抗人胃腺癌细胞株AGS单克隆抗体的制备和初步鉴定

用人胃癌细胞株AGS作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人胃癌细胞mAb,应用间接ELISA法进行筛选,显微操作法进行亚克隆并用琼脂糖双向免疫扩散法鉴定亚类,免疫化学法检测特异性,获得l株分泌抗AGS细胞株的mAb的杂交瘤(命名为1B4).该杂瘤分泌的mAb与人宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株HepG2和正常胎儿肺细胞均为阴性反应,而与AGS细胞呈阳性反应.结果表明,该mAb对AGS细胞株具有一定的特异性,可为胃癌相关抗原的筛选研究提供一定的帮助.     

抗人Connexin31单克隆抗体的获得与应用

间隙连接蛋白31(Connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(Connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少。本实验利用多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250-266AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫Balb/c小鼠、采血检测产生阳性抗体、脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合、筛选阳性克隆建株、分泌的抗体经Westernblotting、细胞免疫荧光染色证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31的特异抗体。     

鸡卵黄抗体的制备及其不均一性

介绍了免疫期卵黄液中白蛋白（牛）抗体效价和亲合力的变化。研究了ＰＨ对稀释卵黄液去脂效果,以及硫酸铵浓度对ＩｇＹ浓缩、纯化效果的影响。探讨了抗白蛋白ＩｇＹ的异质性。实验表明稀释卵黄液酸化处理和ＩｇＹ盐析的最适合条件分别是ＰＨ５．１和２．２ｍｏｌ／Ｌ。经免疫亲和柱层析或金属螯合亲和柱层析后,白蛋白抗体样品均出现多个不同层析行为的抗体峰。实验提示免疫卵黄液中不仅可能存在不同亲合力、特异性的白蛋白抗体,还     

石墨烯在金电极上固定方法的选择及免疫传感器的构建

分别利用重氮化法、滴涂法、非共价键合法及偶联法将石墨烯固定于电极表面,并对所得到的修饰电极进行电化学表征,分析结果显示重氮化法制备的石墨烯修饰电极性能更稳定,信号更灵敏,所以将其用于免疫传感器的制备.首先在金电极上制备对氨基苯硫酚和苯硫酚的混合自组装单分子膜(MSAM),再利用重氮化法将石墨烯固定在MSAM修饰电极表面,然后在其表面电沉积纳米金,最后通过金-氨键固定抗体(羊抗小鼠IgG),并对小鼠IgG进行了初步检测,线性范围为0.001～400μg/L,检测下限达到0.0014μg/L.结果表明,该传感器具有检测范围宽、灵敏度高的优良性能,在临床检验中具有广阔的应用前景.     

中华眼镜蛇毒神经生长因子的研究

采用ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ和ＳｅｐｈｏｓｉｌＣ８以及ＨＰＬＣ层析方法，自广西产中华眼镜蛇毒中分离纯化神经生长因子（ＮＧＦ），此ＮＧＦ经８ｄ鸡胚背根神经节体外培养证明具有促进神经纤维生长的活性。经ＨＰＬＣ及聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一组成，经ＳＤＳＰＡＧＥ及ＨＰＬＣ测定分子量分别为２４．１ＫＤ和２４．９ＫＤ，等电聚焦电泳测得ｐＩ为８．２，氨基酸组分分析表明ＮＧＦ含酸性氨基酸较少，通过１２５｜标记ＮＧＦ测定出ＮＧＦ在生物体内主要分布于肾、肺、及周围神经     

4种促性腺激素释放激素抗体的制备、鉴定和纯化

用3-马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯(MBS)法将人工合成的4种不同来源的促性腺激素释放激(GnRH)(即章鱼GnRH、海鞘GnRH-Ⅰ、七鳃鳗GnRH-Ⅰ和七鳃鳗GnRH-Ⅲ)分别与匙孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后作为抗原,免疫新西兰大白兔获得GnRH抗体.用间接ELISA方法检测抗血清效价,并用Western blot鉴定其特异性.制备抗原肽亲和纯化柱,纯化多克隆抗体.结果显示,4种多克隆抗体效价高达1∶500 000(体积比),并能和相应的GnRH多肽特异性结合,纯化后的抗体在SDS-PAGE显示为单一条带.通过上述方法,获得4种高效价、高纯度的GnRH抗体,为低等动物GnRH的研究提供了理论依据.     

Preparation of monoclonal antibody based indirect competitive ELISA for detecting 19-nortestosterone residue

19-Nortestosterone (NT) has been illegally used in horse racing to boost physical performance, and in animal husbandry to accelerate weight gain. To monitor the abuse of NT, our goal was to develop a commercial enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kit. For this purpose, hybridomas were prepared by fusing NS0 mouse myeloma cells with splenocytes isolated from immunized BALB/c mouse. Noncompetitive and competitive indirect ELISA were used to screen positive cell clones. To optimize the indirect competiti...     

睾丸特异表达蛋白质RNF138的表达纯化及抗体制备

目的:制备RNF138的多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法:通过RT-PCR从小鼠睾丸cDNA文库中扩增mRNF138的开放阅读框,并克隆至原核表达载体pET-30a中;将测序正确的pET-30a(+)/mRNF138重组质粒转化大肠杆菌Rosseta菌株,经IPTG诱导表达后通过镍离子螯合柱(Ni-NTA)...     

抗结核杆菌人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选

目的:构建人源噬菌体展示单链抗体(ScFv)库,筛选抗结核杆菌特异性、高亲和力的ScFv.方法:从结核患者的外周血淋巴细胞中,提取RNA并通过RT-PCR扩增出VH和VL基因,并采用SOE-PCR构建ScFv基因,将其克隆入噬粒载pC ANTA B5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单...     

靶向重组Aif-T18融合蛋白对TEM1阳性肿瘤细胞的杀伤作用的研究

验证Aif-T18融合蛋白对肿瘤内皮细胞标志分子1(TEM1)阳性肿瘤细胞的杀伤作用.采用基因工程技术方法构建重组质粒pIRES-TEM1-EGFP,转染TEM1阴性表达细胞MS1,经G418筛选得到TEM1阳性细胞株(MS1-TEM1);通过构建重组质粒pET302-Aif和pET302-Aif-T18,转化至表达宿...