华重楼极其常见混伪品的多重PCR快速鉴定体系的建立和应用

目的：建立快速鉴定重楼属中药材华重楼极其常见混伪品的多重PCR方法。方法：收集华重楼,其常见混种栽培种的根茎,叶片及种子样品,对华重楼极其常见混伪品的rDNA-ITS片段进行对比分析;基于重楼属植物rDNA-ITS的SNP位点,针对华重楼,球药隔重楼,黑籽重楼设计3组共6条特异性引物,建立并优化多重PCR反应体系;应用已建立的多重PCR方法对华重楼,球药隔重楼,黑籽重楼及常见的其他重楼属混伪品进行鉴别,验证方法的准确性。通过观察电泳检测扩增产物条带的位置及数量实现快速检测的目的。结果：建立的多重PCR鉴定方法能准确地对华重楼极其常见重楼属混杂栽培种进行快速鉴别。结论：多重PCR方法特异性强,灵敏度高,高效快速,可用于多基源中药材及同属近缘种的快速鉴别,同时为中药材的种质资源鉴定提供可行的方法。     

杜氏盐藻hsp90基因的克隆及胁迫条件下表达量的变化

利用RACE方法首次从杜氏盐藻中获得hsp90基因全长序列,并将其提交至Gene-Bank(Accession No:JQ735968).进一步研究表明,在热激与盐胁迫条件下杜氏盐藻hsp90基因的转录水平及蛋白表达水平出现明显上调,暗示该基因可能是杜氏盐藻细胞中与逆境响应相关的调控元件.     

中华鳖病原菌菌种的分离鉴定及多重PCR的初步建立

对患病中华鳖心脏、肝脏、肠道中分离得到的疑似致病菌株进行常规生理生化鉴定,同时采用分子生物学鉴定方法,设计细菌16srDNA保守区通用引物,进行基因扩增及序列比对,建立并优化多重PCR反应条件.分离鉴定出4种病原菌:迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda,Et)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,Av)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii,Cf).多重PCR检测体系敏感性与特异性良好,证明多重PCR是一种能快速准确鉴定多种中华鳖致病菌的方法,且操作简单、灵敏度高、稳定性和重复性好.     

耐甲氧西林葡萄球菌临床检测方法评价

目的评价三种方法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的可靠性和临床实用性.方法根据NCCLS的判定标准,采用mecA基因PCR扩增法检测临床分离的85株金黄色葡萄球菌和80株凝固酶阴性葡萄球菌,并与苯唑西林琼脂稀释法和头孢西丁纸片扩散法进行比较.结果苯唑西林琼脂稀释法筛选MRSA(MRCNS)的检出率分别93.75%(95.35%)、95.24%(54.05%);头孢西丁纸片扩散法筛选MRSA(MRCNS)的检出率分别为98.43%(95.35%、)、90.48%(64.86%).结论对于MRSA的检测,选用PCR扩增法,该法具有快速、灵敏和特异性强的特点,且纸片法与PCR扩增法检测结果符合率很高;对于MRCNS的检测,通过表型法筛选后,最好能得到mecA基因的确证.     

回归方程在转基因水稻Bt基因定量检测中引入的不确定度评估

为了把测试分析误差控制在允许范围内,保证测试结果有一定的精密度和准确度,使分析数据在给定的置信水平内达到要求的质量,根据JJFl059.1999《测量不确定度评定与表示》技术规范,采用抗虫转Bt基因水稻定量PCR方法,测试"科丰6号"样品Bt基因的含量,初步评估了内标基因GOX和外源基因Bt的校准曲线输出值的不确定度.检测结果平均值为5.3%,接近约定真值;回归方程在转基因水稻Bt基因定量检测中引入的不确定度评估结果为0.027.Ct值的随机变化和标准曲线的非线性是回归方程引入的不确定度的主要因素,因此,在转基因生物安全定量结果不确定度评定中,应重点讨论Ct值变化与标准曲线非线性的偏离.     

新疆部分地区3种鸡肿瘤性疾病的初步调查

为了调查新疆部分地区蛋鸡场疑似肿瘤性疾病,初步了解鸡肿瘤性疾病感染与发病情况,从喀什、阿克苏、玛纳斯等地区的7个养殖场抽选30份疑似肿瘤性疾病病例,进行现场剖解,采用病理组织学方法,ELISA抗原检测法,病原核酸鉴定法对其进行鉴别研究。结果显示：ELISA法检出马立克氏病、禽白血病及禽网状内皮组织增生症的阳性检出率分别为10．00％、76．66％、50．00％。其中禽白血病及禽网状内皮组织增生症的双重感染率为36．66％;PCR方法只检出马立克氏病为阳性。新疆部分地区商品蛋鸡场存在3种鸡肿瘤性疾病的感染,但引发肿瘤病变是以马立克氏病毒为主,调查结果为该类疾病的防控措施提供参考依据。     

单核细胞增生李斯特菌三种检测方法的比较

目的:通过比较国标法、real-time PCR法和LAMP方法,得到适合基层实验室快速检测单核细胞增生李斯特菌的方法。方法:分别用国标法、real-time PCR法和环介导的等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)法检测李斯特菌,并进行方法比较。结果:三种方法对单增李斯特菌的检测结果一致.国标法整个检测过程需5~7 d;real-time PCR法实验条件要求高,成本高,检测需1.5~2.5 d;LAMP法实验条件低,成本低,检测时限与real-time PCR相同。结论:LAMP法检测单增李斯特菌灵敏度高、特异性强、快速高效和低成本,适合基层实验室应急检测和现场监测使用。     

恩施悬棺人骨mtDNA初步分析

本文以恩施宋代悬棺的骨骼或牙齿样品为对象,经过一系列的处理,获得并扩增了mtDNA的HVSI区的部分序列,通过几个实验初步认定是古DNA.同时通过与部分现代人mtDNA数据的比较参照,对所研究样品单倍群归属进行了初步确定,发现他们主要属于南方类型,但也可能有北方成分.     

奶样无乳链球菌PCR检测方法敏感性研究

意义无乳链球菌是引起牛临床或亚临床乳腺炎主要病原菌,研究PCR奶样检测方法的敏感性,对探索病原无乳链球菌的简易、快速诊断具有重要意义.目的通过对含细菌数不同奶样的PCR扩增试验的观察和比较研究,探索其检测方法的敏感度.方法常规检测方法初选奶样,然后对其病原菌奶样进行培养、增菌和生化鉴定,筛选出牛无乳链球菌.将得到的无乳链球菌按10个稀释度奶样进行稀释,以标准该菌株作为阳性对照,分别进行PCR扩增、电泳.结果基于编码16S rRNA亚基的编码基因序列设计引物的PCR方法具有独特敏感性,可以检测到1ml生奶样中的一个细菌.     

人源抗HBsAg单链抗体与干扰素嵌合基因的构建及表达

采用重叠PCR技术，将人源性抗HBsAg单链抗体基因与干扰素γ基因用柔性肽段碱基连接成单一基因。序列测定结果表明，克隆的基因与理论上的一致，并将此基因成功构建到酵母表达载体pPICZa上，进而转化到巴斯德毕赤酵母(Pichia Pastoris)X33中。筛选出的菌落经甲醇诱导培养，对上清液进行SDS—PAGE和WESTERN BLOT分析，在42000处可见蛋白表达带，这为进一步纯化目的蛋白和提高目的蛋白表达水平奠定了基础。