人乳头瘤病毒16L1抗血清的制备和鉴定

人乳头瘤病毒16型是导致宫颈癌发生的主要因素,其晚期蛋白L1在体内或体外可自组装形成VLP颗粒.作者构建了DNA疫苗载体pDRVI1.0-16L1,大提质粒后免疫BalB/C小鼠制备抗体,并对抗体进行了特异性鉴定,为HPV16L1预防性疫苗的进一步研究和应用奠定了基础.     

应用改良导流杂交法检测103例妇女HPV基因型

目的:探讨改良导流杂交法在宫颈病变患者的人类乳头状瘤病毒(HPV)基因型检测中的应用价值.方法:应用改良导流杂交法检测103例宫颈癌筛查患者(宫颈癌组29 例,炎症组33例和正常组41例)的宫颈细胞21种HPV基因型, 并对其中的宫颈癌组同时采用杂交捕获二代系统(HC-II)行13种高危基因型HPV检测.比较两种方法检测不同HPV基因型的阳性率差异.计算用改良导流杂交法检测的各组患者不同HPV基因型的阳性率.结果:在103例研究对象中,改良导流杂交法HPV基因型检测的阳性率达46.6%, 宫颈癌组、炎症组及正常组的阳性率分别为96.6%、39.4%和17.1%, 各组间差别有显著性差异(P＜0.005); 宫颈癌患者前10位的基因型是HPV-16(16.5%)、HPV-58(7.8%)、HPV-52(7.8%)、HPV-18(5.8%)、HPV-31(5.8%)、HPV-6(4.9%)、CP8304(4.9%)、HPV-39(3.9%)、HPV-68(3.9%)和HPV-11(3.9%), 而且存在HPV双重以上的感染.与HC-II检测结果的符合率达96.6%(28/29).结论:改良导流杂交法与HC-II检测结果无差异性,可用于检测宫颈病变患者的HPV基因型.本组宫颈癌患者最常见的5种HPV基因型可能是HPV-16、HPV-58、HPV-52、HPV-18和HPV-31, 且存在更多的HPV双重以上的感染.     

FRD联合Care HPV在大同地区宫颈癌筛查中的临床研究

目的 探究叶酸受体介导的宫颈特殊染色(FRD)联合宫颈癌快速筛查(Care HPV)在大同地区宫颈癌筛查中的临床应用.方法 以自身为对照采用FRD联合Care HPV与液基细胞检查(TCT)联合Aptima HPV同时对2000例21～65岁有性生活的女性进行宫颈癌筛查,对比两种方法的检出率、病理符合率、漏诊率、敏感度...     

性激素是HPV16—DNA永生化人外宫颈上皮细胞的弱调节剂

研究激素对ＨＰＶ１６－ＤＮＡ永生化人外宫颈上皮细胞（ＨＣＥ１６／３细胞系）体外生长的影响。方法：使用［３Ｈ］－胸苷掺入试验,软琼脂糖集落试验和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法分析了性激素对ＨＣＥ１６／３细胞的生长调节和病毒基因的表达。结果：在无类固醇血清无酚红的培养条件下,雌二醇和孕酮对ＨＣＥ１６／３细胞的生长无明显影响,而胰岛素则是ＨＣＥ１６／３细胞的生长刺激素。胰岛素的刺激细胞生长作用不能被性激素所增强;雌二醇也不能诱导ＨＣＥ１６／３细胞停泊独立生长。但Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析显示性激素上调ＨＣＥ１６／３细胞病毒早期基因表达,该基因的表达可能与ＨＰＶＤＮＡ永生化细胞的生长有关。结论：ＨＣＥ１６／３细胞的生长仍然依赖于生长因子,性激素刺激病毒早期基因表达,要阐明性激素对人宫颈癌发生所起的作用,仍需做更多的工作     

SFRP1基因启动子区甲基化与宫颈癌及癌前病变的相关性研究

应用MassARRAY DNA甲基化定量分析方法检测58例宫颈癌组织、57例CIN2/3组织、36例CIN1组织及28例正常对照组织中SFRP1基因启动子区各CpG位点甲基化,探讨SFRP1基因启动子区甲基化与宫颈癌演进及与HPV16感染的相关性。结果显示:2110个CpG单位中甲基化率低于30%的CpG单位1612个,占总数的76.4%;甲基化率大于80%的CpG单位为4.4%,多分布于CIN2/3和宫颈癌组织之中。其中SFRP1基因启动子区CpG12.13和CpG18位点的甲基化率宫颈癌组高于对照、CIN1和CIN2/3组,差异具有统计学意义(P0.05)。CpG12.13和CpG18位点甲基化率与HPV16感染无相关性(P0.05)。提示SFRP1基因在CpG12.13和CpG18位点上高甲基化可能与宫颈癌的演进相关。     

液相芯片技术在人乳头瘤病毒检测和分型中的应用

从50例疑似感染人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus, HPV）患者的标本中提取DNA,运用液相芯片技术对提取的DNA进行7种低危型和19种高危型检测,并与反向点杂交检测结果进行比较.50例标本中,液相芯片检出阳性26例,阳性率为52%,其中单一亚型感染20例占40%,多重感染6例占12%,比反向点杂交的多重感染阳性检出率高4%.     

HPV16 E6基因真核表达载体的构建

本研究目的是构建HPV16 E6真核表达载体,为细胞转染研究E6蛋白和p53Arg或p53Pro蛋白的相互作用以及作用后对细胞功能的影响奠定基础。应用PCR技术从质粒pSP64-HPV16 E6上扩增出HPV16 E6片断。根据Kozak序列对真核蛋白表达的影响,设计2条引物扩增出2个HPV16 E6目的片断均插入真核表达载体pcDNA3．1／myc-His（-）A中,构建pcDNA3．1／myc-His（-）A．HPV16 E6重组质粒。研究结果显示：经酶切和测序鉴定克隆的基因片段为HPV16 E6 cDNA;建立了pcDNA3．1／myc-His（-）A-HPV16 E6重组质粒。这表明,已成功构建HPV16 E6真核表达载体pcDNA3．1／myc-His（-）A-HPV16 E6。     

子宫颈癌致病因子人乳头瘤病毒的发现——2008年度诺贝尔生理学或医学奖成果简介

瑞典卡罗林斯卡(Karolinska)学院诺贝尔奖评审委员会宣布德国科学家哈拉尔德·楚尔豪森(Harald zur Hausen)因发现人乳头瘤病毒(HPV)导致子宫颈癌,与另外两位法国科学家弗朗索瓦丝·巴尔-西诺西(Franoise Barré-Sinoussi)和吕克·蒙塔尼(Luc Montagnier)共享2008年度的诺贝尔生理学或医学奖。楚尔豪森以科学创新的精神和严格的科学实验向当时盛行的"单纯疱疹二型病毒(HSV-2)是子宫颈癌的致病因子"假说发起挑战,经过10多年的研究,于1983、1984年先后在人子宫颈癌活检标本中检测到HPV16、HPV18的基因序列,并成功克隆了HPV16型、HPV18型基因组,揭示HPV16、HPV18是子宫颈癌发病的重要病因。相继又鉴定了多种型别的HPV,提出了HPV家族具有"异质性"。发现HPV16、18的早期基因E6和E7整合于子宫颈癌宿主细胞的基因组内,提出E6和E7基因是诱发子宫颈癌的关键基因。这些重大发现极大推进了HPV研究领域的发展,也为今日HPV预防性疫苗的问世以及新HPV检测技术的不断发展奠定了科学基础。     

维吾尔族妇女宫颈癌及HPV感染与多种基因表达上调的关系

 通过对维吾尔族妇女宫颈癌病变的高表达候选基因筛查分析,寻找族群特异的宫颈癌早期预警分子指标及其与HPV感染的相关性。收集维吾尔族妇女患者子宫颈新鲜组织标本85例,其中子宫颈鳞癌53例,慢性宫颈炎32例作为对照。提取组织DNA和RNA,利用HPV特异性PCR引物鉴定HPV感染阳性和型别,采用半定量RT-PCR方法对鉴定7种候选基因的转录表达水平变化。结果表明,宫颈炎或癌旁正常组织中的TK1、SPP1和ARPC2/3 mRNA检出率较低(25%—28%),在宫颈鳞癌中明显增高(62%—66%),其差异显著(P＜0.05);但是ANX8、HSPA1A、S100-A9和S100-P基因的转录表达水平变化不明显,其差异也无统计学意义(P＞0.05)。从HPV感染的角度分析,HPV阴性患者的TK1和SPP1 mRNA表达检出率较低(50.0%和44.2%);HPV阳性患者很高(82.9%和74.2%),有统计学意义(P＜0.05)。研究表明,SPP1、TK1和ARP2/3基因表达上调可能是维吾尔族宫颈癌发生的重要标志,其中TK1和SPP1基因表达水平变化可能对HPV感染有依赖关系。     

Risk Factors of Cervical Carcinoma and Countermeasures against Them in Mountainous Area of Wufeng County ， China

0Introduction Cervicalcarcinomaisoneofprevalentmalignancy,itisthesecondmostcommoncancerofwomenintheworld wide(thefirstisbreast cancer).Itisestimatedthatthereare450000newcasesinworldeveryyear,ofwhich80%arein developingcountries.Thereare135000newcasesinChin…