黑曲霉发酵生产果胶酶的研究

本文报道激光诱变提高黑曲霉产生果胶酶的作用，并对产酶条件及提取工艺进行了全面研究。实验表明：在以麸皮为主的培养基中，黑曲霉空变株Ｂ１在３０℃下，经３８－４０ｈ培养，产生果胶酶能力可达２８０００ｕ／ｇ其酶提取总收率能达９０％以上。     

柠檬酸发酵工艺的探讨

本文用正交设计试验方法探讨柠檬酸连续浅盘发酵的条件.试验菌种是黑曲霉变异株.主要原料为甘蔗废糖蜜.对于柠檬酸的浓度和生产能力而言,其最优方案为:连续流加时间168h,添加液流速25ml/h;添加液糖度22BX;添加液中甲醇含量3g/100ml.其中,甲醇是影响最显著的因素.连续浅盘培养比静态浅盘培养,其柠檬酸生产能力提高一倍.连续流出的醪液再循环是可行的.     

丝状真菌原生质体技术——(Ⅰ)黑曲霉原生质体灭活

在GM玻璃纸平板上接种10~6数量级的孢子悬液,31℃培养17～18hr,收集菌丝于1.5%Lywallzyme中酶解4hr,过滤离心收集原生质体,原生质体经50℃,5min处理,并20W紫外灯40cm照射,150s,0.1MHNO_2,pH4.6.再经31℃恒温处理7min,原生质体可达到全部灭活.     

黑曲霉(Aspergillus niger)原生质体电融会(Ⅰ)─黑曲霉原生质体形成与再生的研究

通过紫外诱变获得两株稳定的黑曲霉营养缺陷型Ｍｕ２（Ｍｅｔ－）和Ｄ１２（Ｃｙｓ－），并首次证实低温黑暗保存数小时对黑曲霉突变株具有稳定作用。系统地研究了菌龄、渗透压稳定剂、温度、酶的浓度和酶解系统等因素对黑曲霉原生质体形成的影响．采用２％溶壁酶加０．５％纤维素酶，获得了大量的原生质体。在显微镜下观察原生质体形成和再生过程， Ｍｕ２和 Ｄ１２再生率分别为 ５４％和 ３３％。原生质体在正弦交变电场（１ＭＨｚ，４５０ Ｖ／ｃｍ）作用下形成珠串，在高压电脉冲（强度 ９．０ ｋＶ／ｃｍ、时程 ２５ μｓ）触发下，发生融合。     

生淀粉结合域SBD及糖化酶基因在毕赤酵母中的融合表达

【目的】研究生淀粉结合域SBD及糖化酶基因在毕赤酵母中的融合表达,提高酶的表达量和水解生淀粉的能力。【方法】利用In-fusionTM PCR克隆技术将淀粉结合域SBD无缝隙插入到黑曲霉糖化酶基因glu的5′端构建融合表达质粒pPIC9K-psg,实现融合酶基因psg在毕赤酵母GS115中的高效表达,并进行酶学性质研究。【结果】融合酶的最适作用条件及热稳定性均与原始酶无明显差别,但反应温度及pH值的范围更为宽泛,在反应温度60~70℃,pH值为4.0~7.0时均较稳定;融合酶PSG降解生淀粉的能力较原始酶PG提高29.6%,比原始菌株提高86.5%。【结论】淀粉结合域SBD的融合提高了糖化酶水解生淀粉的能力。     

超声波对黑曲霉细胞破壁作用的研究

用均匀设计法考察了超声时间、超声温度和超声功率对黑曲霉细胞破壁效果的影响.实验结果表明最优条件为:超声时间50 min,超声温度60℃,超声功率200 W.超声法与高压均质法比较,超声法破壁效果较好.     

黑曲霉固态发酵生产果胶酶培养条件的研究

对黑曲霉HYA4固态发酵生产果胶酶的培养条件进行了研究,固态发酵培养基组分为:250 mL三角瓶中甜菜渣5 g,黄豆粉5 g,NH4H2PO4 0.4%,FeSO4·7H2O 0.05%.料水比1:2.采用此优化的培养基在培养温度36℃和初始pH自然条件下进行发酵,果胶酶酶活力可达5465.8 U/g(干曲).     

等离子诱变选育柠檬酸高产菌

黑曲霉TN09是1株柠檬酸生产菌株.为了进一步提高柠檬酸的生产水平,利用等离子对柠檬酸生产菌黑曲霉TN09进行了诱变.诱变后的孢子悬液涂布玉米液化液平板,35,℃培养至72,h测量透明圈直径,以酸解透明圈直径大于2.2,cm、菌落直径大于0.5,cm、其比值大于4.8的菌落作为初筛柠檬酸菌株,然后进行摇瓶复筛获得了1株遗传性能稳定的高产菌,与出发菌株(产酸12.46,g/dL)相比产酸增幅达到8.67%.     

黑曲霉液体发酵生产纤维素酶的研究

从土壤中分离得到一株产纤维素酶的黑曲霉菌株Ａｓｐ．ｎ－１３,采用二级液体发酵生产纤维酶;对液体发酵条件进行了研究,确定了发酵培养基配方。试验结果表明,滤纸酶活力最高达１６４Ｕ／ｍＬ,ＣＭＣ酶活力最高达２７２Ｕ／ｍＬ,最适发酵周期为７６－８４ｈ。