太湖溶藻细菌的分离及评价

从放置于太湖梅梁湾流域的除藻中试装置的人工介质上分离到一株溶藻细菌,经生理、生化和分子生物学鉴定,该株细菌属于芽孢杆菌属.经测定该菌具有较强的溶解铜绿微囊藻和降解微囊藻毒素LR(MC-LR)的功能:该菌(105个/mL)对铜绿微囊藻液(4.5×107个/mL)作用第16,32,48h的溶藻率分别为48%、63%和96%;对MC-LR(2.649μg/L)作用第18,36,54和72h藻毒素降解率分别为15%、29%、73%和100%.应用新建立的实时荧光定量PCR法(RTQ-PCR)对人工介质上的该溶藻芽孢杆菌丰度进行定量检测,结果显示,人工介质上该细菌的丰度约为1%,在7,8,9三个月中呈现递增趋势,其分布具有一定的时空变化规律.     

抗牙周病厌氧菌（Bg）单链抗体基因的构建与表达

从牙周病厌氧菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株出发，通过基因工程方法──ＰＣＲ技术，调出其抗体的重链和轻链基因可变区序列，体外重组后得到单链抗体ＳｃＦｖ（ｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎｆｒａｇｍｅｎｔｖａｒｉａｂｌｅ）片段，克隆到了ｐＣＡＮＴＡＢ５载体上，在ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＴＧｌ中得到了成功表达。     

小麦叶绿体DNA的提取与psbA基因的扩增

利用高离子强度，低ｐＨ值缓冲液匀浆细胞的方法，提取小麦叶绿体ＤＮＡ，并以此为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）对小麦叶绿体ｐｓｂＡ基因进行了特异性扩增。     

应用gE-MGB-TaqmanPCR方法检测冰冻动物组织样品

伪狂犬病毒是严重影响养猪业发展的重要病毒,病毒粒子具有较强的抵抗力。gE基因是伪狂犬病毒的毒力基因和gE-基因缺失疫苗的缺失基因。本实验应用gE-MGB-TaqmanPCR检测18份冰冻组织样品,阳性率为15/16(除2份弃去),与血清中和结合细胞MTT比色实验结果比较,符合率为100%。此方法以闭管的模式操作,减少了以后步骤污染的可能性,整个PCR检测过程少于2个小时。     

嗜水气单胞菌毒力与毒力基因分布的相关性

采用PCR扩增的方法对9株鱼源嗜水气单胞菌AEROM ONAS HYDROPHILA中的气溶素基因(AERA)、溶血素基因(HLYA)和丝氨酸蛋白酶基因(AHPA)进行了扩增。结果表明,6/9的A.HYDROPHILA中存在AERA基因,8/9的A.HYDROPHILA中存在HLYA基因,而在7/9的A.HYDROPHILA中检测到AHPA基因。通过比较基因检测的结果与嗜水气单胞菌对鲫鱼的致病性,发现AHPA阴性菌株是无毒株,强毒株都呈AERA HLYA AHPA 基因型。AERA HLYA AHPA 基因型是致病性嗜水气单胞菌主要的基因型。本研究首次发现AHPA阳性的嗜水气单胞菌皆为毒力菌株,并且发现AERA和AHPA基因存在相关性,探讨了嗜水气单胞菌致病性与毒力基因分布的关系。     

不同分离培养基对检测废水中微生物种群多样性的影响

用 3种不同培养基 (YPG、LB、WW)从焦化废水处理系统中分离培养细菌 ,并用 ERIC-PCR指纹分析的方法 ,对分离物的种群多样性进行了比较研究 .同一悬浮污泥样品在 YPG、LB和 WW培养基上的活菌计数结果分别为 1 .6× 1 0 6 CFU/ ml、7.0× 1 0 5CFU/ ml和 9.8× 1 0 5CFU/ ml.选取最适稀释度 (1 0 - 4) ,分别从 YPG、WW和 LB三种不同培养基平板上分离了 5 6、3 9和 60株菌株 .用 ERIC-PCR指纹图的方法分析这 1 5 5株菌株的多样性 ,结果显示 ,废水培养基 (WW)的选择性最强 ,3 9株分离物只显示 1 2种不同的指纹类型 ;而 YPG培养基的选择性相对较低 ,5 4株分离物中共有 3 0种不同的指纹类型 ,多样性明显 ;LB培养基上因有 2 8%的小菌落无法用 ERIC序列扩增 ,故不能用此方法对其多样性作有效评价 .至此 ,本次实验就分离焦化废水处理系统中的细菌及对分离物进行分子多样性的研究而言 ,选用 YPG培养基最合适 .     

编码普通野生稻磷酸盐转运蛋白基因片段的分离与克隆

以云南普通野生稻基因组DNA为模板，根据GeneBank中登记的编码小麦高亲和力磷酸转运蛋白基因保守序列设计一对特异引物，利用多聚酶链反应技术（PCR），扩增出目标基因（cwrpt)1002bp长度的基因片段并克隆到载体pGEM-T。经DIG标记探针杂交检测初筛，限制性内切酶酶切，PCR扩增，DNA序列分析与可能氨基酸序列同源性比较，此推定的氨基酸序列与小麦，水稻，拟南芥，番茄磷酸转运蛋白同源性很高，初步认为此基因片段为普通野生稻耐低磷胁迫相关磷酸盐转运蛋白的编码基因，获得全长序列与基因表达的进一步研究正在进行中。     

小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白7原核表达载体的构建

胰岛素样生长因子结合蛋白7（简称IGFBP7）广泛存在于多种正常的组织中，但在相应的肿瘤细胞中的含量极微。试验表明，它在肿瘤发生的不同阶段抑制其生长。采用RT－PCR和Nest-PCR方法，从正常的小鼠脾脏中扩增得到IGFBP7 cDNA片段，测序正确后，克隆于融合表达载体pRSETC中构建原核表达重组体。     

石蒜单染色体的显微分离及体外扩增

建立了石蒜单染色体的分离及体外扩增的方法。石蒜根尖经卡诺固定液固定后，再用果胶酶和纤维素酶酶解处理，制得标本，在倒置显微镜下，用自制的毛细管针挑取目的的染色体。将分离的石蒜染色体放入0．2mLEppedorf管中，经蛋白酶K处理后，进行DOP－PCR扩增，获得DNA片段。琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物的长度大约为100－5000bp。此法为构建石蒜单染色体基因组库和筛选其特异性探针奠定了基础。