高山被孢霉原生质体转化及延长酶基因同源表达的研究

为了有效提高高山被孢霉(Mortierella alpina)产花生四烯酸的能力,采用聚乙二醇介导的原生质体转化法将重组pD4质粒(含高山被孢霉合成花生四烯酸的延长酶基因GLELO)转入高山被孢霉中,对其转化条件和同源表达进行了研究.结果表明,原生质体最佳转化条件为:以山梨醇作为稳定剂,50mmol/L的Ca2+和聚乙二醇4000作为转化介质,于25℃转化15min后温育,原生质体转化率最高为1.8μg-1.该转化子的摇瓶实验结果显示重组菌中花生四烯酸的产量比原始菌株的产量最高提高了近30%.该研究结果为高山被孢霉的性状改进及其他真菌的的遗传转化提供参考.     

利用深黄伞形霉生产油脂的研究进展

总结了深黄伞型霉的不饱和脂肪酸含量高、品种多、易培养的优点.介绍了运用化学诱变和基因工程技术对深黄伞形霉菌种的选育和改造,以及深黄伞形霉产油脂的培养工艺和提取工艺的研究成果.研究表明,深黄伞型霉是产生油脂的优良菌种,为深黄伞形霉生产油脂和不饱和脂肪酸提供基础.     

被孢霉产n-6多不饱和脂肪酸的分离纯化

对高山被孢霉（Mortierella alpina）高产脂变异株M20产生的含n-6PuFAs油脂的提取、精炼、浓缩进行了研究，油脂的提取以乙醇和正已烷分步抽提效果较好，对纯化方法进行了改进，采用先皂化后脱胶除杂质的方法，浓缩方法采用尿素包合法，油脂：尿素＝1：4的比例对该油脂浓缩较理想，提高了纯度和收率，使原油中仅含20％n-6多不饱和脂肪酸（n-6PuFAs）提高到占总油脂的80％以上。     

高山被孢霉高产ARA的原生质体融合子筛选

利用原生质体融合技术,对两株单一优良性状差异显著的高山被孢霉菌株F24和G12进行原生质体融合,再采用双灭活或流式细胞分选法筛选优良性状相结合的高产菌株,对双亲菌株原生质体的制备、融合和再生的相关条件进行了研究,并对双灭活和流式细胞分选的具体方法进行了研究.经研究发现,采用培养16 h的高山被孢霉菌丝于混合酶液(蜗牛酶15.0 mg·m L~(-1)、纤维素酶6.0 mg·m L~(-1)、溶菌酶0.5 mg·m L~(-1)和几丁质酶0.2 mg·m L~(-1))中30℃酶解4 h为原生质体制备的最佳条件.并探究得出两种融合子筛选方法的最佳方案,成功筛选出融合子,进一步再生培养验证ARA产量,最终挑选出一株ARA产量达6.32 g·L~(-1)的高产菌株.以前尚未发现此方法在高山被孢霉上的应用,为高山被孢霉育种提供了一种有效的手段.     

花生四烯酸产生菌的原生质体诱变育种

采用化学诱变剂硫酸二乙酯(DES)对由高山被孢霉出发菌株M3-18制备的原生质体进行诱变育种.实验结果表明,采用体积分数为10%的DES诱变3min,可获得高产突变株M20,其花生四烯酸产量比对照株M3-18提高了4.4倍,而且突变株的继代遗传稳定.说明采用原生质体诱变育种是获得花生四烯酸高产菌株的有效方法.     

调节己糖磷酸途径提高被孢霉花生四烯酸产量

研究了己糖单磷酸途径在被孢霉生产花生四烯酸中的作用。对被孢霉中己糖单磷酸途径的关键酶－葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PDH）活性的变化与生物量、油脂和花生四烯酸合成的关系进行了分析，结果表明在被孢霉发酵生产花生四烯酸的过程中，G6PDH活性的变化与生物量、总油脂产量、花生四烯酸含量及产量成正相关。利用0．8g/L谷氨酸对G6PDH进行正调节，可进一步提高被孢霉生物量、总油脂产量、花生四烯酸含量及产量。     

深黄被孢霉及其脂溶性组分对高脂饮食小鼠的影响

研究深黄被孢霉菌粉及其脂溶性组分对脂代谢紊乱小鼠的调节作用．小鼠膳食高脂饲料13周后建模成功，随后以菌粉及其提取物继续喂食7周．实验结果证明菌粉治疗作用的靶位点之一是白色脂肪组织，可引起小鼠体质量显著性下降；菌粉及其提取物能降低高脂饮食小鼠的TC／HDL-c的水平，改善血浆胆固醇比例．     

表面活性剂对被孢霉产花生四烯酸的影响

筛选了对被抱霉产花生四烯酸(AA)最佳的表面活性剂并确定了其最佳质量分数，发现0．3％ Tween20最有利于提高被孢霉的从产量，并研究了0．3％Tween20对被抱霉发酵体系的KLα值、被抱霉生长、油脂和从合成等的影响．结果表明：0．3％Tween20可以提高被抱霉发酵体系的KLα值，虽然0．3％Tween20对被抱霉生长和油脂合成没有明显的影响，但显著地提高了从在油脂中的含量，从而最终提高从产量．尤其在第7d，从产量达1．61g／L，为对照组第7d所得的1．31倍．     

深黄被孢霉染色体数目及基因组大小的研究

利用钳位均匀电场凝胶电泳（contour-clamped homogeneous electric rield,CHEF)技术分离了γ-亚麻酸（γ-linloenic acid,GLA)生产菌深黄被孢霉AS3.3410(Mortieralla isabellina AS3.3410)的梁色体DNA,电泳核型显示出其具有15条明显的带型,分离的染色体DNA带范围大约为390-2660kb,基因组大小约为21640kb。