大肠杆菌质粒DNA不同提取方法的比较

实验采用简化的碱法少量提取法、简便快速的煮沸法及试剂盒法提取质粒 p CB30 2 -3.并通过一对特异引物对质粒 DNA进行 PCR(聚合酶链式反应 )扩增 ,分别对各种方法所提取的质粒 DNA及其 PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析 ,结果表明碱法少量提取法和试剂盒法所提取的质粒 DNA纯度和产量高 ,且重复性好 ,达到了分子生物学实验要求 .其中简化的碱法少量提取法具有结果稳定和经济的特点 ,非常适合大多数实验室使用 .     

植物性转基因食品的检测与验证方法

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子(CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列，设计并合成了两对不同的引物，建立了PCR-酶切分析-Southern杂交检测并确认转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法．并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测，发现13份样品中有6份检出35S启动子和NOS终止子，7份样品结果为阴性．结果表明建立的检测与验证方法能有效检出转基因作物及其食品中的35S启动子和NOS终止子，具有灵敏度高、特异性好和结果准确的特点，可应用于进出境产品的转基因成分检测．     

纳米银颗粒增强聚合酶链式反应长片段DNA反复扩增的特异性

基因操作者经常需要把数量稀少的DNA样品进行反复扩增以供进一步研究之用.在反复扩增过程中,上一次扩增产物当作下一次扩增的模板使用.对于较短的DNA片段(几百个碱基),一般反复扩增不会遇到特别的困难;但是较长DNA片段(几千到几万个碱基)的反复扩增一般会极大地降低聚合酶链式反应(PCR)的特异性.实验中发现,当扩增较长片段基因时,在常规PCR热循环体系中添加粒径平均为70 nm的银颗粒,使反应体系纳米银颗粒浓度达到0.1～1.2μg/μL,可以在一定程度上保持PCR反复扩增反应的特异性.其机理之一可能是常规PCR反应体系在添加了纳米银颗粒后改善了溶液的导热性能.     

人类疱疹病毒6、7、8型与巨细胞病毒对大肠肿瘤致病的协同作用

目的:检测HHV-6、7、8及CMV在大肠肿瘤中的感染,探讨其致病的协同作用。方法:取20例大肠肿瘤标本,其中10例良性病变(炎性息肉、乳头状瘤和绒毛状腺瘤),10例恶性病变(癌和腺瘤恶变)。应用巢式PCR法,分别检测两组病变组织中HHV-6、7、8和MCV的DNA片段。结果:HHV-6检测结果表明恶性病变组阳性反应率为90%(9/10),良性病变组阳性反应率为60%(6/10),其产物为132bpDNA片段;HHV-7检测结果示恶性病变组阳性反应率为40%(4/10),良性病变组阳性反应率为0(0/10),其产物为92bpDNA片段;HHV-8检测结果示恶性病变组阳性反应率为90%(9/10),良性病变组阳性反应率为20%(2/10),其产物为177bpDNA片段;检测CMV结果示恶性病变样本组阳性反应率为100%(10/10),良性病变样本组阳性反应率为100%(10/10),其产物为85bpDNA片段。结论:CMV在良、恶性大肠肿瘤病变中均有较高的感染率,HHV-6、7、8在恶性病变组中感染率较良性组高,是需要警惕的致病因素。     

Chicken QTL mapping by multiplex PCR

To facilitate rapid determination of the chromosomal location of quantitative trait loci' the current approaches to gene mapping are improved using a multiplex PCR technique. The high-throughput linkage analysis method described here allows selection of 178 from 328 microsatellite markers through the multiplex PCR method combined with the semi-automatic fluorescence-labeled DNA analysis technology. Those polymorphism markers are distributed on 23 autosomes and one sex chromosome (chromosome Z). covering 3080cM genetic distance. The average marker density is 18cM. dispersed into 30 different sets. These selected polymorphism microsatellite markers segregate with the family members, following the Mendel's heritage laws, and are very useful for chicken linkage map analysis as well as for the research on some important economic quantitative characters of chicken.     

探讨人细小病毒B19与异位妊娠的关系

无菌留取85例异位妊娠妇女和43例妊娠无异常孕妇血清，用聚合酶连反应(PCR)检测的人细小病毒B19DNA，在异位妊娠组中人细小病毒B19DNA有20例阳性，阳性率为23．53％。正常对照组中，人细小病毒B19DNA有2例为阳性，阳性率为4．51％，用x^2检验，x^2＝6．47，P＜0．05，2组有显著性差异。由此总结，人细小病毒B19感染可能是异位妊娠的原因之一。     

大豆启动功能片段的PCR检测

启动子在基因的表达调控中起着关键作用．已克隆到大豆的启动子，并保存于质粒pBI 10l的多克隆住点(HindⅢ和BamHI间)上．根据GenBank中质粒pBI10l、pBI 12l的全序列设计引物，来扩增这一启动功能片段．阴性、阳性对照都得到预期的泳带，但目的启动子带却与阴性带相同，说明质粒中的启动子片段在保存过程中已丢失．     

利用SRY基因鉴定绵羊成纤维细胞性别的研究

SRY是哺乳动物性别决定的重要基因，利用绵羊SRY基因序列设计PCR引物，对绵羊胚胎来源的成纤维细胞提取总DNA进行PCR扩增，鉴定6个不同胚胎来源的成纤维细胞的性别．结果表明，3个有扩增带为雄性，3个无扩增带为雌性，为核移植选取雄性或雌性转基因成纤维细胞提供一项可行的方法．同时提取牛、山羊、小鼠的总DNA，利用绵羊SRY基因引物进行扩增，对SRY基因在哺乳动物中的保守性进行研究．结果表明，绵羊SRY基因保守区外的一对引物对雄性山羊、绵羊、牛及小鼠均能扩增出特异的DNA片段，说明SRY基因序列有很强的保守性．     

胰岛素原转化酶基因克隆及序列测定

目的研究胰岛素抵抗和胰岛素缺乏与Ⅱ型糖尿病发病机制的关系.方法Ⅱ型糖尿病普遍存在胰岛素、胰岛素原障碍,胰岛β细胞分泌出胰岛素原经胰岛素原转化酶(Prohormone convertase,PC2)去除部分肽段后形成胰岛素.结果与结论若PC降解功能异常可导致胰岛素原及其代谢产物不适当分泌引起胰岛素缺乏,研究该基因分布和表达的变化,对探讨糖尿病胰岛素抵抗的发病机制奠定基础.     

绵羊肺炎支原体PCR检测方法的建立

为检测绵羊肺炎支原体感染,根据公开发表的绵羊肺炎支原体16SrRNA序列设计特异性引物。建立了PCR诊断方法。通过对绵羊肺炎支原体标准株、临床分离株、丝状支原体山羊亚种及临床病羊鼻拭子的检测。发现应用该检测方法能够对标准株、分离株和临床病羊鼻拭子扩增出特异性产物,而对丝状支原体山羊亚种则扩增小出。证实所建方法在绵羊支原体性肺炎的诊断上具有特异性、相对快速、简便等优点,值得在临床中推广应用。