被孢霉产n-6多不饱和脂肪酸的分离纯化

对高山被孢霉（Mortierella alpina）高产脂变异株M20产生的含n-6PuFAs油脂的提取、精炼、浓缩进行了研究，油脂的提取以乙醇和正已烷分步抽提效果较好，对纯化方法进行了改进，采用先皂化后脱胶除杂质的方法，浓缩方法采用尿素包合法，油脂：尿素＝1：4的比例对该油脂浓缩较理想，提高了纯度和收率，使原油中仅含20％n-6多不饱和脂肪酸（n-6PuFAs）提高到占总油脂的80％以上。     

高山被孢霉高产ARA的原生质体融合子筛选

利用原生质体融合技术,对两株单一优良性状差异显著的高山被孢霉菌株F24和G12进行原生质体融合,再采用双灭活或流式细胞分选法筛选优良性状相结合的高产菌株,对双亲菌株原生质体的制备、融合和再生的相关条件进行了研究,并对双灭活和流式细胞分选的具体方法进行了研究.经研究发现,采用培养16 h的高山被孢霉菌丝于混合酶液(蜗牛酶15.0 mg·m L~(-1)、纤维素酶6.0 mg·m L~(-1)、溶菌酶0.5 mg·m L~(-1)和几丁质酶0.2 mg·m L~(-1))中30℃酶解4 h为原生质体制备的最佳条件.并探究得出两种融合子筛选方法的最佳方案,成功筛选出融合子,进一步再生培养验证ARA产量,最终挑选出一株ARA产量达6.32 g·L~(-1)的高产菌株.以前尚未发现此方法在高山被孢霉上的应用,为高山被孢霉育种提供了一种有效的手段.     

深黄被孢霉染色体数目及基因组大小的研究

利用钳位均匀电场凝胶电泳（contour-clamped homogeneous electric rield,CHEF)技术分离了γ-亚麻酸（γ-linloenic acid,GLA)生产菌深黄被孢霉AS3.3410(Mortieralla isabellina AS3.3410)的梁色体DNA,电泳核型显示出其具有15条明显的带型,分离的染色体DNA带范围大约为390-2660kb,基因组大小约为21640kb。     

表面活性剂对被孢霉产花生四烯酸的影响

筛选了对被抱霉产花生四烯酸(AA)最佳的表面活性剂并确定了其最佳质量分数，发现0．3％ Tween20最有利于提高被孢霉的从产量，并研究了0．3％Tween20对被抱霉发酵体系的KLα值、被抱霉生长、油脂和从合成等的影响．结果表明：0．3％Tween20可以提高被抱霉发酵体系的KLα值，虽然0．3％Tween20对被抱霉生长和油脂合成没有明显的影响，但显著地提高了从在油脂中的含量，从而最终提高从产量．尤其在第7d，从产量达1．61g／L，为对照组第7d所得的1．31倍．     

花生四烯酸产生菌的原生质体诱变育种

采用化学诱变剂硫酸二乙酯(DES)对由高山被孢霉出发菌株M3-18制备的原生质体进行诱变育种.实验结果表明,采用体积分数为10%的DES诱变3min,可获得高产突变株M20,其花生四烯酸产量比对照株M3-18提高了4.4倍,而且突变株的继代遗传稳定.说明采用原生质体诱变育种是获得花生四烯酸高产菌株的有效方法.     

调节己糖磷酸途径提高被孢霉花生四烯酸产量

研究了己糖单磷酸途径在被孢霉生产花生四烯酸中的作用。对被孢霉中己糖单磷酸途径的关键酶－葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PDH）活性的变化与生物量、油脂和花生四烯酸合成的关系进行了分析，结果表明在被孢霉发酵生产花生四烯酸的过程中，G6PDH活性的变化与生物量、总油脂产量、花生四烯酸含量及产量成正相关。利用0．8g/L谷氨酸对G6PDH进行正调节，可进一步提高被孢霉生物量、总油脂产量、花生四烯酸含量及产量。