血液痕迹中DNA抽提方法的比较与优化

本文总结了6种DNA抽提方法,进行部分优化后对长时间离体血液痕迹中的DNA进行提取对比.结果表明:优化后的CTAB法可以简单、快速、高效地从凝血块儿中获得高纯度的DNA,并可满足后续PCR扩增和分子标记等分子遗传学研究.     

荧光定量PCR测定木糖醇亚硒酸酯诱导人肝癌细胞系SMMC-7221细胞凋亡的机制研究

木糖醇亚硒酸酯是一种新合成的化合物,其能够引发人肝癌细胞系SMMC-7221细胞凋亡并且其引发SMMC-7221细胞凋亡伴随着谷胱甘肽的消耗.为了提供更多关于木糖醇亚硒酸酯的抗癌机制研究,该实验用荧光定量PCR技术检测经该化合物处理后的SMMC-7221细胞中caspase-3、caspase-8、caspase-9这3个基因mRNA水平的变化.在经0.5 mg/L 或1 mg/L木糖醇亚硒酸酯分别处理SMMC-7221细胞12、24、36、48 h后,与对照组相比,caspase-3的mRNA表达水平从12～48 h内显著上调;此外,caspase-8和caspase-9的mRNA表达水平仅在24 h显著变化,而在其他时间点与对照组相比变化不明显.与对照组相比,caspase-3、caspase-8、caspase-9的mRNA表达在12 h上升,在24 h到达最大值,在36 h和48 h逐渐下降.木糖醇亚硒酸酯作为一个能够诱导细胞凋亡的有应用前景的抗癌药物,可能是通过内源性和外源性信号通路引发SMMC-7221细胞凋亡,其深层次的抗癌机制需要更进一步的研究.     

牛羊细粒棘球蚴病现场快速检测方法的建立及应用

建立了一种基于恒温隔绝PCR(Insulated isothermal PCR,ii PCR)技术现场检测牛羊包虫病的方法.结果显示,该方法只能检出细粒棘球绦虫,对多房棘球绦虫、肝片吸虫、细颈囊尾蚴、前后盘吸虫、日本血吸虫、金黄色葡萄球菌、伪结核杆菌无关病原不检出;检测下限为100个拷贝,重复性好.对55份牦牛源包囊样本和70份羊源包囊样本的检出率分别为61.8和4.3%,与文献报道的检测方法的符合率分别为100%;本研究建立的ii PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,从核酸提取到报告检测结果仅需1小时,操作方便,可现场使用,为牛羊包虫病的现场快速诊断提供有力的工具.     

E2F3基因原核表达载体的构建

为研究E2F3转录因子的结构、功能及其与肿瘤发生的联系,从人组织中克隆E2F3基因,通过巢氏PCR和桥联PCR成功构建了E2F3的原核表达载体,实现了对E2F3基因的原核表达,并用Western检测了重组蛋白。研究中发现E2F3cDNA编码序列中含有一段富含GC的区域,该区域对E2F3基因的PCR扩增影响很大。     

犬附红细胞体病PCR检测方法的建立及应用

根据Genbank中已经发表的犬附红细胞体16sRNA基因序列设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增出一条与目的片段大小一致,约630bp的基因片段,建立了PCR快速检测方法．以建立的PCR检测方法及瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法为基础对20例犬附红细胞体病例进行检测,比较四种方法的检出率．结果表明：建立的PCR检测方法的检出率略高于吖啶橙染色,明显高于瑞氏、姬姆萨染色,进而证明建立的PCR检测方法可用于犬附红细胞体的快速诊断和流行病学调查．     

苯酚降解菌的富集、分离与鉴定

 用苯酚作为唯一碳源富集培养化工厂、废水处理厂、造纸废水样品,从中分离得到4株具有苯酚降解能力的菌株.用编码苯酚羟化酶大亚基基因的保守序列设计特异引物进行检测,共有3株菌扩增出相应的产物.对其中降解能力最强的1株菌的16SrDNA序列进行系统发育分析,确定其为假单胞菌.与以前方法相比,本方法可检测到目前几乎所有的苯酚羟化酶基因,从而实现快速、准确、方便地从苯酚污染的环境中检测苯酚降解菌.     

检测克氏原螯虾白斑综合征病毒(WSSV)的巢式PCR方法的建立与初步应用

根据GenBank中已发表的3株WSSV的VP28基因序列,设计了4条特异性引物．通过筛选最佳反应条件和试剂工作浓度,建立了检测克氏原螯虾WSSV的巢式PCR方法．该方法第一轮扩增的敏感性是36ng,第二轮扩增的敏感性是36Pg．在对9份克氏原螯虾临床病料的巢式PCR检测中,用引物W1和W2做第一轮扩增,未检测到阳性病例;用引物S1和S2做第二轮扩增,检测到一例WSSV阳性病例．以上结果表明：对于检测克氏原螯虾WSSV,巢式PCR较一步PCR具有更高的检测灵敏度和应用前景．     

Subtyping of type A influenza by sequencing the variable regions of HA gene specifically amplified with RT-PCR

The outbreak of a novel influenza A （H1N1） virus across the globe poses a threat to human health. It is of paramount importance to develop a rapid, reliable and inexpensive diagnostic procedure. Based on the bioinformatic information from public database, primers specific for influenza A virus surface protein haemagglutinin （HA） of several subtypes （including H1, H2, H3, H5, H7 and H9） were designed. Primer-specific PCR products were subiected to sequencing for accurately distinguishing H1 and H3 subtypes from others. This sequencing-based detection method will not only be applied to rapid detection and simultaneous subtype identification of new influenza A virus H1N1, but also provide the strategies to monitor other new types of influenza virus with explosive potential.     

婴儿肝炎综合征患儿CMV的动态监测及临床意义

目的:探讨应用实时荧光定量PCR法(Real Time Quantitative PCR)检测婴儿尿液中CMV-DNA含量在诊断和动态监测婴儿CMV感染中的意义。方法:应用PE5700全自动PCR扩增分析仪检测80例婴肝患儿和40例对照组患儿尿标本中HCMV-DNA的拷贝数及HCMV-IgM,并对其中48例CMV肝炎患儿在出院半年和一年后进行尿标本HCMV-DNA含量和肝功的动态监测。结果80例患儿尿标本HCMV-DNA阳性率为63.8%(51/80),40例正常对照婴儿尿标本中HCMV-DNA阳性率为10%(4/40),统计学分析表明:婴肝患儿组HCMV-DNA阳性率明显高于对照组,差异有显著性(=31.032,P<0.01);80例患儿血HCMV-IgM阳性率为46.25%(37/80),40例正常对照儿童HCMV-IgM阳性率为2.5%(1/40),统计学分析表明婴肝患儿组血HCMV-IgM阳性率明显高于对照组,差异有显著性(=23.588,P<0.01);通过对出院后的48例CMV感染的婴肝患儿进行一年的随访,发现部分患儿肝功恢复正常后,HCMV不能完全转阴,并有复发的可能性,所以对CMV感染婴肝患儿...     

黄犏牛与黄牛b-Boule基因编码区序列、结构、表达模式和睾丸组织表达水平的差异分析

Boule是动物精母细胞减数分裂过程中的必需蛋白,与精子发生减数分裂阻滞、雄性不育等密切相关.文中通过PCR扩增和克隆测序获得黄犏牛b-Boule基因的cDNA全序列,生物信息学分析发现黄犏牛b-Boule基因编码区全长885 bp,具有典型的RNA识别基序(RRM)和DAZ重复序列;与黄牛氨基酸序列的同源性为98.65%,仅在C-末端有4个氨基酸的差异,典型结构域的氨基酸序列和高级结构相同.RT-PCR发现b-Boule基因在黄牛和黄犏牛睾丸组织中特异表达,原位杂交显示b-Boule存在于初级精母细胞和次级精母细胞的细胞质中.荧光定量PCR发现黄牛睾丸组织中b-Boule基因表达水平显著高于黄犏牛(P<0.05),且黄犏牛精子发生减数分裂阻滞的表型与人、小鼠BDule基因表达缺失或降低引起的不育表型一致,因此推测b-Boule基因可能在精母细胞减数分裂过程中发挥重要作用,且与黄犏牛雄性不育有密切的关系.