粪肠球菌中具有启动功能的DNA片段的捕获及鉴定

PCR扩增来自质粒pUC119的β-内酰胺酶基因(bla)作报告基因,克隆进质粒pNZ8037上的能被Nisin诱导的启动子PnisA下游,构建了粪肠球菌启动功能片段探测载体pNZ-bla.利用该探测载体从粪肠球菌染色体总DNA中克隆到了能在粪肠球菌中表达的一系列具有启动功能的DNA片段,将包含克隆片段的pNZ-P-bla6质粒电击转化粪肠球菌,培养转化子并检测其抗氨苄强度,结果表明其抗氨苄强度大于Nisin诱导的含pNZ-bla质粒的粪肠球菌.表明克隆的功能片段启动能力强于PnisA.在pNZ-P-bla6的启动功能片段下游Sau3AⅠ和EcoRⅠ之间接上绿色荧光蛋白基因作为标记,构建表达绿色荧光蛋白的质粒载体pNZ-P-gfp并导入粪肠球菌中,共聚焦显微镜下可以观察到绿色荧光蛋白的表达.     

屎肠球菌hyl基因突变株的构建

目的：构建屎肠球菌类透明质酸酶（hyaluronidase,hyl）基因突变株,研究hyl基因的功能。方法：用pETX4577质粒构建屎肠球菌hyl基因重组自杀质粒,通过体内同源重组,筛选获得hyl基因的突变株,体外研究hyl基因缺失对突变株生长能力的影响。结果：经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、脉冲场电泳和southern blot进行鉴定获得基因突变株＊hyl。突变株在体外的生长能力低于野生株。结论：hyl基因突变株构建成功,hyl基因在生长中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。     

肠球菌临床耐药性分析及耐药基因vanM在屎肠球菌中的检测

目的了解肠球菌临床分离株耐药性及vanM基因在屎肠球菌的分布情况,为临床合理用药及探讨耐药机制提供依据.方法采用VITEK60全自动微生物分析仪对肠球菌进行鉴定及药敏试验,按NCCLS/CLSI标准判断并统计分析结果;PCR法检测耐万古霉素、替考拉宁菌株中的耐药基因vanM,并对阳性基因进行测序,分析耐药基因与耐药性的关系.结果临床分离肠球菌共506株,其中屎肠球菌277株,粪肠球菌229株.尿液标本来源比例最高,为167株（33%）;粪便标本114株（22.5%）;痰液标本78株（15.4%）;胆汁标本57株（11.3%）;脓液标本54株（10.7%）;其他来源36株（7.1%）.药敏结果显示：肠球菌对大部分临床抗菌药高度耐药,屎肠球菌对β-内酰胺类抗菌药物（氨苄西林）、喹诺酮类（左氧氟沙星）、糖肽类（万古霉素、替考拉宁）的耐药率明显高于粪肠球菌（P〈0.05）.vanM基因在耐万古霉素菌株中的检出率为100%,耐替考拉宁菌株检出率为90%.结论屎肠球菌可引起临床各类感染,屎肠球菌对大多数抗生素的耐药率明显高于粪肠球菌,且呈多重耐药趋势.vanM基因可能在糖肽类药物万古霉素、替考拉宁耐药机制中发挥重要作用.     

92株肠球菌的临床感染及耐药性分析

目的:了解肠球菌的临床感染特点和耐药性,为指导临床用药,控制感染提供依据.方法:回顾性分析2007年7月至2010年7月间从江汉大学附属医院临床标本中分离出的92株肠球菌的分布情况及药物敏感试验结果.结果:分离的92株肠球菌中粪肠球菌占73.9%,屎肠球菌13.1%,其他种类肠球菌13.0%.主要来源于尿液标本,占33.7%,且主要分布于干部病房和重症监护病房等科室.药敏结果显示耐药率最高的是环丙沙星38.0%和红霉素37.0%;青霉素G、氨苄西林和左旋氧氟沙星也呈中度耐药;替考拉宁和呋喃妥因的耐药率较低,为6.5%;未发现耐万古霉素和耐利奈唑胺的肠球菌.结论:该院肠球菌以粪肠球菌感染为主,主要引起泌尿道感染,对临床常用抗菌药物有不同程度的耐药,医务人员应根据药敏试验结果合理使用抗生素并加强对细菌耐药性的全面监测.     

Resistant penicillin-binding proteins

Low-affinity penicillin-binding proteins (PBPs), which participate in the β-lactam resistance of several pathogenic bacteria, have different origins. Natural transformation and recombination events with DNA acquired from neighbouring intrinsically resistant organisms are responsible for the appearance of mosaic genes encoding two or three low-affinity PBPs in highly resistant strains of transformable microorganisms such as Neisseria and Streptococcus pneumoniae. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus and coagulase-negative staphylococcal strains possess the mecA determinant gene, which probably evolved within the Staphylococcus genus from a closely related and physiologically functional gene that was modified by point mutations. The expression of mecA is either inducible or constitutive. A stable high-level resistant phenotype requires the synthesis of a normally constituted peptidoglycan. Enterococci have a natural low susceptibility to β-lactams related to the presence of an intrinsic low-affinity PBP. Highly resistant enterococcal strains overexpress this PBP and/or reduce its affinity.