枯草杆菌原生质体再生前后细胞壁的变化及其对酶渗透性的影响

报道了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BF—7658原生质体的制备、再生及其传代后的细胞的电镜观察;酶产量的变化;初步证明经原生质体再生所得到的α——淀粉酶高产菌株,同其细胞壁再生过程及细胞壁的渗透性有着密切关系.     

一株产1-脱氧野尻霉素(DNJ)枯草芽孢杆菌黑色变种的诱变育种研究

1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin,DNJ)是一种哌啶生物碱,是α-葡萄糖苷酶的强抑制剂,具有降低餐后血糖、抗肿瘤转移和抗病毒等作用.目前工业生产的DNJ主要是从桑叶中提取的,价格昂贵.为了获得DNJ的稳定高产菌株,本文通过对产DNJ枯草芽孢杆菌黑色变种(Bacillus subtilis var.niger)分别采用紫外线诱变、亚硝基胍诱变和60 Coγ射线诱变方法,得到发酵培养液DNJ表达量达20.7mg/L的菌株,其表达量较初始菌株产量提高了27.7%,并对细菌的DNJ合成代谢相关基因进行了克隆和测序,菌株命名为B-231.     

Construction of recombinant industrial Saccharomyces cerevisiae strain with bglS gene insertion into PEP4 locus by homologous recombination

The bglS gene encoding endo-1,3-1,4-β-glucanase from Bacillus subtil＆ was cloned and sequenced in this study. The bglS expression cassette, including PGK1 promoter, bglS gene fused to the signal sequence of the yeast mating pheromone a-factor （MFals）, and ADH1 terminator with G418-resistance as the selected marker, was constructed. Then one of the PEP4 allele of Saccharomyces cerevisiae WZ65 strain was replaced by bglS expression cassette using chromosomal integration of polymerase chain reaction （PCR）-mediated homologous recombination, and the bglS gene was expressed simultaneously. The recombinant strain S. cerevisiae （SC-βG） was preliminarily screened by the clearing hydrolysis zone formed after the barley β-glucan was hydrolyzed in the plate and no proteinase A （PrA） activity was measured in fermenting liquor. The results of PCR analysis of genome DNA showed that one of the PEP4 allele had been replaced and bglS gene had been inserted into the locus of PEP4 gene in recombinant strains. Different endo-1,3-1,4-β-glucanase assay methods showed that the recombinant strain SC-βG had high endo-1,3-1,4-β-glucanase expression level with the maximum of 69.3 U/（h·ml） after 60 h of incubation. Meanwhile, the Congo Red method was suitable for the determination of endo-1,3-1,4-β-glucanase activity during the actual brewing process. The current research implies that the constructed yeast strain could be utilized to improve the industrial brewing property of beer.     

植物病原真菌拮抗菌Bs—98发酵特性及理化性质的研究

Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｂｓ－９８为本室分离，它对苹果轮纹病菌，小麦赤霉病菌等多种植物病原真菌有很强的抑制作用。经正交试验确定了该菌的最佳发酵条件，并验证该菌的拮抗物耐酸，耐碱且对热稳定。     

分泌载体pPSA18的构建及地衣杆菌淀粉酶在枯草杆菌中的表达和分泌

本文报道利用枯草杆菌噬菌体Spol 的启动子Spac Ⅰ,合成的解淀粉芽胞杆菌信号序列及枯草杆菌质粒PUB 18重组,构建分泌型表达载体并将地衣芽胞杆菌α-淀粉酶基因(缺失启动子及信号序列)引入构建的载体,获得重组质粒pPSA 18.将此质粒转化枯草杆菌QB1130(amy~-)感受态细胞,在含5μg/ml 卡那霉素及1%可溶性淀粉的LB 平板上筛选Km~r 及淀粉酶阳性的转化子.从阳性转化子中提取质粒,经酶切分析后重新转化枯草杆菌QB1130,得到的转化子全部都能向胞外分泌淀粉酶,证明构建的载体能在枯草杆菌中表达和分泌外源基因产物.     

混合发酵提高玉米粉的蛋白质含量

用2g玉米粉在250mL的三角瓶中与40mLNa_2HPO_4/KH_2PO_4缓冲液(1/15mol/L,pH6.81,含(NH_4)_2SO_41％)混合,然后接种枯草杆菌和热带假丝酵母,发酵基质置于摇床中30℃,120r/min培养72h,蛋白质含量由7.56％增长到28.47％(干基重,P<0.005)。     

pUB110 DNA分子的紧密型结构

经0.1%鸭血烯酸钠处理或经37℃溶菌酶作用的Bacillus subtilis BD366菌体,按碱法提取pUB110 DNA,可得到SC(超螺旋),OC(开环)和CT(Com-pact type,紧密型)结构的分子。SO和OC分子均可被EcoRⅠ,BamHⅠ和BglⅡ切成线状分子,但CT分子却不能。对pUB110DNA具有多切点的限制性内切酶Sau 3AⅠ对CT分子也不起作用。经86℃保温或沸水浴处理,CT分子能转变成SC和OC型,并可被Sau 3AⅠ酶切降解,推断CT结构可能是质粒的原始构型。     

一种改进的分离纯化枯草芽胞杆菌产脂肽抗生素的方法

对枯草芽胞杆菌B6-1的去细胞发酵液进行超滤(分子量截留6-8kD),取截留液用6 N HCI酸沉淀,沉淀再经氯仿/甲醇(2:1)和甲醇依次抽提,ODS-C18柱固相萃取,用不同浓度的甲醇水溶液依次梯度洗脱,活性最强的70%、80%、100%甲醇溶液合并.经LC-MS分析,得出这些物质属于脂肽类表面活性剂抗生素,部分分子量(1450、1464、1478、1506)与已经报道的C15、C16、C17、C19脂肽fengycins相吻合.     

粪产碱杆菌青霉素酰化酶在枯草芽孢杆菌中的表达优化

在5L发酵罐中进行了表达粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的重组枯草杆菌WB600(pMA5)的发酵研究。实验表明，发酵液中的葡萄糖浓度和菌体产酶能力密切相关，维持低葡萄糖水平，可以提高枯草杆菌WB600(pMA5)青霉素G酰化酶的合成能力。采用混合碳源进行发酵，在生长阶段流加葡萄糖，并维持低浓度，在发酵12h菌体浓度达到约13．8g／L时停止流加葡萄糖，使茵体利用发酵液中的可溶性淀粉作为碳源，避免葡萄糖的代谢副产物对茵体产酶能力的抑制，青霉素G酰化酶的表达水平从原来的55u／L提高到582u／L。