黄曲霉毒素的产生机制及污染防控策略

黄曲霉是一种广泛分布的环境习居菌,经常在种植、贮藏、加工、运输过程污染玉米、花生等富含脂肪酸的粮食及相关食品和饲料,并会产生多种有毒次生代谢产物。其中,黄曲霉毒素是黄曲霉产生的最主要真菌毒素之一,是公认的一类致癌物。黄曲霉毒素污染严重影响农产品质量安全;带来巨大的经济损失和贸易争端;更重要的是,黄曲霉毒素具有高毒性、高致癌性、致突变性和免疫抑制性,严重威胁人畜健康。因此,黄曲霉毒素合成、调控及防控的相关工作一直是食品安全领域的研究重点和热点。阐述已知的黄曲霉毒素产生途径及相关调控机制,并介绍了多种有效的防控手段。重点讨论光照、温度、水活度、营养物质、pH值、氧化胁迫等环境因子对黄曲霉毒素合成的影响及已明确的调控机制;阐明了参与不同环境因子调控毒素合成的关键转录因子;同时分别从物理、化学和生物等不同技术层面介绍了多种有效抑制或降解黄曲霉毒素的方法,总结了黄曲霉毒素污染防控策略;并对今后的关键研究方向和重点防控措施做出了展望。     

产果胶酶菌株的筛选鉴定及其产酶条件的研究

为筛选果胶高效降解菌株,结合HC比值(透明圈H与菌落直径C的比值)和果胶酶活力测定,从桔子园土壤和腐烂的水果等处筛选得到1株产果胶酶活力较强的菌株M3,结合菌株形态特征观察和ITS rDNA基因序列分析,确定该菌株为聚多曲霉(Aspergillus sydowii).经发酵产酶试验可知,该菌株的最适发酵产酶条件为培养温度30℃,初始pH4.5,接种量(体积分数)7%,培养时间4 d.在该条件下发酵,果胶酶活力可达42.01 U.mL-1.     

根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达

黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉脂肪酶(RML)转化黑曲霉SH-1,通过PCR鉴定、酶活检测、镍柱亲和层析及SDS-PAGE电泳检测等确定成功获得了RML的黑曲霉转化子,并通过发酵条件优化实现了RML的高效表达,对硝基苯酚比色法测得转化子酶活最高可达15 U/mL,是其在酵母中表达水平的10倍以上.     

液态培养条件下烟曲霉去除Cd的研究

研究了一株高耐Cd的烟曲霉在实验室摇瓶培养条件下对不同浓度Cd的去除效果,测定了其在去除过程中菌株产谷胱甘肽(GSH)的变化.结果表明,在重金属Cd浓度为50mg/L时,烟曲霉去除Cd效率最佳,达到55.5%的去除率,其产生的GSH浓度达到了0.89μmol/mg.研究比较了不同环境条件下烟曲霉对Cd的去除效率,发现在温度30℃,pH5.0,加液量120mL,转速100r/min,接种量0.4mL(1.0×10~7 CFU/mL)的培养条件下,烟曲霉能达到最佳去除Cd的效率.通过这种培养条件的优化,烟曲霉较初始条件下对50mg/L Cd的去除率提高了29.8%,培养体系中GSH浓度增加了0.42μmol/mg.谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和谷胱甘肽还原酶(GR)的变化表明烟曲霉在优化的液态生长环境下可以较好去除培养体系中的重金属Cd,其产生的GSH对Cd的去除有促进作用,其解毒机制可能是依靠体内GPX和GR将应激产生的氧化性物质去除来实现.     

Biotransformation of the flavonoid tiliroside to 7-methylether tiliroside: bioactivity of this metabolite and of its acetylated derivative

Incubation of kaempferol-3-O-β-D-(6"-E-p-coumaroyl)-glucopyranoside (tiliroside) (1) with Aspergillus nidulans gives the 7-methyl ether of tiliroside (2) which is a new compound. Its structure is determined by spectroscopic methods. Cytotoxic studies of 2 and of its acetylated derivative 2a were carried out in vitro against fourteen human leukemic cell lines. Results clearly show that compound 2 is ineffective against all leukemic cell lines tested. On the contrary, compound 2a exhibited cytotoxic activity against four of the cell lines (HL60, DAUDI, HUT78 and MOLT3) and additionally, a dose- and time-dependent effect on DNA synthesis. Received 18 February 1997; received after revision 8 April 1997; accepted 6 May 1997     

染料脱色真菌的分离鉴定及其某些特性的研究

从土壤中分离到１株染料脱色真菌，经鉴定为温特曲霉ＨＤ１。该菌具有较宽的温度和ｐＨ值生长范围，最适生长温度和ｐＨ值分别为３０℃和４．０．ＨＤ１具有利用多种碳源和氮源进行生长以及较强脱色５种不同的结构染料的能力。     

用固定化黑曲霉C-435孢子生产柠檬酸的初步研究

用固定化细胞生产相应的产物,在工业生产中有许多优越性.近10年来,固定化细胞的应用已有许多报道,能生产菌丝体的霉菌,一般采用其分生孢子为固定化对象.1986年Tsay以海藻酸盐为包埋剂,将黑曲霉的分生孢子固定化为凝胶珠,研究了柠檬酸的生成,但对凝胶珠的泄漏,柠檬酸生成高峰期的迟滞等问题,则未见报道.本文就此问题作一些探讨.     

黑曲霉基因文库的构建及葡萄糖淀粉酶基因的克隆

用噬菌体λEMBL3 DNA为载体成功地构建了黑曲霉3758的完整的基因文库。供体黑曲霉染色体DNA经EcoRI部份酶切和蔗糖密度梯度离心,回收15—20kb片段,以一定的比例与经EcoRI处理的载体λEMBL3 DNA连接,连接产物用大肠杆菌SMR10单菌系统提取的包装蛋白进行体外包装,包装物感染宿主大肠杆菌Q359,获得2.5×10~5重组噬菌体/μgDNA的包装效率,比Clarke-Carbon公式对构建黑曲霉染色体基因文库要求的重组克隆数高10倍。以编码葡萄糖淀粉酶第329—481位氨基酸的DNA作为探针,用原位噬菌斑杂交的方法,从10~5个重组噬菌斑中筛选出2个杂交阳性噬菌斑。复筛以后,用快速法提取DNA,经EcoRI和EcoR V双酶切以后,走电泳,用Southern印迹法将DNA转移至硝酸纤维素膜上,与~(32)p-标记的探针杂交,证实葡萄淀粉酶基因位于2.5kb的EcoRI、EcoR V片段上,该片段已亚克隆至ρBR322。     

L—苹果酸产生菌Aspergillus flavus HLD—12产酸条件的研究

本文报道ＨＬＤ－１２菌株发酵Ｌ－苹果酸的特点．研究了碳源、氮源、温度、ＣａＣＯ３、金属离子和促进剂等因素对ＨＬＤ－１２菌株苹果酸发酵的影响，确定了ＨＬＤ－１２菌株的最佳产酸条件，其中最适碳源为８％的葡萄糖，最适氮源为０．１５％的（ＮＨ４）２ＳＯ４，ＣａＣＯ３浓度为７％。生物素和丙氨酸在一定浓度范围内能显著提高ＨＬＤ－１２菌株的产酸水平。     

里氏木霉和黑曲霉产酸性木聚糖酶及酶学特性比较

【目的】对黑曲霉和里氏木霉产酸性木聚糖酶的性能及所产粗酶的酶学特性进行分析比较,尤其是考察pH值为4时木聚糖酶酶活力及稳定性,从而确定潜在的较为理想的酸性木聚糖酶。【方法】将里氏木霉和黑曲霉接种至培养基进行产酶培养,比较分析两者的酸性木聚糖酶、酸性木糖苷酶的酶活力及酶学特性。【结果】黑曲霉酸性木聚糖酶和酸性木糖苷酶的酶活力最高分别达(52.36±2.61)U/mL和(0.57±0.01)U/mL,酸性木聚糖酶最适温度和pH值分别为55℃、5.0,酸性木糖苷酶最适温度和pH值分别为75℃、5.0;里氏木霉酸性木聚糖酶和酸性木糖苷酶的酶活力最高分别达(10.12±0.95)U/mL和(0.32±0.05)U/mL,酸性木聚糖酶最适温度和pH值分别为65℃、6.5,酸性木糖苷酶最适温度和pH值分别为65℃、4.5。黑曲霉和里氏木霉的酸性木聚糖酶兼有酸性CMCase酶活力,分别为(5.26±0.21)U/mL、(1.72±0.21)U/mL。【结论】黑曲霉所产酸性木聚糖酶明显比里氏木霉的更优良,是潜在的较为理想的酸性木聚糖酶。