一株红树尖瓣海莲内生真菌Penicillium sp.次级代谢产物及其生物活性研究

采用活性追踪分离的方法,综合运用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析等,从红树尖瓣海莲（Bruguiera sexangula var.rhynchopetala）来源的一株青霉属真菌Penicillium sp.（3126）的发酵产物中分离鉴定了5个化合物.根据理化性质和NMR波谱方法等,并通过与文献对照,鉴定出化合物的结构分别为：麦角甾-22-烯-3β-醇（ergosta-22-triene-3β-ol）（1）,麦角甾-5,7,22--烯-3β-醇（ergosta-5,7,22-triene-3β-ol） （2）,过氧化麦角甾醇（ergosterol peroxide）（3）,对羟基苯甲酸（4-hydroxybenzoic acid）（4）和对羟基苯甲醛（4-hydroxybenzaldehyde） （5）.以上化合物均为首次从尖瓣海莲内生真菌中分离得到.活性测试表明,甾体类化合物1、苯衍生物4和5都具有较强的卤虫致死活性.     

杜氏盐藻无菌纯化研究

首先通过杜氏盐藻及藻液内优势菌对抗生素的敏感性实验确定了氨苄青霉素、庆大霉素、头孢霉素和链霉素为该盐藻的除菌工具.采用联合加入的方法,即上述4种抗生素终浓度均为800μg/mL,相同浓度连续混合处理3次,每次处理间隔2d,再结合平板稀释分离法,获得无菌盐藻.带菌盐藻的生长稍快于无菌盐藻,但会较早出现老化现象;分别回加分离到带菌盐藻中的5种优势菌会促进无菌盐藻的生长.本实验为进一步的盐藻转基因以及藻菌关系等研究奠定了基础.     

盐藻rbcS基因克隆及其原核表达

1,5-二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶（Ribulose1,5-bisphosphate carboxylase／oxygenase,E,C．4,1．1．39简称RuBisCO）是光合作用中的关键酶,作者应用RT-PCR技术从一种极其耐盐的生物-杜氏盐藻的总RNA中克隆RuBisCO的小亚基（rbcS）的cDNA,它的开放读码框为570bp,编码190个氨基酸,将此cDNA定向克隆于原核表达载体pET-30a（＋）中,构建重组质粒pET-rbcS,经IPTG诱导,在大肠杆菌株BL21中表达．SDS-PAGE电泳表明,rbcS融合蛋白分子量约为26kDa．     

盐生杜氏藻(6-4)光裂合酶在大肠杆菌CPD缺陷株SY2中的功能鉴定

将盐生杜氏藻（6—4）光裂合酶基因Ds64PHR的编码序列构建到表达载体pET32a中,利用高效转化法将构建好的表达载体转入E．coli．CPD光裂合酶缺陷菌株SY2中,诱导表达（6-4）光裂合酶融合蛋白,对其功能进行验证．在含有Amp的LB平板上涂布相同数量的大肠杆菌,改变紫外照射强度、光照修复时间,统计最终的菌株存活率．经研究发现,在基因水平上,SY2中表达的盐生杜氏藻（6—4）光裂合酶具有修复紫外诱导损伤的功能,光照是修复功能实现的必需条件．     

盐生杜氏藻的完整叶绿体分离

盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是世界上最耐盐的一种单细胞真核绿藻,可在含0．1～5．0mol／L NaCl的培养液中正常生长．盐生杜氏藻细胞内的主要调渗物质是甘油,在甘油代谢途径中,3-磷酸甘油脱氢酶是一个关键酶．近年来的研究表明杜氏藻(Dunaliella tertiolecta)细胞质和叶绿体中都存在3-磷酸甘油脱氢酶的同工酶,且叶绿体上的同工酶与渗透调节作用直接相关,为了解D．satina中3-磷酸甘油脱氢酶同工酶的细胞定位和分布,我们通过冰浴超声波破碎和蔗糖密度梯度离心,获得盐生杜氏藻的完整叶绿体,用相差显微镜镜检、酶的活性分析等方法对其完整性作了初步分析。     

盐藻GPDH基因的载体构建及在烟草中的表达

作者用冻融法，将构建有盐藻3-磷酸甘油脱氢酶基因的植物高效表达载体DsGPDH导入感受态的根癌农杆茵EHA105中．叶盘法转化烟草，在含卡那霉素的MS培养基上进行选择性培养，生根率达到80％．用POR的方法对再生苗进行了初步筛选，阳性率约为50％．对PCR阳性苗，进行RT-PCR分析，证实整合到烟草基因组中的GPDH基因表达产生了mRNA．     

产果胶酸裂解酶的耐盐碱性菌株分离及培养条件

从江苏省沿海滩涂国家丹顶鹤自然保护区盐碱土样中,分离得到一株果胶酸裂解酶产生菌ZQX8,经形态、生理生化特征和16S rDNA鉴定,初步鉴定为枯草芽孢杆菌.该株菌的最佳培养条件为37℃、pH 6.5、0.1～0.25 mol/L NaCl,但在pH 7～9之间,0.5～1.0 mol/L NaCl浓度下仍然能较好的生长,表现出一定的耐盐性和耐碱性.该菌分泌的胞外果胶酸裂解酶的最佳底物为果胶酸,在培养基中酶活达到4 U/mL.该果胶酸裂解酶在40～60℃,pH 8～10的碱性条件下酶活较高,在600 mmol/L NaCl存在的条件下,也能保持较高的酶活,显示该酶具有一定的耐碱性和耐盐性.     

膜法浓缩盐藻的细胞破损原因初探

以细胞破损率为评价指标，分别考察了进料速率、操作压力、清洗等因素膜法浓缩盐藻对细胞破损的影响。结果表明，膜表面的流动速率与细胞破损率呈正比，流速与细胞破损率同比例增大。压力差的影响次于进料速率，且操作压差越大，对细胞破损率的影响越明显，0.03MPa压力差下的细胞破损率高于0.01～0.02MPa下破损率3%～3.5%。从细胞受力角度分析得出剪切流动是造成细胞破损的关键因素，因此在盐藻浓缩工艺中，进料速率将会是工艺的制约因素。     

Hypoosmotic shock induces a stateⅠtransition of photosynthetic apparatus in Dunaliella salina

State transition has been considered as a short-term chromatic adaptation of photosynthetic apparatus in plants[1,2]. When photosystemⅡ(PSⅡ) is excited more than photosystem Ⅰ(PSⅠ) upon illumination, the inter-system electron carriers, such as plastoquinone (PQ) and cytochrome b6f complexes (Cyt b6f), are reduced, and a thylakoid membrane-bound protein kinase for light har-vesting chlorophyll-binding protein (LHCP) is activated, resulting in LHCP phosphorylation[3]. Upon phosphoryla-…     

杜氏盐藻渗透压调节与三磷酸甘油脱氢酶同功酶的电泳分析

报道了盐藻在ＮａＣｌ浓度为０．１－３．５ｍｏｌ／Ｌ的培养液中均能够正常生长，其最适生长盐浓度为０．１－１．５ｍｏｌ／Ｌ，并能随大幅度的高渗震动。用超声波破壁后得到的细胞抽提液，经７．５％聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离出３个三磷酸甘油脱氢酶的同功酶组分。其中“调渗型”同功酶被证明与渗透压调节紧密相关，同时还发现在“调渗型”同功酶附近，有４条着色较浅的同功酶带，其变化情况与“调渗型”同功酶相似。