基于金钗石斛EST的短串联重复序列的挖掘

金钗石斛是常见的药用和花卉植物,但是缺乏在基因组尺度上对该物种的研究.本研究利用计算机程序搜索了金钗石斛EST上的短串联重复位点,共获得2 122个基序长度2～7bp,STR长度不小于12bp且重复次数不小于3的STR位点. 其中,3bp-STR最为丰富,而 2bp和6bp基序的STR位点也在可表达基因中富集.一般而言,随着基序长度的增加,STR的重复次数和分布范围减少/缩窄. 金钗石斛基因组上存在439个基因特异分布的STR位点,暗示这些STR位点可能与特定的功能基因共进化.     

铁皮石斛不同生长阶段遗传稳定性的RAPD分析

利用从20个随机引物筛选出来的3个稳定性较好的10碱基引物对已继代12到13次仍然维持在不同生长阶段、来自同一蒴果的铁皮石斛T31种群进行RAPD检测其遗传稳定性,发现不同生长阶段内遗传相似系数较高,在89．36％和100％之间,其中原球茎期的变异比萌芽期、一叶期、两叶期、开花期要显著,但程度都极其微弱．     

黑节铁皮石斛原球茎诱导、再分化以及腋芽萌发和生根的初步研究

对黑节铁皮石斛的原球茎诱导、再分化以及腋芽萌发和生根进行了初步的研究,以期为黑节铁皮石斛的人工繁殖提供理论指导。采用植物组织培养和单因子试验的方法,获得了黑节铁皮石斛带芽茎段最佳的消毒方式为70%酒精处理30s后再用0.1%HgCl2处理20min。黑节铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS＋KT1mg/L＋NAA0.1mg/L。黑节铁皮石斛带芽茎段原球茎再分化的最佳培养基为MS＋KT2mg/L＋NAA0.5mg/L。黑节铁皮石斛带芽茎段腋芽萌发的最佳培养基为MS＋KT2mg/L＋NAA0.5mg/L。黑节铁皮石斛带芽茎段生根的最佳培养基为1/2MS＋NAA0.5mg/L。这些实验结果为黑节铁皮石斛试管苗的工厂化生产奠定了技术基础。     

金钗石斛试管苗移栽基质的初步研究

金钗石斛为名贵中药材,自然繁衍慢,野生金钗石斛难以满足药用市场的需求.新兴的植物组织培养技术能够提高金钗石斛的繁衍速度,使大规模人工栽培成为可能,但试管苗移栽的基质严重地影响其成活率及生长情况.本文对金钗石斛试管苗出瓶移栽基质进行了初步的研究.结果表明:以兰石和树皮混合作为金钗石斛试管苗基质成活率高、效果最好.     

31种石斛属植物的RAPD遗传多样性分析

采用随机扩增多态性DNA技术对31种石斛属植物的遗传多样性进行分析.从100条RAPD引物中共筛选出18条引物,18条引物共扩增出1802条带,其中多态性位点有261个,多态性比为99.2％.UPGMA 聚类结果显示,基因型之间的相似系数分布于0.642～0.838之间,31种石斛属植物样品分为7类.聚类分析显示供试样...     

石斛共生真菌木霉菌拮抗作用的初步研究

为探讨拮抗真菌及其次生代谢产物对石斛病原菌生长的影响,从药用植物石斛中分离、鉴定和筛选出对常见病原真菌镰刀菌(Fusarium)有拮抗作用的木霉菌(Trichoderma).通过平板对峙培养,观察其对镰刀菌生长的影响;通过几丁质水解圈实验,检测木霉几丁质酶的活力.该研究所筛选获得的木霉生防菌株,可应用于石斛的栽培管理,...     

3种药用石斛多糖的抗氧化活性比较研究

比较了铁皮石斛、大苞鞘石斛和金钗石斛3种石斛茎段粗多糖、精多糖（除蛋白多糖）和多糖组分（过层析柱多糖分离组分）对DPPH、OH和O-2 3种自由基的离体抗氧化活性. 结果表明：随着多糖纯度增强和质量浓度的提高,抗氧化效果均显著增强,在12 g/L时,处理效果最佳,铁皮石斛多糖组分（DOPP-I）、大苞鞘石斛多糖组分（DWPP-I）和金钗石斛多糖组分（DNPP-I）对DPPH自由基的清除率均在75%以上,对OH自由基的清除率在 84%以上,且显著优于Vc (Vitamin c),但3种多糖组分间差异不显著;3种石斛多糖对O-2自由基的清除能力显著低于Vc,但DWPP-I的清除能力显著高于DOPP-I和DNPP-I. 总之,大苞鞘石斛多糖组分DWPP-I的抗氧化能力略优于铁皮石斛和金钗石斛.     

原球茎为转化受体的农杆菌介导石斛遗传转化

以携带双元载体pCAMBIA1305.1的农杆菌菌株EHA105转化石斛种子萌发形成的原球茎,通过GUS瞬时表达检测对受体状态、农杆菌活化条件、共培养时间等转化影响因子进行了优化;共培养4 d的原球茎接种到含有30 mg/L潮霉素(Hyg)和500 mg/L头孢噻肟钠的愈伤组织诱导与增殖培养基上以获得潮霉素抗性的愈伤组织,抗性愈伤组织在含Hyg 50 mg/L的再生培养基上再生植株,抗性株经GUS组织化学、PCR和PCR-southem blot检测证明为转化株。     

基于ITS2条形码对铁皮石斛及其混伪品分子鉴定的初步研究

通过分析铁皮石斛及其常见混伪品的ITS2序列差异,建立铁皮石斛药材真伪的快速鉴别方法．运用CodonCode Aligner V3．0软件对测序峰图进行校对拼接,基于隐马尔可夫模型的注释方法获得ITS2序列,采用MEGA5．0软件进行序列比对,种内种间距离计算及UPGMA聚类树构建,应用Koetschan等建立的ITS2数据库及网站预测ITS2二级结构．结果表明,铁皮石斛及其混淆品ITS2之间存在明显差异,所有铁皮石斛样品在UPGMA树上单独聚为一类．ITS2序列可以作为DNA条形码用于铁皮石斛与其混伪品的快速分子鉴别．     

2种石斛属植物和小叶石仙桃多糖的组织化学定位

为对不同年龄的铁皮石斛(Dendrobium candidum)、铜皮石斛(D.moniliforme)及石斛伪品-小叶石仙桃(Pholidota chinensis)不同器官中的多糖进行组织化学定位,选择具有较高药用价值的石斛类药用植物和药用部位,确定铁皮石斛的最佳采收期,根据多糖的理化性质,材料经冰冻切片,用改良的高碘酸-席夫试剂(PAS)对多糖进行组织化学定位;结果表明,多糖类物质主要存在茎的薄壁细胞、根的皮层细胞、叶的叶肉细胞中。其总多糖含量有如下顺序:二年生的铁皮石斛茎>铜皮石斛茎≈>小叶石仙桃茎,铁皮石斛根≈铜皮石斛根>小叶石仙桃根,铁皮石斛叶≈小叶石仙桃叶>铜皮石斛叶。另外,在不同的器官中,铜皮石斛的多糖含量呈现“茎≈根>叶”和小叶石仙桃的多糖含量呈现“叶>茎≈>根”的规律,而二年生的铁皮石斛则为“茎>叶>根”。这表明在种间及同种植物的不同器官、不同年龄,其多糖的含量存在差异。而3种兰科植物中,以二年生铁皮石斛茎的多糖含量最高,表明其药用价值也最高。