阿昔洛韦与牛血清蛋白相互作用研究

目的研究了阿昔洛韦(ACV)与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用。方法在pH为7.4的Tris-HCl缓冲液中,发现阿昔洛韦在348 nm(λex=282 nm)对牛血清白蛋白的荧光有猝灭作用。并对阿昔洛韦对牛血清白蛋白荧光猝灭的机理进行了初步探讨。结果发现在弱酸性、中性及弱碱性条件下均表现为静态猝灭。利用荧光猝灭双倒数图计算了阿昔洛韦与牛血清白蛋白之间的表观结合常数为1.48×10~4、结合位点数为1,结合位置接近于色氨酸残基,牛血清白蛋白中色氨酸残基与阿昔洛韦分子间的距离为3.138 nm。结论根据热力学参数计算确定了阿昔洛韦与牛血清白蛋白之间的主要作用力类型为疏水作用力,同时,采用同步荧光技术考察了阿昔洛韦对牛血清白蛋白构象的影响。     

顺序注射-紫外可见分析系统研究牛血清白蛋白在XC—72炭黑表面的在线吸附

以炭黑XC—72担载于PVC粉末表面所制得的XC—72/PVC复合材料为载体,利用顺序注射-紫外可见分析系统,研究了牛血清白蛋白在炭黑表面的在线吸附行为.结果表明:在pH=4.5左右,XC—72/PVC对牛血清白蛋白具有良好的吸附;在线和静态2种操作模式下的吸附行为均符合Langmuir吸附机理;相比静态吸附,在线吸附表现出操作简便、分析速度快、试剂消耗量小、自动化程度高的显著特点.认为实验结果可为研究蛋白质在炭黑表面的在线固定化提供新的技术手段和理论基础.     

牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)实时荧光定量PCR检测方法,用于牛源性样本中BHV-1的快速检测。方法 根据已发表的BHV-1 gB基因设计特异引物和TaqMan探针,建立BHV-1实时荧光定量PCR方法。并对方法的特异性、敏感性、重复性稳定性等进行测定。用建立的方法对181份牛源性样本进行检测。结果 建立的BHV-1荧光定量PCR检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型(BPIV3)、牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)均无交叉反应;检测灵敏度可达到1×101copies/μL;批内变异系数均小于5%。应用建立的方法检测181份牛源性样本,有6份样本BHV-1核酸为阳性。结论 建立的BHV-1荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本中BHV-1污染的检测。     

抗牛免疫缺陷病毒（BIV）穿膜蛋白gp45杂交瘤细胞株的建立

编码牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）穿膜蛋白的一个４００ｂｐ的基因片断被克隆到ｐＡＴＨ表达载体上，此 重组的融合蛋白ＴｒｐＥ－Ｅｎｖ８在大肠杆菌中得到高效表达，而且包含有与ＢＩＶ抗体特异性反应的抗原决定簇。我们用此融合蛋白免疫ｂａｌｂ／ｃ小鼠得到与ＢＩＶ穿膜蛋白特异性反应的杂交瘤。此单克隆抗体在蛋白印迹法分析中与重组的ＴｒｐＥ－Ｅｎｖ８有特异性反应，用免疫酶染色法可检测ＢＩＶ在体外的复制。     

牛病毒性腹泻-黏膜病的持续性感染

牛病毒性腹泻-黏膜病(BVD/MD)是一种较为特殊的病毒性传染病,除具有传染病的一般特征外,与其他绝大多数传染病的重要区别之一是产生持续性感染(PI).PI由非致细胞病变型(NCP)毒株所引起的,PI动物往往血清阴性,机体呈带毒状态并不断向外排毒,从而促进了本病的流行和蔓延,给养牛业造成了极大的危害.笔者对持续性感染原因、机理、危害、检测和防制等作简要综述.     

聚丙烯接枝聚丙烯酸中空纤维膜的pH响应性

评价了聚丙烯酸接枝改性聚丙烯中空纤维膜的pH响应性。在接枝率小于17%时,接枝膜的pH敏感性随接枝率的增加而提高。在牛血清蛋白(BSA)溶液微滤试验中,接枝膜与未接枝膜在BSA的等电点4.7处,都表现出严重的膜污染;而pH=3时,膜通量下降趋势最小。与未接枝膜相比,接枝膜在pH=3时污染较严重,而接枝率18%的膜在pH4.7和8时表现出一定的抗污染性。研究表明:蛋白质与膜之间的电荷作用以及BSA和膜构象的变化都是膜污染的重要影响因素。     

褪黑素抑制蛋白质硝基化的研究

以牛血清白蛋白为硝化底物、过氧亚硝酸为硝化试剂,研究了褪黑素对蛋白质硝基化反应的抑制作用.通过对硝基化反应各种影响因素的探讨,发现在37℃,pH7.2,反应90 min以及过氧亚硝酸浓度达到6.0×10-4mol/L时,硝基化反应进行最完全.在此硝基化条件下,分别在硝基化反应进行前、进行中以及反应后,在硝基化反应体系中引入不同浓度的褪黑素,结果显示在硝基化反应发生前加入褪黑素,抑制硝基化反应的效果最为明显.当褪黑素终浓度达到5.0×10-5 mol/L时,抑制率可达到80.7%.     

CdTe量子点与牛血红蛋白相互作用的研究

以巯基乙酸为稳定剂在水相中合成了尺寸均匀的CdTe量子点(QDs).考查了磷酸盐(PBS)缓冲体系中量子点与牛血红蛋白(Bovine Hemoglobin,BHb)之间的作用规律.结果表明,巯基乙酸修饰的CdTe量子点与BHb有较强的作用.BHb能使修饰后的CdTe量子点发生荧光淬灭现象,并且BHb的浓度以及酸度对荧光淬灭均有影响,并探讨了导致荧光淬灭的原因以及量子点与血红蛋白相互作用的机理.     

BSA-SDS-Ag聚合物纳米微粒的制备及水凝胶性质的研究

本文报道BSA-SDS-Ag聚合物纳米微粒的制备及水凝胶的性质。用X-射线衍射(XRD)．TEMb FT-IR光谱考察了这种聚合物微粒的表面结构,微粒粒径42—80nm左右;用UV／VIS光谱及SEM考察了水凝胶的性质。研究了温度,pH值,反应时间和反应物浓度对BSA-SDS-Ag水凝胶形成过程的影响。表明Ag^ 离子先与BSA产生化学键合,再还原为Ag粒,进而聚合成网状结构的聚合物。     

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的克隆、 表达及多克隆抗体制备

利用原核系统表达牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E2蛋白, 制备鼠源多克隆抗体. 通过MDBK细胞增殖病毒, 提取RNA, RT-PCR扩增E2全长基因, 进行生物信息学分析后设计截短引物, 构建优化表达载体pET-30-E2, 转化BL21, 用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达; 用SDS-PAGE电泳分析蛋白表达, 纯化蛋白联合弗氏佐剂免疫小鼠; 用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定抗体效价水平, 用免疫印迹(WB)和免疫荧光(IFA)法验证抗体特异性. 结果表明: E2基因在大肠杆菌中成功表达, 蛋白大小为32 000, 不可溶形式表达, 表达量为0.4 mg/mL; 多克隆抗体效价为1∶256 000, 可特异性结合重组蛋白及细胞中的病毒.