表达HBHA和hIL-12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用

评价表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌用于结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗效果.结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠4周后,用表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌免疫治疗,检测免疫小鼠肺部荷菌量和组织病理变化.重组耻垢分枝杆菌可有效控制感染小鼠肺部结核分枝杆菌的荷菌量,减轻病理损伤.但在降低肺部荷菌量方面不如化疗药物.表达HBHA和hIL12融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌可有效控制结核分枝杆菌在小鼠体内的增殖,可能成为联合化疗药物控制结核病的有效候选疫苗.     

结核分枝杆菌H37Rv组氨醇脱氢酶基因的克隆、表达及酶学性质分析

以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增hisD基因,构建pET-28a-HDH重组质粒;转化重组质粒到E.coli BL21(DE3)并诱导表达,纯化可溶性的结核分枝杆菌L-组氨醇脱氢酶(HDH),并对其性质进行研究,结果表明:重组结核分枝杆菌L-组氨醇脱氢酶能以L-组氨醇和NAD 为底物催化L-组氨醇生成L-组氨酸;该酶的最适pH值为8.3,最适温度为45℃,比活力为1.788 U/mg;Mn2 ,Ca2 ,Zn2 ,Co2 等对酶促反应有激活作用;底物NAD 和L-组氨醇的米氏常数分别为0.9765 mmol/L和2.755μmol/L;25℃时重组蛋白的二级结构中有20.5%的α-螺旋,40.9%β-折叠,4.2%β-转角,34.3%无规卷曲.     

抗结核药物治疗对肝功能的影响

目的观察抗结核药物对乙型肝炎病毒表面标志物(HBVM)阳性的肺结核患者肝功能的影响.方法回顾分析2001年1月到2002年12月间采用异烟肼(H)、利福平(R)、吡嗪酰胺(Z)三联再加上链霉素(S)或乙胺丁醇(E)方案治疗的乙肝病毒表面标志物阳性患者肝功能的情况,以同期采用同样化疗方案治疗的乙肝病毒表面标志物(HBVM)5项阴性结核病患者为对照.结果 HBVM阳性组肝损率(35.61%)高于乙肝阴性组(17.02%),两组经统计学处理差异显著(P<0.01).结论抗结核药物对HBVM阳性患者肝功能损害大.     

结核分枝杆菌ClpX与人UBC9蛋白的相互作用抑制宿主细胞增殖

ClpX是原核生物中高度保守的基因,其编码丝氨酸蛋白酶ClpXP的ATP结合亚基,具有底物识别及ATP水解活性.ClpX参与调控细胞周期与应激反应,且为多种病原微生物致病所必需,但目前相关研究仍非常有限.为了探索结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)ClpX在感染宿主细胞过程中的作用机制,本文首先通过酵母双杂交技术在人类淋巴细胞cDNA文库中筛选得到了一个新的与结核ClpX相互作用的蛋白UBC9,并利用GST pull-down和Co-IP技术证实了这两个蛋白在体外和体内相互作用的特异性.将ClpX转染HEK293T细胞过表达,RNA干扰与回复实验进一步证实了ClpX蛋白能够通过与UBC9的相互作用抑制宿主细胞的增殖.     

武汉地区部属、省属高校学生肺结核发病差异的调查分析

为了解武汉地区普通高校大学生的肺结核发病率及发病趋势，对武汉地区高校学生1998－2001年4年间肺结核的发病情况进行了调查，结果显示，武汉地区高校学生肺结核的年发病率为63．6／10万，进一步的分析示出部属院校与省属院校发病率之间存在较大差异－－其中部属院校为56／6／10万，省属院校为75．8／10万。经统计学分析，该差异具有高度显性意义（x^2＝13．05，P＜0．01），由此可见，肺仍是危害大学生健康的慢性传染病，其防治工作需得到高校医疗机构，尤其是省属院校的重视和加强。     

11例支气管内膜结核临床误诊分析

收集本院近3年来支气管内膜结核11例,确诊前均为误诊.通过分析其临床表现、胸片和支气管纤维镜等检查,阐明了误诊原因,确诊有赖于纤维支气管镜的检查及灌洗,以找到结核菌.     

应用PCR技术检测结核菌的临床研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对２４４例呼吸疾病患者临床标本进行结核菌ＤＮＡ检测，并同时与涂片抗酸染色结果进行比较。结果显示：１１２例结核标本涂片和ＰＣＲ检测阳性率分别为１６．１％和５２．７％，两者差别有显著性（Ｐ＜０．０１）。９４例涂阴结核标本ＰＣＲ阳性达４５．７％。结果表明应用ＰＣＲ技术检测结核杆菌ＤＮＡ具有快速敏感、特异性较高等优点，尤其对涂阴病人具有较大诊断价值     

铁线蕨根茎醇提取物对耐利福平结核杆菌的影响

研究中草药铁线蕨根茎的醇提取物(ACVE)对耐利福平结核杆菌(RRP-TB)细胞的抑制活性。铁线蕨饮片经粉碎、浸提、超速离心、减压浓缩、冷冻干燥得ACVE。RRP-TB细胞经ACVE处理不同时间后,以MTT法测ACVE对RRP-TB细胞代谢活性的影响,以细胞记数法观察ACVE对RRP-TB细胞增殖的影响。(1) 用RRP-TB经ACVE处理1 wk和2 wk后,A592光吸收分别降为对照组的9.64%和1.45%;(2)处理3 wk和5 wk时,RRP-TB细胞数降到对照组的25.65和15.2 %;(3)经ACVE处理1 wk后,在更换为正常培养基进行恢复培养过程中,RRP-TB细胞数呈现缓慢增长。结论:ACVE能降低RRP-TB细胞的代谢活性,抑制其增殖。     

结核分枝杆菌特异性抗原的N末端氨基酸序列分析

把ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析抗原抗体反应的高度特异性与ＰＶＤＦ膜作为载体进行蛋白质氨基酸序列分析的高度敏感性相结合对结核分枝菌的特异性抗原表位刊物筛选和分析鉴定,获得了一个分子质量为３１ｋｕ,Ｎ末端为ＡｌａＧｌｕＶａｌＡｓｐＬｅｕＶａｌＰｈｅＡｌａＶａｌＳｅｒＴｒｐＰｒｏＶａｌＧｌｙ的结核分枝杆菌抗原。     

结核分枝杆菌ICL抑制CTBP1表达并促进细胞凋亡

异柠檬酸裂合酶(Isocitrate Lyase,ICL)参与乙醛酸循环,是结核分枝杆菌能在宿主体内潜伏的关键因素之一.为了探索ICL在结核菌与宿主相互作用中的地位,首先通过酵母双杂交技术在人淋巴细胞cDNA文库中筛选得到一个新的ICL相互作用蛋白CTBP1(C Terminal Binding Protein 1).然后分别采用GST pull-down和Co-IP实验证实了这两个蛋白在体外和体内与ICL相互作用的特异性.通过使ICL在HEK293T细胞中过表达,发现内源性CTBP1在转录水平和蛋白水平的表达都受到了抑制,同时导致细胞增殖减缓、凋亡加快,并出现G2/M期阻滞等改变.这些结果表明,结核菌ICL在参与介导细胞凋亡、影响宿主细胞活性的过程中起着重要的作用.