石油微生物16SrRNA基因PCR扩增研究

掌握石油微生物的16SrRNA基因保守区的扩增方法是先进分子水平鉴定微生物种类一种有效的实验方法。通过研究利用分子生物技术提高对石油微生物的了解,进行未来对石油的开采,摸索出石油微生物的DNA提取方法,16SrRNA基因的PCR扩增反应条件的研究进而初步鉴定菌种类型。本文是以大庆采油三厂分离纯化的石油微生物为实验材料,摸索合适的石油微生物基因组DNA的提取方法及合适的PCR扩增条件和反应体系,在本实验室后续开展石油微生物在分子水平方面的实践指导中有重要意义。     

p53 基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

摘要: 目的为了繁育和鉴定p53 基因敲除小鼠,将引进的杂合子小鼠进行饲养繁殖,杂合子用于继续保种。方法 对其幼鼠剪尾提取基因组DNA,采用PCR 方法进行基因型鉴定。结果对引进小鼠已成功饲养和繁殖,并得到 纯合基因缺失型小鼠。结论正确的饲养、繁殖及基因鉴定方法对于基因敲除小鼠的获得和保种具有重要的意 义。     

利用降落PCR扩增KMT-1基因

用试剂盒提取一株牦牛源多杀性巴氏杆菌(C47-8)基因组DNA,同时应用降落PCR和普通PCR扩增KMT-1基因片段。结果表明:降落PCR法扩增出KMT-1基因片段的特异性条带与目的片段长度一致,普通PCR法没有结果。相同的反应体系,降落PCR程序能明显提高PCR的特异性,可用于扩增普通PCR难以扩增的基因片段。     

两种浓缩方法在水样脊髓灰质病毒检测中的应用

水样中病毒颗粒的有效浓缩和富集是病毒检测的首要任务.分别应用氯化钠-氯化铝沉淀法和滤膜吸附法,对模拟水样和实际水样的脊髓灰质病毒进行浓缩分离.经过核酸提取后,通过RT-nest-PCR分子生物学技术扩增特异性核酸片段检测病毒,结果发现,两种浓缩方法对水样中的脊髓灰质病毒都能有效地回收富集及检测.通过计算,分别检测到污水处理厂进水口中病毒存在所用水样的有效体积,氯化钠-氯化铝沉淀法为3.5 mL,滤膜吸附法为2.1 mL.应用氯化钠-氯化铝沉淀法对另外3个污水处理厂水样的病毒检测发现,进水口和出水口均有脊髓灰质病毒的存在.另外,制备了包含脊髓灰质病毒特异性核酸片段的阳性质粒标准品,为开展水体环境中有害病毒的检测工作奠定研究基础.     

通过母血中胎儿表观遗传学标记物预测子痫前期的探讨

目的通过实时荧光定量PCR法测定孕妇血浆中胎儿表观遗传学标记物非甲基化丝氨酸蛋白酶抑制剂B5（un—methylated serpin peptidase inhibitor,clade B,member 5,U—maspin）基因的含量,初步探讨母血浆中U—maspin基因的定量能否预测子痫的发生．方法随机选择子痫前期孕妇40例为实验组,其中轻度和重度患者各20例,以健康同期妊娠妇女20例为对照组．提取血浆游离DNA,用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测各组血浆标本中U-maspin基因的含量．结果子痫前期组孕妇血浆中U—maspin的水平高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,轻、重度子痫前期患者平均浓度有差异,分别为1402．05copies／mL及2189．60copies／mL（P〈0．05）．结论U—maspin基因作为孕妇血浆中游离的胎儿特异性表观遗传学标记物,可以预测子痫的发生．     

一种适用于空间的管道式PCR装置的设计与实现

空间微生物原位检测系统需要满足微型化、自动化和易于集成的空间使用要求,而商用PCR仪不能满足这些需求。为此,本文设计并实现了一种无芯片的PCR微型装置,采用蠕动泵实现系统的自动进样,采用半导体制冷器实现快速精确温控,反应管道采用硅胶管,制作简单、生物相容性好、便于清洗,满足微型化、高可靠性、易于系统集成的空间需求。该装置采用的方法为将PCR仪集成到自动化的检测仪器提供了思路。     

一种新细胞因子基因真核表达载体的构建和鉴定

采用PCR方法,以人胎盘cDNA文库为模板,扩增出人B淋巴细胞刺激因子（hBLys）,经克隆测序及纯化后,再以此PCR产物为模板,用Nest-PCR方法进一步扩增得到B淋巴细胞刺激因子的胞膜外功能区域（hsBLyS）的DNA片段,纯化、克隆测定鉴定后,扩增并纯化粒,经酶切、纯化后克隆到真核表达质粒pcDNA3.1（＋）中,构成真核表达载体pcDNA3．1（＋）／hsBLyS。结果表明：用此方法制备得到的hsBLyS的DNA片段经测序鉴定与文献报道相符,构建的真核表达载体经鉴定也达到了预计的结果。     

BHIVgag—pol基因在MT—4细胞中的表达

以HIV－1 HXBc2毒株为遗传背景,通过DNA重组技术构建出嵌合有BIV R29gag-pol基因的重组病毒BHIV cDNA。BHIV cDNA经电转染导入人源细胞MT－4后,分别收集第1d到第7d的细胞和培养液上清进行检测。RT－PCR分析证实BHIV的gag基因已得到转录;反转录酶活性测定表明,BHIV中源于BIV的反转录酶已得到正确转录、翻译并加工成熟。这些结果说明重组病毒BHIV cDNA中HIV控制下的BIVgag-pol基因能够的MT－4细胞内正确表达。     

利用多重PCR进行鸡全基因组扫描

应用多重PCR结合半自动化荧光标记DNA分析技术从328个微卫星标记中筛选出分布于23条常染色体及1条性染色体(Z染色体)、覆盖3080cM、包含在30个引物组合中的170个多态微卫星标记,平均标记密度为18cM,并优化了这些引物组合的反应条件.筛选出的这些多态微卫星标记在本实验群体中符合Mendel遗传定律,可应用于鸡的连锁图谱分析及重要经济数量性状的定位研究,     

一步法RT—PCR检测石蜡包埋滑膜肉瘤中SYT—SSX融合基因的表达

运用一步法RT－PCR技术检测14例石蜡包埋滑膜肉瘤组织中t(x;18）(p11.2;q11.2）染色体易位所致的融合基因SYT－SSXmRNA的表达,尤文氏肉瘤和恶性黑色素瘤各一例做对照。结果表明,14例滑膜肉瘤中12例有SYT－SSX融合基因的表达（85．7％）,尤文氏肉瘤和恶性黑色素瘤均有阴性。