鼠妇富含蛋白多肽提取物的镇痛作用研究

采用蛋白酶法与酸碱法提取鼠妇蛋白多肽成分,利用化学刺激和热刺激法观察提取物对小鼠的镇痛作用,同时测定小鼠脑组织中的去甲肾上腺素(NE),多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)水平.以蛋白多肽中氨基酸种类,尤其是兴奋性氨基酸天门冬氨酸和谷氨酸,抑制性氨基酸甘氨酸和γ-氨基丁酸的质量分数为指标,醋酸扭体次数抑制率和热板实验痛阈值为镇痛活性指标,对两种提取方法进行比较并且初步研究镇痛作用机理,结果表明酸碱法制备的富含蛋白多肽的鼠妇提取物镇痛效果优于酶法,该提取物能明显提高小鼠醋酸扭体次数抑制率与热板实验痛阈值,且能明显提高小鼠脑内NE,DA和5-HT质量分数水平.酸碱法提取蛋白多肽对小鼠具有明显的镇痛作用,其镇痛作用可能与脑内的单胺递质类5-HT有关.     

海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因的克隆、表达和纯化

海洋放线菌S.arenicola CNS-205是首次报道的专属海洋性放线菌属Salinispora的代表菌株之一.选取海洋放线菌S.arenicola CNS-205非核糖体多肽合成酶氨基酸腺苷化结构域基因sare 0357,对其进行生物信息学分析后进行原核重组质粒的构建和表达及蛋白纯化.分别构建了pET-28a-sare 0357和pGEX-KG-sare 0357重组质粒,并转化E.coli BL21(DE3)进行不同诱导条件的诱导表达,sare 0357基因均以包涵体的形式表达.收集Sare0357重组蛋白包涵体,选取6mol/L的盐酸胍对其进行变性并将变性后的重组蛋白进行镍柱纯化.得到了可溶性的Sare0357融合蛋白.     

富含羧基的多肽基双亲水杂化共聚物控制碳酸钙的形成

结合N-羧基-环内酸酐开环聚合和"巯-炔"光点击反应制备了侧链富含羧基的多肽基双亲水杂化共聚物(PEO-b-PPLG-g-MPA)。该多肽基共聚物可以模拟蛋白质指导CaCO3在水溶液中的形成。圆二色谱(CD)揭示了多肽链段在水溶液中的构象变化;扫描电子显微镜(SEM)揭示了矿化过程中CaCO3的形貌变化;X-射线衍射(XRD)确认了CaCO3的晶型。结果表明,该聚合物可以有效地控制CaCO3的形貌,此时多肽链段呈无规线团构象,而不是更为有序的α-螺旋或β-折叠构象;多肽链段的含量只有达到足够的浓度时,才能有效地控制的CaCO3晶体的生长;CaCO3的形貌则可以通过调节多肽链段的长度、溶液的pH值等因素进行调控,其可以是表面光滑的微球、表面堆满了CaCO3小颗粒的超结构微球、纳米棒或呈"花瓣状"聚集的纳米棒。XRD则证明形成的CaCO3呈稳定的方解石晶型。     

草鱼多肽功能性质及营养价值

研究草鱼多肽的溶解性、起泡性、乳化性、吸湿保湿性和稳定性等功能性质,以及草鱼多肽的氨基酸组成,并评价其营养价值。结果表明草鱼多肽具有良好的功能特性。草鱼多肽粉18种氨基酸总质量分数为90.94%,必需氨基酸占总氨基酸质量分数的41.33%;草鱼多肽的生物价、必需氨基酸指数、营养指数和氨基酸比值系数分别为71.51,76.34,74.81和77.19。草鱼多肽的氨基酸组成平衡、合理,是一种优质的蛋白质资源。     

多态生化和手性药物的研究

综述了我研究室近年来在多肽生化和手性药物领域中的研究进展：①进行了抗癌药物ＡＭＤ类似物的全新设计、化学全合成、与ＤＮＡ结合活性和构效关系研究;②研究了新皮啡肽类似物及其自旋标记衍生物和弧儿受体的天然配基弧啡肽的构效关系;③进行了ＤＮＡ结合蛋白结构域;锌指及其突变体的合成及与寡聚核苷酸结合能力的研究;④将稳定的氮氧自由基标记肽类药物血管紧张素Ⅱ,建立了一种使生物活性肽带上自旋标记的简便方法,用以研究     

几种花粉多肽和多糖的研究

报道了油菜、罂粟、荞麦花粉中的多肽和蒲黄、党参、罂粟花粉中的多糖成分的分离鉴定及有关生物活性的研究结果。     

蛋白酶解大豆多肽的理化特性

以大豆蛋白为原料,利用微波加热和碱性蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶水解大豆蛋白,制备单酶、双酶、三酶联合水解的大豆多肽,用葡聚糖G-50排阻色谱法进行分离检测,确定各级分的分子量分布范围.凝胶层析分析结果表明,三酶联合水解得到的大豆肽相对分子质量分布主要在1 100 u以下,而双酶联合水解则在2 000 u以下,可见三酶联合水解效果优于双酶,更优于单酶.此外,物化特性研究表明,蛋白酶水解使得大豆蛋白溶解性、起泡性及起泡稳定性等大大改变.大豆多肽具有良好的溶解性,在蛋白质的等电点附近,不受pH值的影响,且具有高浓度、低粘度的特点,以及良好的吸湿性、保湿性和热稳定性和强起泡能力.     

环肽合成研究

环肽由于其稳定的结构特性在生物模拟,药物设计,纳米与分子器件,生物传感器以及催化剂等方面起着越来越重要的作用,本文介绍了近年来环肽化合物的合成及其应用的一些进展。     

从草鱼内脏制取抗氧化活性饲用多肽粉的工艺研究

采用热水自溶法水解草鱼内脏,从中分离出水解产物,然后将其干燥制作成饲用多肽粉.研究了水解工艺条件对草鱼内脏水解的影响,测定了水解液和干燥后的多肽粉的抗氧化活性.结果表明,当自溶温度为60℃,自溶时间为75 min,每100 g内脏匀浆加水60 mL时,草鱼内脏的油脂提取率为70.05%.此时,内脏水解液的自由基清除率高于72%.水解液经过干燥后,其理化组成符合国家一级饲用鱼粉标准.热风干燥的饲用多肽粉的自由基清除率高于喷雾干燥多肽粉.     

大豆根瘤中增强表达的WIP小多肽基因家族的分子鉴定

小肽分子是植物细胞分化、器官形成和生物防御的重要信号分子.通过分析大豆全基因组DNA序列,发现大量的基因编码小肽前体即小多肽分子.到目前为止,对这些小多肽分子的特征以及功能知之甚少.本文系统地分析了公共数据库中的大豆转录组数据,鉴定了212个在根瘤中增强表达的小多肽基因.其中79个基因属于38个多基因家族,而另外133个基因不属于任何基因家族.在38个基因家族中,有10个基因家族只出现在豆科植物中,另外28个也出现在模式植物拟南芥中.在大豆中,最大的一个基因家族是伤流诱导的小多肽(wound-induced small protein,WIP)基因家族,由38个成员组成,其中一半左右的基因在大豆固氮根瘤中增强表达.我们进一步分析了蒺藜苜蓿、百脉根、拟南芥和水稻中的WIP同源基因,发现部分基因也在根瘤中增强表达或者受病原菌诱导表达.二级结构分析显示,WIP小多肽前体均含有一个DUF3774结构域,其中包含2个跨膜疏水区域,多数分子具有N-端信号肽序列.我们选取了2个大豆WIP基因进行亚细胞定位分析,发现WIP小多肽定位于细胞膜上.有趣的是,34个大豆WIP基因成簇分布在3条染色体上,与目前发现的其他小多肽基因家族的分散分布(如CLE)完全不同.在6,12和13号染色体上分别分布有11,12和11个WIP基因.而在12号染色体上的WIP同源基因则位于13号染色体上,二者呈对应关系.而6号染色体上的WIP基因相互之间同源性最高,且只与12号染色体上的基因具有较高的同源性.因此,可以推测,在大豆基因组中WIP基因可能起源13号染色体,通过染色体复制扩散至12号染色体,再扩散到6号染色体.而在拟南芥和水稻基因组中,半数以上的WIP基因也分布在一条染色体上,且与大豆12和13号染色体上的WIP基因具有较高的同源性.因此,植物中WIP基因可能来源一个共同的祖先.