利用TMV病毒载体在烟草中瞬时表达rPA（Reteplase）

构建了携带有人组织型纤溶酶原激活剂突变体rPA（Reteplase）的烟草花叶病毒（Tobacco Mosaic Virus,TMV）瞬时表达载体PJL TRBO-rPA,并转入农杆菌GV3101中.利用农杆菌渗滤接种技术在烟草本氏烟（Nicotiana benthamiana）中进行表达.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、免疫印迹（western blotting）和纤维蛋白琼脂糖平板（fibrin-agarose plate assay,FAPA）法检测分析.结果表明,在烟草中成功地表达出了有活性的rPA.为在植物中生产Reteplase提供了一条可能的途径.     

有机硒化学研究进展

近２０年来有机硒化学发展极为迅速，新的有机硒试剂在有机合成化学中起着重要作用，并广泛用于天然产物的合成，有机硒抗病毒、抗肿瘤药物为人类征服疾病作出贡献。结合作者的研究工作介绍了有机硒化学发展近况．     

BIV－LTR中存在负调控区

为研究ＢＩＶ－ＬＴＲ调控序列的功能，将ＬＴＲ部分ＤＮＡ序列缺失，与荧光素酶基因相连构建质粒ｐＤ－３１９－Ｌｕｃ，ｐＤ－２６１－Ｌｕｃ，ｐＤ－１８１－Ｌｕｃ，ｐＤ－２－Ｌｕｃ，ｐＤ＋３２－Ｌｕｃ，ｐＤ－３１９－２６１－Ｌｕｃ，ｐＤ－１８１＋３２－Ｌｕｃ．通过磷酸钙共沉淀法将上述质粒及ｐＢＬＴＲ－Ｌｕｃ分别转染小牛肺细胞（ＦＢＬ），检测转染细胞裂解物荧光素酶活性，比较各质粒所克隆的ＢＩＶ－ＬＴＲ表达水平，发现－２６１位上游区存在负调控区，Ｒ区存在抑制ＬＴＲ表达的序列．     

鸭病毒性肝炎综合防制措施的研究

肉鸭养殖场采取严格消毒、隔离饲养、加强种鸭免疫和雏鸭免疫、利用血清或抗体对雏鸭被动预防、药物预防等综合防制措施,对选定养殖户的养殖跟踪表明,在20日龄的鸭病毒性肝炎发生率从60%降低到20%。对来自非免疫种鸭和免疫种鸭的雏鸭群分别采用雏鸭疫苗接种、免疫血清注射和喂中药“鸭肝灵”,结果表明,疫苗的免疫接种是防制DVH所必须的,且与中草药“鸭肝灵”配合应用防制效果明显;注射血清能起到一定的防制作用,但其效价维持的时间较短,至少要经过两次注射才可能起到有效的保护作用。而对来自规则免疫种鸭的健康雏鸭其母源抗体有一定的保护作用,对预防DHV的早期感染起关键的作用,但保护不到15日龄,最早需在5日龄进行首免,15日龄才能达到有效的保护作用,同时饲喂中药“鸭肝灵”保护效果明显。无论雏鸭的母源抗体如何,隔离饲养、严格消毒,疫苗免疫(首免时间依种鸭免疫情况而定),并同时饲喂中药“鸭肝灵”保护效果明显。     

戊型肝炎病毒ORF2片段在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定

为了寻求新型表达系统来研制戊型肝炎病毒基因工程疫苗，利用Pichia pastoris表达系统表达戊型肝炎病毒(HEV)结构区ORF2基因．利用PCR扩增HEV ORF2基因，然后将ORF2基因按正确的阅读框融合到Pichia postoris分泌型表达载体pPIC9K的a-因子信号肽编码序列3’端，重组表达载体在电击转化毕赤酵母，经过含G418的营养缺陷型培养基(RDB)筛选、重组酵母基因组总DNA进行PCR鉴定后，证实HEV ORF2基因已经整合到酵母基因组中并得到重组转化子．表型鉴定后对G418具有不抗性的重组菌株诱导表达，用双抗体夹心法ELISA筛选了表达外源蛋白的重组菌株，再经SDS-PAGE与Western blot证实ORF2基因在Pichia pastoris中实现了分泌表达，而且重组蛋白具有较强的特异性与生物学活性；同时用双抗体夹心法证实在Pichia pastoris表达的上清中存在衣壳蛋白聚体．     

对虾桃拉病毒(TSV)RT-PCR快速诊断技术的研究

对虾桃拉病毒(Taura Syndrome Virus，TSV)最早于1992年在凡纳对虾(Penaeus vannamei)体内发现，此病毒是对虾养殖业危害较严重的病毒之一．将该病毒基因组的一段序列克隆至转录载体pSP64(PolyA)上。经体外转录、磁珠法分离、纯化获得了人工的TSV-RNA模板；用定量的TSV-RNA阳性对照模板进行RT-PCR条件优化。灵敏度检测以及样品制备方法等试验，结果表明：RT-PCR检测的灵敏度可达到0．1fg，相当于100个病毒粒子；所制备的样品对病毒RNA的逆转录及扩增无抑制，适合于对虾桃拉病毒快速检测．     

DOS文件安全保护新方法

通过分析DOS文件管理的特点,指出DOS文件或子目录可通过其FDT中目录项的相对移位进行安全保护,并给出了具体的实现方法。     

HSVTK gene therapy for carcinoembryonic antigen-producing human lung cancer cells

The long-term success of gene therapy for cancer relies heavily on the development of effective targeting systems. We investigate the possibility of targeted gene therapy using promoter of carcinoembryonic antigen (CEA) gene. By using luciferase reporter gene, we found that CEA promoter exhibit 16 times high activity in CEA-producing lung cancer cells, A549 than in nonproducing cells, Hela. We also constructed a recombinant expression plasmid pCEATK, in which CEA promoter drives the effector gene, thymidine kinase gene of Herpes Simplex Virus (HSVTK). A549 cells transfected with pCEATK became 865 times more sensitive to ganciclovir (GCV) than the control cells. However, Hela cells transfected with this plasmid remained resistant to GCV. These data indicate the potential for targeted gene therapy using the CEA promoter against CEA-producing tumor cells, such as lung cancer cells. Foundation item: Supported by the National Natural Science Foundation of China Natural Science Foundation of Hubei Province Biography: XIAO Geng-fu(1966-), male, phD graduate candidate, Lecturer.     

小菜蛾颗粒体病毒的毒力作用

用定浓度、定时间、定虫数添毒法测定小菜蛾颗粒体病毒的毒力，菜苗饲养的ＬＤ５０为３．３８４×１０－４，饲料饲养的ＬＤ５０为３．００８×１０－４。从田间采回不同防治区的４龄幼虫和蛹饲养成成虫，观察逐日产卵量，得出综防区、病毒区、化防区、Ｂｔ区和对照区，每雌平均产卵量分别为１２７，１４９，２０８，２７５，２１８粒／雌，在方差分析中，Ｂｔ区、化防区与对照区相比差异不显著；病毒区和综防区与对照区相比差异显著。说明小菜蛾颗粒体病毒对小菜蛾成虫产卵量有显著影响，而Ｂｔ、顺和菜所用杀虫剂影响不大。     

Genomic sequence determination of Classical Swine Fever Virus persistent infection strain

Full genomic sequence of a newly isolated persistent infection strain of classical swine fever virus was firstly determined. It was demonstrated by sequence analyses that nucleotides homologies of this strain compared with virulent Shimen and vaccine HCLV were 89.7% and 87.7%, and homologies of amino acids were 94.8% and 93.3%, respectively. The sequencing results primarily suggest a tighter relationship between this persistent infection strain and virulent Shimen strain than vaccine HCLV strain. Foundation item: Supported by National Basic Research Developmental Project (G199911900). GenBank NO.: AF407339 Biography: Wu Hai-xiang (1976-), Ph.D. candidate, research direction: virus genetics.