鼠伤寒沙门氏菌JL65色氨酸合酶trpB基因的克隆、测序和相关特性的研究

用ＰＣＲ方法从鼠伤寒沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ＪＬ６５染色体ＤＮＡ中扩 增了ｔｒｐＢ基因片段,克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ　Ⅱ ＳＫ（＋）质粒上,并用双脱氧未端终止法测定了其 核苷酸序列．ＪＬ６５ｔｒｐＢ基因和ＷＴ Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　ｔｒｐＢ基因作比较后,发现仅有３处的核苷 酸差异,其中ｔｒｐＢ基因在的１００位由Ｃ突变为Ａ,１１１位由Ｇ突变为Ａ,１０３０位由Ｇ突变为 Ａ,导致３４位氨基酸残基Ａｒｇ变为Ｓｅｒ,３４４位的Ｇｌｙ变为Ａｒｇ,氨基酸性质均发生变化．说明 是 ｔｒｐＢ１００,ｔｒｐＢ１０３０两处核苷酸的突变使ＪＬ６５的β亚基发生改变,并可能导致ＪＬ６５的冷 敏感．根据互补试验及酶活测定结果,初步将ＪＬ６５ｔｒｐＢ归类于“可修复”的错义突变型．     

破囊壶菌及其廿二碳六烯酸生物合成

破囊壶菌是原生生物，7属42种，其中Schizochytrium和Thraustochytrium某些种的廿二碳六烯酸含量很高，是充满发展前景的可以实现工业化生产廿二碳六烯酸的微生物．尽管存在争议，一般认为，廿二碳六烯酸由廿二碳五烯酸在△4-位脱氢而来，现已在Thraustochytrium中鉴定得编码△4-去饱和酶的cDNA序列Fad4．Schizochytrium却可能以多酮化物合成酶催化廿二碳六烯酸的生物合成．     

马尾松银松素合酶基因转化双子叶植物表达载体的构建及鉴定

以马尾松为材料,在获得马尾松银松素合酶基因的基础上,构建了该基因转化双子叶植物的表达载体,该表达载体含有35S启动子和NOS终止子,能启动基因在双子叶植物中高效地表达.设计并合成分别含有Bgl和BstE酶切位点的上下游引物,通过PCR反应扩增出含有该酶切位点的银松素合酶基因cDNA全序列,酶切后连接到pCAMBIA1301植物表达载体上.经PCR鉴定、酶切分析及DNA测序证实cDNA片段大小、序列以及读码框的正确性.最后通过电击将表达载体转化农杆菌LBA4404,为进一步研究银松素合酶基因的功能奠定基础.     

抗结核化合物的设计与合成

针对日益突出的结核病(TB)药物耐药性问题,对抗结核药物进行了合理的修饰,以增强其结核病治疗的效果.以异烟肼(INH)为原料,与不同的异氰酸酯反应,成功制备了9种新型的不对称取代脲类化合物,这类脲桥结构对结核分枝杆菌(MTB)中的半胱氨酸合酶具有抑制作用,合成的产物经质谱(MS)、氢核磁共振谱(~1H NMR)等方法进行了分析表征.     

抗人前列腺素D合成酶嵌合抗体基因的构建

采用RT-PCR技术,从1株稳定分泌抗人L-PGDS单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞中扩增抗体的可变区基因,得2个Vk和1个VH．序列经Igblast比对分析,其中1个VK为鼠骨髓瘤细胞系内固有的无功能基因;另-Vk和VH具备鼠抗体可变区特征,为抗体功能基因．经双酶切,将抗体可变区功能基因分别与表达载体pAG4622、pAH4604中的人IgG相应恒定区相连,构建成抗人L-PGDS的人-鼠嵌合抗体基因。     

<Emphasis Type="Italic">Ginkgo biloba</Emphasis> extract EGb<Superscript>®</Superscript> 761 increases endothelial nitric oxide production <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis> and <Emphasis Type="Italic">in vivo</Emphasis>

Beneficial effects of Ginkgo biloba on peripheral arterial occlusive disease have been repeatedly shown in clinical trials, especially after use of EGb 761, a standardized special extract. Since the underlying mechanisms are widely unknown, we aimed to elucidate the molecular basis on which EGb 761 protects against endothelial dysfunction in vitro and in vivo. Application of therapeutically feasible doses of EGb 761 for 48 h caused endothelial nitric oxide (NO) production by increasing endothelial nitric oxide synthase (eNOS) promoter activity and eNOS expression in vitro. Phosphorylation of eNOS at a site typical for Akt (Ser 1177) was acutely enhanced by treatment with EGb 761, as was Akt phosphorylation at Ser 478. Furthermore, the extract caused acute relaxation of isolated aortic rings and NO-dependent reduction of blood pressure in vivo in rats. These influences on eNOS represent a putative molecular basis for the protective cardiovascular properties of EGb 761.     

大鼠胃幽门括约肌NOS阳性神经元的分布特异性

目的 :研究 NO能神经元在大鼠幽门括约肌的特异性分布状态及其功能。方法 :采用还原型辅酶 组织化学技术 ,在冰冻切片和胃—幽门—十二指肠连续全层标本上显示 NOS阳性神经元成分。结果 :幽门括约肌粘膜下丛及肌间神经丛均有 NOS阳性神经元分布。在与括约肌紧连的胃和小肠 ,胃的神经丛大而丛间距较大 ,神经纤维粗而稀疏 ,小肠神经丛小而密集 ,纤维较细。胃幽门括约肌大弯侧神经元胞体和神经纤维均明显比小弯侧多 ,而前、后壁之间无明显差异。结果 :幽门括约肌舒缩功能活动除接受两侧胃肠的神经及其递质调控外 ,而其自身含有内在的 NO能神经元也具有直接的自主活动功能。     

血清乙肝病毒DNA含量与一氧化氮和一氧化氮合酶水平的相关性研究

目的:探讨乙型肝炎患者血清中乙肝病毒DNA、谷丙转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)与一氧化氮(NitricOxide,NO)和一氧化氮合酶(Nitricoxidesynthase,NOS)水平的相关性,以求证实乙肝病毒在体内复制,损伤肝细胞,引起慢性纤维化和肝硬变乃至发生肝癌的疾病进程中,NO和NOS所起的作用及意义。方法:选取42例慢性持续性肝炎(CPH)患者,30例慢性活动性肝炎(CAH)患者,31例乙型肝炎肝硬化(HC)患者,19例乙肝病毒相关性肝癌(HCC)患者;30例健康体检者作为对照。分别运用荧光定量PCR技术和化学分析法对上述病例的血样同时进行乙肝病毒DNA含量、ALT、TBA、NO和NOS水平的检测。结果:对照组、HBV-DNA阴性组与HBV-DNA低浓度水平组之间的NO、NOS的水平无显著性差异(P>0.05)。HBV-DNA低浓度水平组与中、高浓度组之间的NO、NOS水平有显著性差异(P<0.05)。慢性活动性肝炎组,乙型肝炎肝硬化组,乙肝病毒相关性肝癌组与对照组间HBV-DNA、ALT、TBA、NO、NOS含量之间均存在显著性差异(P<0.05)。慢性持续性肝炎组的NO水平则低于正常对照组(P<0.05)。HBV-DNA的含量(取对数值)与NO水平呈正相关(r=0.687)。结论:NO在乙肝病毒感染所导致的一系列连锁疾病的多个阶段扮演着重要角色,在不同类型的乙肝患者中NO水平的高低与病毒复制强弱和肝细胞损伤程度有关。在检测ALT,TBA的同时,连续监测乙肝患者血清中HBV-DNA含量及NO、NOS的水平对了解乙肝患者病情的演变和预后以及治疗起着重要作用。     

高产IAA绿色木霉工程菌株的构建及其应用

农药和化肥的滥用,对人类健康及生存环境构成极大威胁,研制出能够降低化肥用量的的新型肥料十分必要,符合农业可持续发展的新型肥料十分必要。木霉作为新型肥料的常用功能微生物,在农业领域有着广泛的用途。在众多的促生防病机制中,通过产生吲哚乙酸(indole-3-acetic acid,IAA)来促进植株生长是木霉发挥作用的重要方式。为了进一步增强木霉的促生抗病能力,我们在绿色木霉Tv-1511中鉴定并克隆了IAA生物合成途径关键酶色氨酸合成酶(tryptophan synthase,TRPS)的编码基因TvTRPS以及色氨酸脱羧酶(L-Tryptophan decarboxylase,TDC)的编码基因TvTDC,构建了TvTRPS基因和TvTDC基因过表达的绿色木霉工程菌,并研究了其对木霉耐胁迫能力,产IAA能力,植物促生能力等的影响。结果表明,过表达TvTRPS基因和TvTDC基因的木霉工程菌合成IAA的能力显著提高,并且具有更强的耐胁迫能力和促生能力,为绿色木霉在农业生产上的进一步应用奠定了基础。     

重组诱导型一氧化氮合酶基因转染血管平滑肌细胞及对其增殖的影响

探讨重组诱导型一氧化氮合酶基因转染血管平滑肌细胞及产生的一氧化氮对血管平滑肌细胞增殖的影响。将诱导型一氧化氮合酶基因通过真核表达载体转入血管平滑肌细胞中 ,用Griess法测定转染细胞生成的一氧化氮的量。观察转染后平滑肌细胞生长状态情况 ,用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果正常细胞组NO的含量为78.4 4± 1 5 .38,而iNOS转染组NO含量为 2 36 .5 7± 31 .83,两组相比有非常显著差异 (P =0 .0 0 0 ,n =6 ) ,血管平滑肌细胞转染后生成一氧化氮。转染后的平滑肌细胞生长明显受到抑制 ,主要抑制平滑肌细胞周期G1 S期的过渡 ,使细胞停留在G1期。说明血管平滑肌细胞可以成功转染iNOS基因 ,生成的一氧化氮可明显抑制平滑肌细胞的增殖 ,为从血管非内皮成分进行iNOS基因转染提供了实验研究的依据