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661.
利用含花粉特异性启动子Lat52的质粒pLat52-7、含细胞毒素A链基因的质粒pGA968以及表达质粒载体pGA987,构建了含有Lat52特异性启动子和细胞毒素A链基因的表达载体,经酶切和PCR进行鉴定,证明所构建的重组载体即为实验所需的载体质粒,从而为下一步的转化模式植物拟南芥菜打下了基础。 相似文献
662.
PCR法快速鉴定阳性克隆实验的改进 总被引:1,自引:0,他引:1
分析了常规PCR扩增鉴定阳性克隆实验中存在的问题,进行了改进探索:反转录PCR(RT-PCR)获得目的基因片段,TA克隆连接质粒载体、转化大肠杆菌感受态细胞;利用目的基因的特异性引物,用菌液PCR法直接筛选重组克隆,在筛选的阳性菌液中扩增到与目的基因片段大小一致的阳性条带,与质粒PCR及酶切的阳性对照一致,验证了菌液PCR具有可靠性。实验证明,自身引物菌液PCR法用于定性筛选重组阳性克隆,是一种简便、快速、有效的方法。 相似文献
663.
为提高重组β-葡萄糖醛酸苷酶的底物特异性,通过易错PCR方法对其进行突变并构建突变体文库,利用薄层层析和高效液相色谱对突变文库进行筛选,获得了突变株PGUS(M51)E,其底物特异性提高了41%。突变酶的酶学特性研究发现,该突变酶的最适pH值和温度较PGUS-E无显著变化,酶活力下降了16.86%,T。值提高了5℃;序列分析结果表明:PGUS(M51)-E共发生5处突变,其中3处发生在糖基结合域。因此,利用定向进化策略能有效提高伊葡萄糖醛酸苷酶的底物识别特异性。 相似文献
664.