黑曲霉基因文库的构建及葡萄糖淀粉酶基因的克隆

用噬菌体λEMBL3 DNA为载体成功地构建了黑曲霉3758的完整的基因文库。供体黑曲霉染色体DNA经EcoRI部份酶切和蔗糖密度梯度离心,回收15—20kb片段,以一定的比例与经EcoRI处理的载体λEMBL3 DNA连接,连接产物用大肠杆菌SMR10单菌系统提取的包装蛋白进行体外包装,包装物感染宿主大肠杆菌Q359,获得2.5×10~5重组噬菌体/μgDNA的包装效率,比Clarke-Carbon公式对构建黑曲霉染色体基因文库要求的重组克隆数高10倍。以编码葡萄糖淀粉酶第329—481位氨基酸的DNA作为探针,用原位噬菌斑杂交的方法,从10~5个重组噬菌斑中筛选出2个杂交阳性噬菌斑。复筛以后,用快速法提取DNA,经EcoRI和EcoR V双酶切以后,走电泳,用Southern印迹法将DNA转移至硝酸纤维素膜上,与~(32)p-标记的探针杂交,证实葡萄淀粉酶基因位于2.5kb的EcoRI、EcoR V片段上,该片段已亚克隆至ρBR322。     

里氏木霉和黑曲霉产酸性木聚糖酶及酶学特性比较

【目的】对黑曲霉和里氏木霉产酸性木聚糖酶的性能及所产粗酶的酶学特性进行分析比较,尤其是考察pH值为4时木聚糖酶酶活力及稳定性,从而确定潜在的较为理想的酸性木聚糖酶。【方法】将里氏木霉和黑曲霉接种至培养基进行产酶培养,比较分析两者的酸性木聚糖酶、酸性木糖苷酶的酶活力及酶学特性。【结果】黑曲霉酸性木聚糖酶和酸性木糖苷酶的酶活力最高分别达(52.36±2.61)U/mL和(0.57±0.01)U/mL,酸性木聚糖酶最适温度和pH值分别为55℃、5.0,酸性木糖苷酶最适温度和pH值分别为75℃、5.0;里氏木霉酸性木聚糖酶和酸性木糖苷酶的酶活力最高分别达(10.12±0.95)U/mL和(0.32±0.05)U/mL,酸性木聚糖酶最适温度和pH值分别为65℃、6.5,酸性木糖苷酶最适温度和pH值分别为65℃、4.5。黑曲霉和里氏木霉的酸性木聚糖酶兼有酸性CMCase酶活力,分别为(5.26±0.21)U/mL、(1.72±0.21)U/mL。【结论】黑曲霉所产酸性木聚糖酶明显比里氏木霉的更优良,是潜在的较为理想的酸性木聚糖酶。     

黑曲霉植酸酶液体发酵工艺研究

研究了黑曲霉液体培养生产植酸酶的发酵工艺,研究了培养基碳源、诱导物、表面活性剂等因素对产酶的影响,对发酵时间、pH变化规律等进行了研究和分析。     

利用稻米发酵生产柠檬酸工艺的研究

以稻米为原料生产柠檬酸 ,是以我国南方长期积压的早稻米为原料 ,采用天津工微所选育的黑曲霉菌种 TD- 0 16 8,经过深层发酵工艺而实现的。本项研究从实验室摇瓶小试到中试 ,及 12 0 m3发酵罐生产 ,均取得了成功。其发酵总指标均达到和超过原有薯干工艺 ,其生产指标为 :产酸率14% ,转化率 95% ,发酵周期 70 h     

Major Transglycosylation Productsof β-Glucosidase and Their Induction Effects on Cellulase Biosynthesis

以纤维二糖特异诱导培养里氏木霉和黑曲霉菌丝,制备含有细胞外、细胞内和细胞质膜结合态β葡萄糖苷酶的无细胞抽提物,采用色谱持谱联用分析,比较研究他们对纤维二糖的转糖基作用,结果表明两菌株中都只有细胞质膜结合态β葡萄糖苷酶表现出显著的转糖基活性,可检测到的含有β糖苷键葡二糖类的主要转糖基产物是β龙胆二糖而不是槐糖．当在里氏木霉和黑曲霉菌丝的洗脱置换培养体系中加入β龙胆二糖时,可以诱导纤维素酶合成,但它比槐糖（迄今最有潜力的诱导物）的诱导效率低．这些结果支持假说认为是质膜结合态β葡萄糖苷酶从纤维素寡聚物形成转糖基作用产物,作为纤维素酶合成的诱导物     

黑曲霉对实验动物耐低温和提高耐力作用的研究

目的 :前期研究结果证明黑曲霉具有提高小鼠耐缺氧和耐热作用 ,在此基础上 ,我们进一步研究了黑曲霉对小鼠的耐低温和提高耐力作用。方法 :随机分组 ,设给药组、空白对照组和阳性对照组 (红参 ) ,实验时分别灌服黑曲霉、生理盐水和红参。疗程结束后对实验动物进行耐低温试验和游泳试验。结果 :黑曲霉能显著延长实验小鼠在低温环境 (- 10℃ )下的存活时间 ,可明显提高耐力 ,作用强度大于红参。结论 :黑曲霉对实验动物具有提高耐低温和耐力作用 ,具有进一步开发利用的前景。     

黑曲霉B1降解氧乐果特性研究

从三明农药厂污泥中分离到一株具有较高降解氧乐果活性的真菌,初步鉴定为黑曲霉(Aspergillusniger.).该菌为好氧菌,最佳生长和最佳降解氧乐果的条件相同,均为30℃,pH5.5,可利用氧乐果作为唯一磷源进行生长.在氧乐果与葡萄糖共存的分批培养过程中,黑曲霉B1对葡萄糖与氧乐果的代谢表现为典型的顺序利用特性.黑曲霉B1优先利用葡萄糖为菌体生长的碳源和能源,在葡萄糖浓度降至0.1g L时,黑曲霉B1对氧乐果的降解速率明显增加,培养5d对1g L氧乐果的降解率可达55.75%.     

黑曲霉中提取葡萄糖氧化酶的探索 Ⅰ.葡萄糖氧化酶合成及其性质

多次筛选培育获得含有较高活力葡萄糖氧化酶的黑曲霉菌株ＺＢＹ－７,在原有培养基条件的基础上,研究了培养时间、培养温度、ｐＨ、中和剂的浓度对生产葡萄糖氧化酶影响．并进一步对细胞浸出液的葡萄糖氧化酶性质进行研究．实验结果表明：胞外葡萄糖氧化酶含量远远低于胞内酶．     

静息细胞培养系统中葡萄糖氧化酶及过氧化氢酶的生物合成

黑曲霉发酵生产葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）及过氧化氢酶（ＣＡＴ）受许多因素的影响［１］．弄清楚这些因素究竟是直接对酶的生物合成起作用,还是通过影响细胞的生长,间接对酶合成起作用,用发酵法是难以判断的;但是研究清楚这些因素的可能机制,对指导该酶的发酵生产及研...