重庆地区HPV亚型分布和基因芯片技术对宫颈病变筛查意义的研究

目的 了解重庆地区人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）感染情况及其亚型分布,探讨HPV的多重感染以及HPV病毒负荷量与不同级别宫颈病变的相关性,并比较HPV-DNA检测杂交捕获法和基因芯片法对宫颈HPV感染的检出效率,评价基因芯片法作为筛查方法的优缺点,为建立最佳筛查方案预防宫颈癌提供科学依据.方法 对2009年在重庆市肿瘤医院肿瘤研究所妇科肿瘤科就诊的360例自愿接受宫颈癌机会性筛查的患者进行液基细胞学和HPV-DNA的检测,其中HPV-DNA检测采用杂交捕获法和基因芯片法,并以基因测序为金标准评价两种检测方法的检测效率.结果 本次共检出27种HPV亚型,检出率前三位依次为：HPV16、HPV58和HPV52.HPV总阳性率为42.50%,其中高危型检出率为34.17%;低危型检出率为15.56%;多重感染率为15.00%.以液基细胞学检查为标准,随宫颈病变程度的增加,HPV感染率、高危型HPV感染率、多重感染率及病毒负荷量逐渐增加,组问差异有显著性,低危型HPV感染率无规律性改变.杂交捕获法和基因芯片法的灵敏度、特异度和约登指数分剐为前者97.56%、98.17%和0.957,后者98.33%、93.40%和0.917.结论 高危亚型HPV感染是宫颈上皮内病变的主要因素,HPV16是重庆地区感染率最高的HPV亚型,其次为HPV58和HPV52.HPV的多重感染和病毒负荷量都与宫颈病变程度有一定的相关性.两种HPV检测方法相比,杂交捕获法特异度较高,而基因芯片法灵敏度较高,基因芯片法可作为新的宫颈病变筛查方法.     

新疆喀什、库尔勒及石河子地区维吾尔族妇女宫颈癌HPV16感染率对比

为探讨新疆喀什、库尔勒及石河子地区维吾尔族妇女宫颈癌患者中HPV16感染率的差异.采用半巢式PCR技术对152例维吾尔族妇女宫颈癌石蜡组织中HPV16DNA进行检测.结果显示在喀什、库尔勒及石河子地区妇女宫颈癌组织中,HPV16DNA检出率分别为80%,80%及53.1%,在统计学上有差异(x2=9.566,P=0.008);喀什及库尔勒地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16感染率高于石河子地区(x2=8.247,P=0.004;x2=5.906,P=0.015).因此,新疆喀什、库尔勒及石河子地区维吾尔族妇女宫颈癌患者中HPV16感染有所不同.     

宫颈癌中HPV16感染与Ezrin表达的关系

探讨了Ezrin在宫颈病变中的表达及其与癌浸润转移的关系,以及宫颈病变组织中HPV16 DNA的表达及临床意义,探索两者之间的关系。采用免疫组化SP法检测了40例宫颈鳞状细胞癌（CSCC）、38例CIN3、28例CIN1-2和15例正常宫颈组织中Ezrin的表达。采用原位杂交法检测各组中HPV16 DNA的表达。Ezrin在正常对照组、CIN1-2组、CIN3组和CSCC组阳性率分别为26.7%（4/15）、64.3%（18/28）、63.2%（24/38）、80%（32/40）,CSCC组的表达高于正常对照组（P〈0.05）,且与临床分期和病理分级无关,但与淋巴结转移有关;上述各组中HPV16 DNA表达阳性率分别为6.7%（1/15）、25%（7/28）、65.8%（25/38）、80%（32/40）,各组明显高于正常对照组（P〈0.05）;CIN3组明显高于CIN1-2组（P〈0.05）;HPV16 DNA的表达与CSCC临床分期、病理分级及有无淋巴结转移无关;Ezrin和HPV16 DNA表达呈正相关（rs=0.476,P〈0.05）。Ezrin在CSCC中的表达与宫颈癌的侵袭性行为有关,可能成为早期宫颈癌预后指标;Ezrin和HPV16感染呈正相关,两者可能协同作用导致宫颈癌的恶性发展。     

快速敏捷检测人乳头瘤病毒基因型的实时荧光PCR方法

宫颈癌是女性最常见的一种恶性肿瘤,研究表明人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌的发生密切相关.采用实时荧光PCR技术对引起宫颈癌的两种主要HPV亚型HPV16和18型阳性质粒进行检测,在实验室中成功构建了HPV16和18型的检测体系以及体外模拟的双重感染检测体系,并对三例临床确诊为宫颈癌的标本进行实时荧光PCR验证检测,确定三例标本均为高浓度HPV16型感染,极易引起宫颈癌变,与医院诊断结果相符合.本实验为实时荧光PCR技术检测HPV16和18型的临床检验在实验室中成功地进行了探索,为实时荧光PCR技术在宫颈癌大规模筛查上的应用提供了研究基础.     

新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα第一外显子突变与HPV16感染的关系

为探讨新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα第一外显子突变与HPV16感染的关系。收集46例新疆维吾尔族宫颈癌标本,采用基因测序方法检测C/EBPα第一外显子的突变,利用PCR扩增方法分析HPV16病毒的感染,进行统计学分析。结果发现C/EBPα第一外显子突变的患者HPV16病毒感染率高。且C/EBPα第一外显子突变的患者与未突变的患者的HPV16病毒的感染率存在显著性差异。McNemanr检验P0.05双侧。由此可知,新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα基因第一外显子突变与HPV16病毒的感染相关。C/EBPα第一外显子突变可能是导致宫颈癌的一个重要因素。     

HLADQB1＊03、DRB1＊13与新疆维吾尔族、汉族HPV感染和宫颈癌的相关性研究

运用PCR及PCR-SSP技术检测HPV16 DNA和HLA DQB1＊03、DRB1＊13等位基因在新疆维族、汉族ISCC和对照组织中的分布,探讨HLA DQB1＊03,DRB1＊13等位基因与HPV16感染和ISCC的相关性及在新疆维族、汉族正常人群中的分布。结果显示：HLA DQB1＊03等位基因在维族ISCC和HPV16阳性的ISCC中的分布频率高于维族对照组,差异具有统计学意义（χ2=6.166,P〈0.05;χ2=4.336,P〈0.05）;在维族正常人群中的分布频率低于汉族正常人群,差异具有统计学意义（χ2=14.923,P〈0.05）。HLA DRB1＊13等位基因在维族、汉族ISCC和HPV16阳性ISCC分布频率与对照组比较,差异均无统计学意义;在维族正常人群中的分布频率与汉族正常人群比较,差异无统计学意义。提示HLA DQB1＊03等位基因可能是维族ISCC的遗传易感基因。     

新疆汉族乳腺癌及乳腺良性病变组织中HPV16E6的半巢式PCR检测

了解新疆地区汉族乳腺癌及乳腺良性病变组织中人类乳头状瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染的情况,探讨乳腺癌及乳腺良性病变是否存在HPV16感染及HPV16感染与乳腺癌发病之间的关系.采用半巢式PCR(semi-nested polymerase chain reaction)技术检测80例乳腺癌及60例乳腺良性病变组织中HPV16感染的情况.结果 80例乳腺癌病例中,有22例(27.5%)检测到HPV16的DNA片断;60例乳腺良性病变中,有2例(3.3%)检测到HPV16的DNA序列,检测结果作χ2检验,χ2=14.10,P<0.001,差异有统计学意义.新疆汉族乳腺癌及乳腺良性病变存在HPV16感染,HPV16在乳腺癌的发病中发挥着一定的作用.     

人乳头瘤病毒16和52型双荧光等温多自配引发扩增的

应用等温多自配引发扩增（IMSA）技术, 分别针对人乳头瘤病毒(HPV)16型的E7和52型的E6基因序列设计6条特异性引物, 并在检测体系中加入羟基萘酚蓝（HNB）和SYBR GreenⅠ的混合双荧光指示剂, 建立快速检测人乳头瘤病毒的双荧光IMSA方法. 结果表明： 340 μmol/L HNB与1∶10 000 SYBR GreenⅠ混合构建的双荧光指示剂在IMSA反应体系中具有明确的指示效果, 455 nm蓝光激发下阳性反应管双荧光显色为黄绿色, 阴性反应管双荧光显色为橘红色; 该方法对HPV16和HPV52型检测限分别达60,600拷贝/μL, 可特异性检出样品中HPV16和HPV52, 与临床检测结果比对无差异.     

CADM1基因甲基化与宫颈鳞癌及癌前病变的相关性研究

探讨CADM1 基因甲基化与宫颈鳞癌及癌前病变发生的相关性.采用MassARRY EpiTYPER DNA甲基化分析技术定量分析宫颈鳞癌(n=49)、CIN2/3(n=47)、CIN1(n=28)、正常对照组(n=24)中CADM1 基因启动子区15个CpG位点的甲基化状态.宫颈鳞癌组CADM1基因启动子区CpG_1、CpG_ 8、CpG_11、 CpG_15位点甲基化率高于CIN2/3、CIN1及正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),CIN2/3、CIN1及正常对照组间甲基化率差异没有统计学意义(P>0.05).CADM1基因CpG_ 8、CpG_11、 CpG_15甲基化率与HPV16感染呈正相关.CADM1基因特异性位点CpG_1、CpG_ 8、CpG_11、 CpG_15的甲基化可能促进了宫颈鳞癌的发生、发展,其中CpG_ 8、CpG_11、 CpG_15的甲基化可能与HPV永生化到致瘤型表型的转化有关.CADM1基因特异性CpG位点甲基化状态的改变可能导致基因转录表达沉默,是宫颈鳞癌发生发展的促进因素.