ARMS实时PCR基因分型特异性的研究

以原癌基因K-ras基因12位密码子的4种基因型(野生型为GGT,突变型为AGT、TGT、CGT)质粒DNA为研究模型,采用SYBR GreenⅠ为实时PCR指示剂,进行ARMS实时PCR基因分型特异性的研究.结果表明在和模板匹配的ARMS引物3′端附近引入故意错配碱基,将ARMS引物浓度稀释10倍,并对传统三步PCR循环进行改良,即根据目的产物和引物二聚体的熔点差异,在传统延伸步骤之后增加一步恒温80℃检测荧光步骤,可消除引物二聚体的影响,使ARMS引物的特异性增强,得到清晰的基因分型结果.实验表明这种基于SYBR GreenⅠ的ARMS实时PCR基因分型方法,无需合成探针,实验设计简单,是一种快速、简便、经济、特异性好的基因分型方法,可推广用于其他基因的分型,并可望成为应用于临床的基因诊断技术之一.     

ARMS实时PCR基因分型特异性的研究

以原癌基因K—ras基因12位密码子的4种基因型(野生型为GGT，突变型为AGT、TGT、CGT)质粒DNA为研究模型．采用SYBR Green I为实时PCR指示剂，进行ARMS实时PCR基因分型特异性的研究．结果表明：在和模板匹配的ARMS引物3′端附近引人故意错配碱基．将ARMS引物浓度稀释10倍，并对传统三步PCR循环进行改良．即根据目的产物和引物二聚体的熔点差异．在传统延伸步骤之后增加一步恒温80℃检测荧光步骤。可消除引物二聚体的影响．使ARMS引物的特异性增强．得到清晰的基因分型结果．实验表明这种基于SYBR Green I的ARMS实时PCR基因分型方法，无需合成探针，实验设计简单．是一种快速、简便、经济、特异性好的基因分型方法，可推广用于其他基因的分型。并可望成为应用于临床的基因诊断技术之一．     

速差动力学光度法同时测定食品中的葡萄糖、果糖

葡萄糖、果糖在碱性介质中能将铁氰化钾还原褪色，其反应速率有差异．据此建立了径向基人工神经元网络(RBF-ANN)、偏最小二乘回归(PLS)及主成分回归(PCR)校正模型，可用于实际样品中葡萄糖与果糖的测定．     

人野生型抑癌基因PTEN的逆转录PCR法克隆及序列分析

以正常人胎盘组织总RNA为模板，通过优化引物和PCR条件，采用逆转录PCR法扩增出人野生型PTEN基因cDNA片段，并克隆到pMD18-T载体，获得重组子pMD-PTEN．序列分析表明，该cDNA长1212 bp，与GenBank中PTEN基因序列相比有3个碱基发生了变化，但全部为同义突变，证实获得了人野生型抑癌基因PTEN的cDNA克隆，为进一步构建原核表达载体及研究PTEN蛋白的抑癌效果、抑癌机理打下基础．     

暴发性鸭瘟的诊断

通过对四川德阳地区某养殖场的发病种鸭的流行病学调查，临床观察。病理剖检。病原分离及聚合酶链式反应确诊该养殖场鸭群暴发鸭瘟：并针对其场地的具体情况提出了相应的防疫建议。     

应用地高辛标记的PCR-ELISA技术快速检测转基因水稻

应用地高辛标记的PcR—ELISA(Dig-PcR—ELISA)技术进行转基因水稻检测研究。针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子(p35S)、胭脂碱合成酶(NOS)终止子(Thos)，筛选标记潮霉素磷酸转移酶基因(hpt,hph)、β—葡萄糖苷酸酶基因(gus)、抗草丁膦除草剂基因(bar)，建立Dig—PcR—ELISA检测方法；能进行半定量检测，敏感性试验表明，Dig—ELISA检测比常规电泳检测可提高敏感性达1000倍，可检测含量达0．1％的GM0样品。全过程可在24h内完成。     

酵母海藻糖合成酶基因植物表达载体的构建

以从原核表达载体中酶切得到的tps1基因为模板，设计适当的引物，利用PCR技术，克隆出核苷酸数大约1.5k的片段，PCR产物经回收后，与PCAMBIAI303载体连接并转化大肠杆菌DH5a，阳性重组子经PCR鉴定，结果表明已获得海藻糖磷酸合成酶基因的植物表达载体。     

条斑紫菜丝状孢子体cDNA文库构建及抗病相关基因鉴定

经过微量总RNA抽提、cDNA合成、cDNA扩增和克隆等步骤，构建了微量条斑紫菜丝状孢子体cDNA库，并进行了小规模表达序列标签分析。从170条标签序列中鉴定出6条抗病相关基因序列。这些序列可用于研制抗病单核苷酸多态性标记，辅助紫菜抗性遗传改良。     

8种唇口目苔藓动物的分子系统发生--基于28S rRNA基因的证据

对我国沿海较为常见的8种唇口目苔藓动物的28S rRNA基因的部分序列进行了PCR扩增和序列测定。用排序软件进行序列比对后，以腕足动物为外组群，运用MEGA遗传分析软件以邻接法（NJ）和最大似然法（MP）构建了系统发生树。结果表明，有囊亚目的4种苔藓动物（刺轴拟缘孔苔虫、假缘孔苔虫、拟迷误裂孔苔虫、仿分胞苔虫）构成一个单系群；无囊亚目则是一个复系数，其中2种草苔虫（匍茎草苔虫、多室草苔虫）为单系发生，而大室膜孔苔虫和艳丽琥珀苔虫的系统发生位置尚需进一步探讨。     

如何解除PCR反应中的抑制现象

多种因素均能影响PCR反应的顺利进行，尤其是菌体中的各种杂蛋白以及在模板提取过程中混入的各种化学试剂，对TaqDNA聚合酶均有很强的抑制作用，本文以扩增细菌的16SrDNA为例，说明了这些成分对PCR的抑制，同时提出了克服不利因素的方法。