胚胎种植前遗传学诊断研究进展

目的:综述胚胎种植前遗传学诊断(PGD)研究最新进展,以指导临床实践。方法:光盘检索相关文献并进行综合分析。结果:PGD是进行优生优育的重要方法,主要采用聚合酶链反应技术(PCR)与荧光原位杂交技术(FISH)。结论:PGD具有广阔的应用前景。     

PCR技术研究新进展

介绍了实时定量RT-PCR的原理、方法和应用,包括SYBR Green I、AmpliSensor、Lightcycle技术和Complex探针技术;同时还对原位PCR技术的原理、方法和应用,简并PCR的原理、方法和应用作了综述。     

人血管内皮抑制素基因在毕赤甲醇酵母中的表达

对发生突变的人血管内皮抑制素基因进行了PCR修正,并将其连接到pAO815载体上,然后克隆进大肠杆菌TOP10F＇中,提取质粒测序,证实序列正确.再用电激法转化毕赤甲醇酵母KM71,利用RDB平板和PCR技术筛选出阳性克隆菌落后,甲醇诱导表达,SDS-PAGE电泳检测显示重组的人血管内皮抑制素蛋自在毕赤甲醇酵母KM71中获得了有效表达.     

突变型大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因的合成

利用PCR定点突变技术，以野生型大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因为模板，获取3种突变型(Cys85Ser．Cysl51Ser，Cys85／151Ser)二氢叶酸还原酶(DHFR)基因．用限制性内切酶BamH Ⅰ与Pst Ⅰ将3种突变基因片段插入到克隆载体pUC18上，进行蓝白筛选，将筛选的克隆进行DNA序列测定．     

利用PCR扩增的核糖体DNAs鉴定禾顶囊壳菌和瓶梗霉

小麦全蚀病是由禾顶囊壳菌引起的小麦根部病害,在全世界范围内普遍发生.用传统的方法鉴别和区分病原菌与非致病菌花费时间长而且有时不准确.本研究利用PCR技术,扩增了15个禾顶囊壳菌和瓶梗霉分离株的核糖体DNAs,并用限制性内切酶Dde I酶切后电泳,结果表明,该法可有效鉴别禾顶囊壳菌和瓶梗霉这2个不同的种.     

t-PA cDNA基因的克隆及测序

从基因工程菌株里氏木霉中提取基因组DNA,根据t-PAcDNA序列设计一对引物,利用PCR法扩增目的基因,将其与pMD18-T-Vector连接后转入大肠杆菌,通过Amp抗性和蓝白斑筛选出重组菌株,PCR法和双酶切法鉴定后再进行测序鉴定,测序结果表明:克隆的t-PAcDNA的第34位、450位和521位基因发生了突变。     

转基因油菜籽多重PCR-DNA芯片联用检测方法的研究

根据转基因油菜中所转入的外源基因，选择CaMV35S启动子、FMV35S，PAT基因和目的基因mCP4-EP-SPS，BAR，MS8，RF3以及内源PEP基因设计特异性引物，采用多重PCR法对待测样品进行扩增，通过缺口平移法合成DIG-dUTP标记杂交探针，并制备基因芯片，在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时，比较了芯片检测的特异性和重复性，并对检测的灵敏度进行测试，结果表明，该方法具有较好的特异性和重复性，检测灵敏度可达0．1％，由于采用了多重PCR技术一次可同时检测多个基因，提高了检测的准确性和效率．     

海水养殖沉积环境微生物总DNA的提取方法研究

传统的微生物分离与培养技术无法揭示微生物群落的动态变化.为了阐释虾池沉积环境微生态格局的原始组成情况,本研究先以TENP缓冲液去除沉积物中的腐殖酸,继之以溶菌酶-SDS温和裂解,其总DNA的提取效率达90%以上,所获DNA产量达2～20 μg/g沉积物(湿),片段大小均在23 kb左右,不经纯化即可直接进行PCR扩增和限制性酶切.以该DNA为模板进行PCR-DGGE分析,揭示了虾池沉积物丰富的微生物多样性.该方法是一种适用于虾池沉积物总DNA提取的简便、可靠方法.     

南方菟丝子18S rRNA基因片段的克隆与序列分析

根据拟南芥光敏色素B基因序列设计引物, RT-PCR扩增南方菟丝子同一基因相应片段, 扩增使用了TD PCR技术,同时获得3个特异基因片段,对长约300 bp的片段克隆后进行序列分析,显示该片段与沼泽菟丝子和拟南芥18S rRNA基因相应片段的一致性分别为98.9%和97%,结果表明,该片段为南方菟丝子18S rRNA基因片段.     

栽培黄芩生长过程中CHS和UBGAT表达及黄芩苷积累动态研究

分别采用荧光实时定量PCR和高效液相色谱法分析测定了4月到10月栽培黄芩生长过程中CHS(查尔酮合酶)及UBGAT(UDP-葡萄糖醛酸:黄芩素7-O-葡萄糖醛酸基转移酶)表达水平和黄芩苷含量的动态变化规律.结果表明CHS及UBGAT表达水平均在6月份和8月份达到高峰,而黄芩苷含量的最高峰出现在8月份.研究结果提示在黄芩栽培过程中,6月份和8月份是黄酮类合成和积累的关键时期,因此在这两个月加强田间管理对于提高黄芩药材的质量至关重要.