新型谷胱甘肽过氧化物酶模拟物-SeHA的合成及体外抗氧化活性研究

用化学修饰法合成了一个新的具有GPX活性的模拟物-硒化透明质酸(SeHA),其GPX活力可达276.88 U/μmol。用红外光谱和核磁共振光谱对模拟酶的结构进行研究,证明硒的修饰位点位于透明质酸的N-乙酰氨基葡萄糖的-CH2OH。为进一步研究SeHA的抗氧化活性,建立了Fe2+/Vc诱导的牛心线粒体损伤体系,对SeHA的体外生物活性进行研究。结果显示SeHA能够有效抑制损伤线粒体的膜膨胀、脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)的生成及线粒体细胞色素氧化酶(CCO)活力的降低;同时在与另一种GPX模拟物-PZ51的比较中SeHA也表现出了更为明显的体外抗氧化活性。     

葛花茯苓片的解酒作用及其机制

目的探讨葛花茯苓片的解酒作用及相关机制。方法应用56°白酒,分别观察葛花茯苓片对急性酒精中毒小鼠的醉酒时间,睡眠时间,肝脏组织中的谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及乙醇脱氢酶(ADH)含量的影响。结果葛花茯苓片能延长醉酒时间,缩短睡眠时间,并能明显提高小鼠肝组织GSH、ADH水平和抑制酒精引起的MDA含量的增加。结论葛花茯苓片具有显著的解酒作用,这可能与其提高肝组织GSH、ADH水平和抑制MDA等的抗氧化作用有关。     

谷胱甘肽合成酶在大肠杆菌中的高效表达及性质

在成功构建了谷脱甘肽（ＧＳＨ）合成酶基因表达质料（ｐＴｒｃ－ｇｓｈ）的基础上,对不同大肠杆蓖突主菌进行了比较,筛选出高效、稳定表达ＧＳＨ合成酶的工程菌并进行了最佳酶表达条件的研究。结果表明：重组工程菌Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ｐＴｒｃ－ｇｓｈ）表达量最高,质粒稳定性好;以５％接各量于３７℃、ｐＨ７．２培养至ＯＤ５５０＝０．５左右,加入诱导剂ＩＰＴＧ（０．ｍｍｏｌ／Ｌ）,同时切换培养条件为３４℃、ｐＨ６     

大片吸虫谷胱甘肽S-转移酶的提纯及生化分析

用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析法从中国广西水牛源大片吸虫（Ｆａｓｃｉｏｌａｇｉｇａｎｔｉｃａ）成虫体内提纯大片吸虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＦｇＧＳＴ）。提纯的ＦｇＧＳＴ在１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现二条清晰谱带,分子量分别为２６．５ｋＤ和２８ｋＤ。以ＣＤＮＢ为标准底物测得ＦｇＧＳＴ的活力为１７．０８μｍｏｌ／ｍｉｎｍｇ。用谷胱甘肽亲和层析柱纯化的ＦｇＧＳＴ,不仅纯度好,而且获得率高,所得ＦｇＧＳＴ至少占上柱上清液总蛋白含量的３．１％。     

葱蝇谷胱甘肽S - 转移酶基因的克隆与序列分析(动物科学)

谷胱苷肽S-转移酶(GST)是昆虫体内广泛存在的一类解毒酶,可以保护机体免受内源性或氧化物的损害。昆虫对一些杀虫剂的抗性与GST表达水平增高有关。GST的研究主要集中在杀虫剂抗性上,可将其作为昆虫的药物靶标,设计和开发新型的杀虫剂。采用RACE的方法,克隆了葱蝇(Delia antiqua)GST基因cDNA的全长序列(GenBank登录号:JQ625502),获得的cDNA全长874bp,其中阅读框ORF 627bp,编码208个氨基酸,推测其相对分子质量为23.9kD,等电点为5.83。通过该基因推导的氨基酸序列与其它物种的GST蛋白进行相似性比较和系统发育分析,发现葱蝇与丝光绿蝇(Lucilia cuprina)的谷胱甘肽转移酶氨基酸序列同源性最高。该结果进一步丰富了GST基因的基础数据,有助于葱蝇的杀虫剂抗性机理和发育机理的相关研究。     

TBBPA对美洲鳗鲡谷胱甘肽代谢相关指标的影响

在实验生态条件下,研究了TBBPA对美洲鳗鲡(Anguilla rostrata)幼鳗体内谷胱甘肽代谢相关指标的影响.在本实验暴露剂量和时间范围内,GST活性高浓度组被显著诱导;GPx活性高浓度组首先在暴露第三天被显著诱导,其后暴露第七天降低至对照组水平,中浓度组则在暴露第七天被显著诱导;GR活性仅低浓度组表现为显著抑制作用;GSH含量仅中浓度组显著增加.这些相关指标的变化间接反映了生物体受到不同程度的氧化胁迫时表现出的应激效应,有可能作为水环境中TBBPA污染的生物监测指标.对照组中除GPx活性外,其余三个指标均随时间的变化显著升高或降低.表明这些指标易受环境非污染因素扰动的影响,因此作为生物标记时应充分考虑到各种可能的影响因素.     

GST融合蛋白包涵体纯化方法的探索

克隆结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10基因,并在大肠杆菌中进行表达和纯化。用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出CFP10基因片段,克隆至pMD18-T载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pGEX-4T-1并在大肠杆菌BL21中表达,表达蛋白经SDS-PAG及Western-blot分析后,亲和层析法纯化蛋白。成功克隆了CFP10基因,并对其在E.coli中进行了表达,SDS-PAGE及Western blot分析表明表达产物正确。通过GST纯化系统获得36kD纯化蛋白,与文献报道相符,该蛋白可与CFP10 mAb特异结合,并且同时与活动期结核病人血清发生反应。成功获得了纯化的CFP10蛋白,为进一步研究CFP10蛋白的致病机理提供了实验依据。     

壬基酚或双酚A对原代培养鲫肝细胞毒性的影响

以纯化的鲫（Carassius auratus）肝细胞为试验对象,研究不同浓度壬基酚（NP）或双酚A（BPA）对肝细胞增殖、乳酸脱氢酶（LDH）释放,丙二醛（MDA）含量,谷胱甘肽-s转移酶（GST）,7-乙氧异吩噁唑酮-O-脱乙基酶（EROD）活性的影响.结果表明,鲫肝细胞暴露于不同浓度的NP或BPA 24 h后,随着NP、BPA浓度的升高,细胞增殖率明显降低（P〈0.05）;肝细胞LDH的渗出量、MDA、GST及EROD活性均显著增加（P〈0.05）.表明,NP或BPA对鲫肝细胞增具有一定的毒性作用.而且BPA对肝细胞的毒害作用要弱于NP（P〈0.05）.     

Differential generation of hydrogen peroxide upon exposure to zinc and cadmium in the hyperaccumulating plant specie （Sedum alfredii Hance）

Sedum alfredii Hance has been identified as zinc （Zn） and cadmium （Cd） co-hyperaccumulator. In this paper the relationships of Zn or Cd hyperaccumulation to the generation and the role of H2O2 in Sedum alfredii H. were examined. The results show that Zn and Cd contents in the shoots of Sedum alfredii H. treated with 1000 μmol/L Zn^2＋ and/or 200 μmol/L Cd^2＋ increased linearly within 15 d. Contents of total S, glutathione （GSH） and H2O2 in shoots also increased within 15 d, and then decreased. Total S and GSH contents in shoots were higher under Cd^2＋ treatment than under Zn^2＋ treatment. However, reverse trends of H2O2 content in shoots were obtained, in which much higher H2O2 content was observed in Zn^2＋ -treated shoots than in Cd^2＋-treated shoots. Similarly, the microscopic imaging of H2O2 accumulation in leaves using H2O2 probe technique showed that much higher H2O2 accumulation was observed in the Zn^2＋-treated leaf than in the Cd^2＋ -treated one. These results suggest that there are different responses in the generation of H2O2 upon exposure to Zn^2＋ and Cd^2＋ for the hyperaccumulator Sedum alfredii H. And this is the first report that the generation of H2O2 may play an important role in Zn hyperaccumulation in the leaves. Our results also imply that GSH may play an important role in the detoxification of dissociated Zn/Cd and the generation of H2O2.