Spacer length variation in rice 5S rRNA genes revealed by polymerase chain reaction

Polymerase chain reaction (PCR) was used to amplify 5S rRNA spacer from wild rice (Oryza rufipogon and O. nivara) and cultivated rice (indica and japonica varieties of O. sativa L). The results show that there is spacer length variation within and between species, and the typical indica and japonica varieties have their unique banding patterns of amplified 5S rRNA spacers, whereas intermediate showed no specific amplification profile of spacer regions. The 5S rRNA genes in intermediate are either identical with that of indica variety or that of japonica variety. These data suggest that the spacer length polymorphisms can be used to distinguish between closely ralated species and subspecies. Supported by the National Natural Science Foundation of China Yi Qingming, born in Apr. 1938, Professor     

龟甲及其伪品随机扩增DNA多态性(RAPD)鉴定方法研究

目的建立一种快速、准确的龟甲及其伪品随机扩增DNA多态性(RAPD)鉴定方法,为龟甲的鉴别提供可靠依据.方法采用盐析法从龟甲及其伪品中提取mt DNA,并进行随机DNA多态性扩增.结果通过电泳图谱明显看出正品龟甲与其常见伪品mt DNA随机扩增产物条带数量和位置均不同,说明本文建立的方法可以有效区分正品龟甲与其常见伪品.结论 RAPD技术为龟甲及其伪品的鉴别提供一种简单、有效、可信度高的方法.     

普通野生稻中NBS同源序列的克隆和分析

已知的植物抗病基因大多数具有核苷结合位点（NBS）和富含亮氨酸重复（LRR）。根据NBS的保守区设计引物,应用聚合酶链式反应（PCR）,从普通野生稻基因组中克隆了4个不同的NBS同源序列（OSNBA1－OSNBA4）。同源性比较显示它们均与非TIR类的NBS序列相似,其中,OSNBA1与双子叶植物拟南芥的RPS2基因更接近;OSNBA2－OSNBA4与单子叶植物水稻的XA1、RPR1基因更相似。     

Strategies for cloning unknown cellular flanking DNA sequences from foreign integrants

Many virus and transposon DNAs can integrate into the host genome. In this review, techniques, including inverse polymerase chain reaction (IPCR), novel Alu-PCR and vectorette- or splinkerette-PCR are introduced as possible strategies for cloning flanking DNA regions of the integrants. Targeted gene-walking PCR, restriction-site PCR, capture PCR, and panhandle PCR and boomerang DNA amplification are also described. The principles, advantages and limitations of each approach are discussed. Received 9 July 1998; received after revision 2 October 1998; accepted 7 October 1998     

人共刺激分子B7-1/CD80胞外编码区cDNA的克隆及序列分析

用RT－PCR法从人外周血单核细胞克隆了编码共刺激分子B7－1／CD80胞外区的cDNA，并用Snager链终止法进行测序，结果表明，所cDNA片段的序列与GenBank中已报道的人B7－1／CD80 cDNA序列的对应部分仅有两个碱基存在差异（658位A→T，773位A→G），这为探讨B7－1／CD80分子的生物学功能奠定了基础。     

改进重叠延伸PCR克隆tau基因6种同工异构体

采用一种改进的重叠延伸PCR技术,通过2次PCR的方法,对人tau基因进行剪切和拼接,实现了tau基因的6种同工异构体的克隆;然后将6种tau基因克隆到真核载体pcDNA4上,通过western blot在蛋白水平验证了tau蛋白的表达. 结果表明,这种改进重叠延伸PCR方法能够对基因进行多个位置的剪切和连接,由于该法在基因重组过程中无需利用限制性内切酶,因此具有很大的灵活性和简便性.      

不同倍性鱼cdc2基因cDNA部分序列的克隆及其在卵巢中的表达分析

利用3-’RACE的方法分别从异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫、二倍体红鲫的卵巢中克隆了cdc2基因cDNA的部分序列.选取这3种鱼cdc2 cDNA中一段长为157 bp的保守片段设计特异引物,通过Real-time PCR检测cdc2 mRNA在这3种不同倍性鱼卵巢中的表达水平,结果表明cdc2转录量随着倍性的递增而相应升高.     

人血管内皮抑制素基因在毕赤甲醇酵母中的表达

对发生突变的人血管内皮抑制素基因进行了PCR修正,并将其连接到pAO815载体上,然后克隆进大肠杆菌TOP10F＇中,提取质粒测序,证实序列正确.再用电激法转化毕赤甲醇酵母KM71,利用RDB平板和PCR技术筛选出阳性克隆菌落后,甲醇诱导表达,SDS-PAGE电泳检测显示重组的人血管内皮抑制素蛋自在毕赤甲醇酵母KM71中获得了有效表达.     

应用PCR技术对家禽病毒性肿瘤病进行鉴别诊断的研究进展

概述聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术应用于家禽马立克氏病、禽白血病和网状内皮增生症鉴别诊断的研究进展,主要内容包括病毒的基因组结构特征,各病毒的特异性基因或序列及其ＰＣＲ引物的位置和序列,以及ＰＣＲ技术对肿瘤病特异鉴别诊断的应用。将ＰＣＲ技术与其它传统的技术进行比较,ＰＣＲ技术具有敏感性高、特异性好、快速、简便的特点,是目前鉴别诊断家禽病毒性肿瘤病最有效的、最快捷的方法之一。