六碳酰基-1,3-二羟基十六烷-4,6-二烯-鞘胺醇 (1),以及4个已知化合物1,7-二羟基-3-甲氧基-6-甲基-蒽醌（2）,1,7,8-三羟基-3-甲氧基-6-甲基-蒽醌（3）,1-羟基-3-甲氧基-6-甲基-蒽醌（4）,4,8-二甲基-1,5-二氧环辛烷-2,6-二酮（5）。化合物结构主要通过MS,NMR等波谱数据分析确定。化合物2,3,4,5〖STBZ〗为首次从海洋真菌中分离得到。     

新西兰青霉(Penicillium novae-zeelandiae)红色素的发酵条件优化及组分分析

对新西兰青霉(Penicillium novae-zeelandiae)红色素的发酵条件进行优化,并对其组分进行初步分析.研究结果表明,新西兰青霉红色素的最佳发酵条件是:用1mL的接种量(孢子悬液浓度为2×10~7 mL~(-1))接种于300mL的初始pH为6.0的PD培养基内(葡萄糖质量浓度为18g·L~(-1)),30℃150r·min~(-1)振荡培养40h,之后将其静置于30℃的培养箱内进行培养.经过优化后,红色素的最高产量达到2.834 4g·L~(-1).高效液相色谱和薄层层析分析表明,在260nm的检测波长下,该红色素分别在16.667min,18.120min,19.895min,21.022min处出现4个显著的吸收峰.     

一株产菌核青霉的生物学特性研究

从土壤样品中分离到73株青霉,从中筛选出能够产生菌核的Q1菌株.通过菌落形态和个体形态特征的观察,初步将Q1菌株鉴定到青霉属汤姆青霉系(Penicillium thomil series).实验结果表明Q1菌株形成菌核的最适温度为25℃,最适pH为6.5,麦芽汁培养基为最适培养基.供试的4种无机盐中,K_2HPO_4的单因子效应最好,说明K_2HPO_4对于Q1菌株的茼核形成有重要作用.培养基的碳氮源对Q1菌株的菌核生物量有较大影响,麦芽糖是最好的碳源,酵母膏是最好的氮源.培养基的含碳量保持在20 g/L,含氮量保持在0.24 g/L～0.48 g/L时,对Q1菌株菌核形成有利.     

利用RNA干扰沉默马尔尼菲青霉菌聚酮合酶基因的相关研究

在实验室前期建立的马尔尼菲青霉菌cDNA文库中筛到了1个马尔尼菲青霉菌聚酮合酶基因cps(Cit-rinin Polyketide Synthase),为了研究这个cps基因的功能,构建了RNAi表达盒,表达盒内具有目的基因编码序列422 bp的反向重复序列并被gus基因隔开.整个干扰载体借助根癌农杆菌体系成功转化马尔尼菲青霉菌,并受木糖的诱导启动子xy/p调控RNA干扰.研究发现cps基因沉默的转化子产生与母代红色菌株不同的白色菌株,类似基因敲除的表型,表明cps基因与该青霉菌色素的形成直接相关.     

藏香对空气微生物抑制作用初探

为了解藏香对空气中微生物的抑制作用,在室内对几种藏香就空气细菌总数的影响进行了初步测定,并采用滤纸片法对两种空气微生物进行了平板抑菌试验。结果显示：供试的五种藏香熏烟对于空气细菌总数均有一定的影响,且随着藏香点燃时间的延长,抑制率逐渐增加;供试藏香熏烟对待测的一株细菌及一株青霉菌均具皿内抑制作用,且随着熏烟采集时间的延长,抑菌圈基本呈增大趋势,其中扎什伦布寺藏香抑菌效果最明显,抑菌圈直径约为对照香的两倍。文章一方面为藏香抑菌功效提供理论依据,另一方面为寻找抑制病原微生物的藏香及原料奠定基础,对于藏香在疾病预防领域的开发与利用具有一定意义。