根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达

黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉脂肪酶(RML)转化黑曲霉SH-1,通过PCR鉴定、酶活检测、镍柱亲和层析及SDS-PAGE电泳检测等确定成功获得了RML的黑曲霉转化子,并通过发酵条件优化实现了RML的高效表达,对硝基苯酚比色法测得转化子酶活最高可达15 U/mL,是其在酵母中表达水平的10倍以上.     

黑曲霉B1降解氧乐果特性研究

从三明农药厂污泥中分离到一株具有较高降解氧乐果活性的真菌,初步鉴定为黑曲霉(Aspergillusniger.).该菌为好氧菌,最佳生长和最佳降解氧乐果的条件相同,均为30℃,pH5.5,可利用氧乐果作为唯一磷源进行生长.在氧乐果与葡萄糖共存的分批培养过程中,黑曲霉B1对葡萄糖与氧乐果的代谢表现为典型的顺序利用特性.黑曲霉B1优先利用葡萄糖为菌体生长的碳源和能源,在葡萄糖浓度降至0.1g L时,黑曲霉B1对氧乐果的降解速率明显增加,培养5d对1g L氧乐果的降解率可达55.75%.     

黑曲霉中提取葡萄糖氧化酶的探索 Ⅰ.葡萄糖氧化酶合成及其性质

多次筛选培育获得含有较高活力葡萄糖氧化酶的黑曲霉菌株ＺＢＹ－７,在原有培养基条件的基础上,研究了培养时间、培养温度、ｐＨ、中和剂的浓度对生产葡萄糖氧化酶影响．并进一步对细胞浸出液的葡萄糖氧化酶性质进行研究．实验结果表明：胞外葡萄糖氧化酶含量远远低于胞内酶．     

静息细胞培养系统中葡萄糖氧化酶及过氧化氢酶的生物合成

黑曲霉发酵生产葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）及过氧化氢酶（ＣＡＴ）受许多因素的影响［１］．弄清楚这些因素究竟是直接对酶的生物合成起作用,还是通过影响细胞的生长,间接对酶合成起作用,用发酵法是难以判断的;但是研究清楚这些因素的可能机制,对指导该酶的发酵生产及研...     

酱油三角瓶种曲最佳培养条件试验

试验中采用沪酿３．０４２米曲霉为菌种,研究酱油三角瓶种曲培养的最佳条件为：水分５０％,温度３２℃,培养基为麸皮;面粉：葡萄糖之比８：１：１。恒温培养的孢子数优于调温培养。     

Biotransformation of the flavonoid tiliroside to 7-methylether tiliroside: bioactivity of this metabolite and of its acetylated derivative

Incubation of kaempferol-3-O-β-D-(6"-E-p-coumaroyl)-glucopyranoside (tiliroside) (1) with Aspergillus nidulans gives the 7-methyl ether of tiliroside (2) which is a new compound. Its structure is determined by spectroscopic methods. Cytotoxic studies of 2 and of its acetylated derivative 2a were carried out in vitro against fourteen human leukemic cell lines. Results clearly show that compound 2 is ineffective against all leukemic cell lines tested. On the contrary, compound 2a exhibited cytotoxic activity against four of the cell lines (HL60, DAUDI, HUT78 and MOLT3) and additionally, a dose- and time-dependent effect on DNA synthesis. Received 18 February 1997; received after revision 8 April 1997; accepted 6 May 1997     

染料脱色真菌的分离鉴定及其某些特性的研究

从土壤中分离到１株染料脱色真菌，经鉴定为温特曲霉ＨＤ１。该菌具有较宽的温度和ｐＨ值生长范围，最适生长温度和ｐＨ值分别为３０℃和４．０．ＨＤ１具有利用多种碳源和氮源进行生长以及较强脱色５种不同的结构染料的能力。     

用固定化黑曲霉C-435孢子生产柠檬酸的初步研究

用固定化细胞生产相应的产物,在工业生产中有许多优越性.近10年来,固定化细胞的应用已有许多报道,能生产菌丝体的霉菌,一般采用其分生孢子为固定化对象.1986年Tsay以海藻酸盐为包埋剂,将黑曲霉的分生孢子固定化为凝胶珠,研究了柠檬酸的生成,但对凝胶珠的泄漏,柠檬酸生成高峰期的迟滞等问题,则未见报道.本文就此问题作一些探讨.     

黑曲霉基因文库的构建及葡萄糖淀粉酶基因的克隆

用噬菌体λEMBL3 DNA为载体成功地构建了黑曲霉3758的完整的基因文库。供体黑曲霉染色体DNA经EcoRI部份酶切和蔗糖密度梯度离心,回收15—20kb片段,以一定的比例与经EcoRI处理的载体λEMBL3 DNA连接,连接产物用大肠杆菌SMR10单菌系统提取的包装蛋白进行体外包装,包装物感染宿主大肠杆菌Q359,获得2.5×10~5重组噬菌体/μgDNA的包装效率,比Clarke-Carbon公式对构建黑曲霉染色体基因文库要求的重组克隆数高10倍。以编码葡萄糖淀粉酶第329—481位氨基酸的DNA作为探针,用原位噬菌斑杂交的方法,从10~5个重组噬菌斑中筛选出2个杂交阳性噬菌斑。复筛以后,用快速法提取DNA,经EcoRI和EcoR V双酶切以后,走电泳,用Southern印迹法将DNA转移至硝酸纤维素膜上,与~(32)p-标记的探针杂交,证实葡萄淀粉酶基因位于2.5kb的EcoRI、EcoR V片段上,该片段已亚克隆至ρBR322。