西藏高原盐湖植物—杜氏藻的香气成分研究

扎布盐湖世界上已知的海拔最高的丰富的嗜盐菌藻产地。本文用吸附法收集扎布耶湖中杜氏藻的香气，经色质用定性鉴定了３８个香气成分，其中大部分是藻类植物未被检检出的化合物。     

盐生杜氏藻和衣藻双结构域NAD+-GPD基因的生物信息学分析

盐生杜氏藻（Dunaliella salina）是极端耐盐的单细胞真核绿藻,依赖于NAD的3－磷酸甘油脱氢酶（NAD+-GPD）是盐生杜氏藻调渗物质——甘油合成的关键酶.盐生杜氏藻NAD+-GPD基因是第一个被发现含双结构域（SerB和GPD）的GPD基因.而双结构域可能是盐生杜氏藻具有极强耐盐性和快速合成甘油的关键.通过与莱茵衣藻基因组数据库比对,发现莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）中也存在具有SerB和GPD结构域的NAD+-GPD基因序列.在对两个物种NAD+-GPD基因的基因结构、mRNA组成成分、编码蛋白及其理化性质和编码蛋白结构的分析中,发现二者具有较高的相似性.针对目前仅在盐藻和衣藻中发现含SerB和GPD结构域的NAD+-GPD基因这一现象,分别对SerB和GPD结构域同源基因的系统进化进行了分析.     

盐藻的无菌培养及其抗生素标记的选择

对影响盐藻生长的NaNO3、NaH2PO4、NaHCO3和VB1、VB12、VH等几种主要营养盐进行了优化,在单因素实验的基础上做了四因素三水平正交实验,实验结果得出优化配方为N／P值固定为f／2培养基,NaNO3和NaH2PO4添加量为f／2培养基的10倍、NaHCO3 0．4g/L、VB1 100μg／L、VB12 1．0μg/L,其他元素按f／2培养基添加．对盐藻的选择标记进行了研究,选择了氯霉素、G418、潮霉素3种抗生素进行实验,得出氯霉素适合作为盐藻基因工程的筛选抗生素,CAT基因为其阳性筛选标记基因,固体培养基筛选浓度为80μg／mL．为该藻的进一步高密度大规模培养和分子水平的研究提供了依据．     

一种低危害的基因组DNA和总RNA的提取方法

从生物组织里提取基因组DNA和总RNA是多数专业研究人员都需要操作的实验内容,但该实验的常规操作流程中却存在致病性微生物的感染风险和有毒有害试剂的危害.本文从选择安全的实验材料和改进低危的实验方法两个方面入手,提出了以盐藻为实验材料的基因组DNA和总RNA的新的实验提取方法,该方法有效避免了致病性微生物的感染风险,也避免了有毒、挥发性试剂苯酚、氯仿和Trizol的使用,对核酸提取实验操作的安全性提供了一定的保障,可供研究者选取实验方案时参考.     

NaCl对杜氏盐藻生长的效应

不同浓度的ＮａＣｌ对杜氏盐藻的生长有显著影响，在室内温度２５±２℃，光照７０００Ｌｕｘ的培养条件下，盐藻生长的最适盐度为１４％，低盐有利于可溶性糖的积累，而可溶性蛋白质的含量以及过氧化物酶的活性以１８％为最高，盐藻体内脯氨酸含量积累不随外界盐度增大而增大，说明盐藻细胞内的渗透调节物质不是脯氨酸。     

Identification of long chain isoprenoid hydrocarbons from pyrolytic product ofDunaliella

In the pyrolytic research on Dunaliella salina cultured under natural conditions, abundant long chain regular isoprenoid hydrocarbons have been first detected and identified from algal pyrolytic product. Specially, the discovery of high abundant 2,6,10,14,18-pentamethyle-icosane indicated that regular iC25 probably originated from specific holophilic algae in hyper-saline environments. The result gave new referable evidence both for the distinguishment of biological origins of long chain isoprenoids found in sediments and petroleum and for the judgement of paleoenvironments.     

重组盐藻14-3-3蛋白基因的原核表达及分离纯化

根据克隆的杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因.经原核表达、Ni2+亲和层析法纯化,免疫动物制备抗体. 抗体蛋白质印迹分析检测结果表明抗体能特异结合盐藻细胞分子量为29 kD的多肽.     

盐生杜氏藻Dunaliella salina的生物学特性与培养研究

盐生杜兵藻富含β－胡萝卜素和蛋白质，适宜在高纬度、光照强的各种咸水环境中生长，对它的生物学特性和培养条件进行了研究，发现适宜于盐生杜氏藻生长的培养基主要成分为：２ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，５ｍｍｏｌ／ＬＫＮＯ３，６．５ｍｍｏｌ／ＬＮａＨＣＯ３，５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳｏｒ，０．３ｍｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４。     

盐生杜氏藻碱性蛋白的研究

以一种单细胞的盐生杜氏藻为实验材料，利用化学和机械的方法破碎细胞，然后梯度分离细胞核，用盐酸抽提细胞核蛋白质，并与小牛胸腺组蛋白相比较。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析测定所得的碱性蛋白发现盐生杜氏藻核中有三条碱性蛋白带，两条蛋白带与Ｈ３与Ｈ４相对应，另一条分子量很小。     

盐藻3—磷酸甘油脱氢酶基因克隆

采用Ｌａｍｂｄａ置换型载体ＥＭＢＬ３构建了盐藻基因组文库，文库大小为１．８×１０４，插入片段大小为１０～２０ｋｂ，从盐藻基因组文库中获得３个３－磷酸甘油脱氢酶基因的阳性克隆，斑点杂交证实了原位杂交的真实性