石斛共生真菌木霉菌拮抗作用的初步研究

为探讨拮抗真菌及其次生代谢产物对石斛病原菌生长的影响,从药用植物石斛中分离、鉴定和筛选出对常见病原真菌镰刀菌(Fusarium)有拮抗作用的木霉菌(Trichoderma).通过平板对峙培养,观察其对镰刀菌生长的影响;通过几丁质水解圈实验,检测木霉几丁质酶的活力.该研究所筛选获得的木霉生防菌株,可应用于石斛的栽培管理,...     

黑节铁皮石斛原球茎诱导、再分化以及腋芽萌发和生根的初步研究

对黑节铁皮石斛的原球茎诱导、再分化以及腋芽萌发和生根进行了初步的研究,以期为黑节铁皮石斛的人工繁殖提供理论指导。采用植物组织培养和单因子试验的方法,获得了黑节铁皮石斛带芽茎段最佳的消毒方式为70%酒精处理30s后再用0.1%HgCl2处理20min。黑节铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS＋KT1mg/L＋NAA0.1mg/L。黑节铁皮石斛带芽茎段原球茎再分化的最佳培养基为MS＋KT2mg/L＋NAA0.5mg/L。黑节铁皮石斛带芽茎段腋芽萌发的最佳培养基为MS＋KT2mg/L＋NAA0.5mg/L。黑节铁皮石斛带芽茎段生根的最佳培养基为1/2MS＋NAA0.5mg/L。这些实验结果为黑节铁皮石斛试管苗的工厂化生产奠定了技术基础。     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因载体构建及石斛兰转化

 细菌性软腐病是石斛兰及其它兰花栽培和生产中的一大危害。苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis（Bt）中含有aiiA基因,该基因转入一些植物可赋予植物表现出软腐病抗性。从Bt菌中克隆出aiiA基因,并装载入植物表达载体pCAMBIA1301,构建出可用于转入石斛兰的pSAN载体;首次利用根癌农杆菌EHA105将pSAN载体转入石斛兰,并获得潮霉素抗性苗。这些抗性苗经GUS组织化学染色和PCR检测证实为转基因苗, 这将为获得具有软腐病抗性的石斛兰品种打下基础。     

气相色谱法测定金钗石斛中石斛碱的含量

目的:测定贵州不同产地金钗石斛中石斛碱的含量。方法:采用气相色谱法,OV1701石英毛细管柱(30×0.32mm,0.25μm),以FID为检测器。结果:贵州赤水产金钗石斛的石斛碱含量最高,达0.259%,罗甸、兴义、独山产金钗石斛石斛碱含量分别为0.199%、0.09%和0.118%。结论:本实验建立的方法简便快捷,结果稳定,可作为中药金钗石斛中石斛碱含量测定的方法。     

铁皮石斛组培苗生根壮苗培养基的优化筛选研究

目的筛选铁皮石斛组培苗生根壮苗的适宜培养基。方法在相同的培养条件下,将铁皮石斛相同高度幼苗接种于9种不同的培养基中,记录各组组培苗的生长情况;采用紫外分光光度法测定各组组培苗的多糖含量并进行综合分析。结果铁皮石斛组培苗的生根壮苗以1/2 MS+土豆泥+0.5 mg-1·L BA+0.2 mg-1·L NAA+活性炭+花宝1号+3%蔗糖或1/2 MS+土豆泥+0.3 mg-1·L BA+0.15 mg-1·L NAA+活性炭+花宝1号+3%蔗糖的培养基为佳。     

2种石斛属植物和小叶石仙桃多糖的组织化学定位

为对不同年龄的铁皮石斛(Dendrobium candidum)、铜皮石斛(D.moniliforme)及石斛伪品-小叶石仙桃(Pholidota chinensis)不同器官中的多糖进行组织化学定位,选择具有较高药用价值的石斛类药用植物和药用部位,确定铁皮石斛的最佳采收期,根据多糖的理化性质,材料经冰冻切片,用改良的高碘酸-席夫试剂(PAS)对多糖进行组织化学定位;结果表明,多糖类物质主要存在茎的薄壁细胞、根的皮层细胞、叶的叶肉细胞中。其总多糖含量有如下顺序:二年生的铁皮石斛茎>铜皮石斛茎≈>小叶石仙桃茎,铁皮石斛根≈铜皮石斛根>小叶石仙桃根,铁皮石斛叶≈小叶石仙桃叶>铜皮石斛叶。另外,在不同的器官中,铜皮石斛的多糖含量呈现“茎≈根>叶”和小叶石仙桃的多糖含量呈现“叶>茎≈>根”的规律,而二年生的铁皮石斛则为“茎>叶>根”。这表明在种间及同种植物的不同器官、不同年龄,其多糖的含量存在差异。而3种兰科植物中,以二年生铁皮石斛茎的多糖含量最高,表明其药用价值也最高。     

原球茎为转化受体的农杆菌介导石斛遗传转化

以携带双元载体pCAMBIA1305.1的农杆菌菌株EHA105转化石斛种子萌发形成的原球茎,通过GUS瞬时表达检测对受体状态、农杆菌活化条件、共培养时间等转化影响因子进行了优化;共培养4 d的原球茎接种到含有30 mg/L潮霉素(Hyg)和500 mg/L头孢噻肟钠的愈伤组织诱导与增殖培养基上以获得潮霉素抗性的愈伤组织,抗性愈伤组织在含Hyg 50 mg/L的再生培养基上再生植株,抗性株经GUS组织化学、PCR和PCR-southem blot检测证明为转化株。     

五唇兰受精过程中卵细胞的响应

五唇兰Doritis pulcherrima Lindl．受精过程中超微结构观察结果显示：精子到达胚囊前。卵细胞呈梨形；精子到达胚囊时，卵细胞呈典型的倒梨形；精核和卵核融合时，卵细胞坐长圆型。卯核凹陷，整个精核被卵核包围着。由此可见：五唇兰受精过程的顺利进行，不仅需要精细胞的主动参与，还要卵细胞的积极响应。     

3种药用石斛多糖的抗氧化活性比较研究

比较了铁皮石斛、大苞鞘石斛和金钗石斛3种石斛茎段粗多糖、精多糖（除蛋白多糖）和多糖组分（过层析柱多糖分离组分）对DPPH、OH和O-2 3种自由基的离体抗氧化活性. 结果表明：随着多糖纯度增强和质量浓度的提高,抗氧化效果均显著增强,在12 g/L时,处理效果最佳,铁皮石斛多糖组分（DOPP-I）、大苞鞘石斛多糖组分（DWPP-I）和金钗石斛多糖组分（DNPP-I）对DPPH自由基的清除率均在75%以上,对OH自由基的清除率在 84%以上,且显著优于Vc (Vitamin c),但3种多糖组分间差异不显著;3种石斛多糖对O-2自由基的清除能力显著低于Vc,但DWPP-I的清除能力显著高于DOPP-I和DNPP-I. 总之,大苞鞘石斛多糖组分DWPP-I的抗氧化能力略优于铁皮石斛和金钗石斛.     

基于ITS2条形码对铁皮石斛及其混伪品分子鉴定的初步研究

通过分析铁皮石斛及其常见混伪品的ITS2序列差异,建立铁皮石斛药材真伪的快速鉴别方法．运用CodonCode Aligner V3．0软件对测序峰图进行校对拼接,基于隐马尔可夫模型的注释方法获得ITS2序列,采用MEGA5．0软件进行序列比对,种内种间距离计算及UPGMA聚类树构建,应用Koetschan等建立的ITS2数据库及网站预测ITS2二级结构．结果表明,铁皮石斛及其混淆品ITS2之间存在明显差异,所有铁皮石斛样品在UPGMA树上单独聚为一类．ITS2序列可以作为DNA条形码用于铁皮石斛与其混伪品的快速分子鉴别．