靶向hTERT的shRNA腺病毒载体的构建及其对MCF-7细胞hTERT表达的影响

设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列GGAACACCAAGAAGTTCATCT,构建siRNA表达质粒PgenesilhTERT;随后将shRNA表达框克隆到入门载体pENTRTM1A,构建重组质粒pENTR/U6-hTERT-polyA;使用同源重组方式在体外将该表达框重组到腺病毒载体pAd/PL-DEST,得到重组腺病毒质粒pAd/U6 –TERT-polyA;线性化的重组腺病毒质粒在HEK 293细胞内包装为具有感染能力的病毒颗粒rAd-hTERT.同时构建不针对任何基因的shRNA阴性对照rAd-HK,空病毒对照rAd-blank和只含EGFP的rAd -EGFP.四种病毒经酶切、电泳分析表明插入序列正确,腺病毒载体构建成功.Western blotting测定转染后各组hTERT蛋白的表达情况,证实转染rAd-hTERT 48 h后,hTERT的表达明显被抑制.实验表明基于Gateway技术的腺病毒介导的shRNA载体构建成功,rAd-hTERT可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞hTERT基因的表达.本研究为针对端粒酶的基因治疗奠定了实验基础.     

基因疗法研究的新进展

指出基因疗法是分子生物学与医用分子遗传学结合的产物,介绍了基因疗法临床应用研究进展,展望了基因疗法的前景,特别强调了上海复旦大学新近取得的基因研究重大突破在推动基因疗法快速发展中的作用。     

鼠心钠素基因的化学合成

心钠素(Atrial natriuretic factor)是最近几年发现的存在于哺乳动物心脏等器官中的一种多肽激素,它具有强大的利钠、利尿、舒张血管和降低血压的作用,因此,它在治疗高血压和心功能不全方面可能有着重要意义。本文报道了用化学方法合成鼠心钠素基因。     

基因转移鱼类研究进展

利用DNA微量注射法而获得的转基因动物是日趋发展的高科技。应用该技术繁殖鱼类已取得不同程度的成功。应用优化微量注射特别技术于鱼类并研究选择大量培养方法可生产出表达了最佳特性的基因转移鱼产品,进而促进鱼及后代的生长和抗病能力。     

PCR检测伪狂犬病病毒的研究

用ＰＣＲ的方法，扩增了伪狂犬病病毒ｇｐ５０基因的一段较为保守区。检测了不同ＰＲＶ毒株感染的ＢＨＫ细胞以及接种的家兔，并对ＰＣＲ检测的灵敏性作了初步研究。结果表明，ＰＣＲ法扩增ｇｐ５０基因具有较高特异怀和灵敏性，是检测ＰＲＶ的有效方法。     

心血管分子生物学研究进展

心血管分子生物学研究进展ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ￥／／周爱儒，汤健（北京医科大学心血管基础研究所，教授北京１０００８３）心血管病是一类严重危害人类生命健康的疾病，其发病率和病死率位于各类疾病的第...     

鼠转移抑制基因（nm23—1）在大肠杆菌中的高效表达及活力鉴定

肿瘤转移是引起恶性肿瘤患死亡的主要。对肿瘤抑制基因的研究在临床上具有重要意义。ｎｍ２３基因是目前研究得较多和认为最有前途的肿瘤抑制基因，它已从小鼠黑色素瘤细胞系Ｋ－１７３５中克隆得到。     

多药物性耐药的分子机制及其与P^53的关系

对多药性耐药分子机制的探讨与阐明,将为耐药性的逆转,提高化疗药物疗效提供理论基础并有潜在的实际意义．