桦树皮提取物抑制血管生成作用的研究

研究桦树皮提取物对血管生成的抑制作用.应用MTT法检测桦树皮提取物对人脐静脉内皮细胞的增殖抑制作用,采用Realtime PCR方法检测桦树皮提取物对人脐静脉内皮细胞中VEGFmRNA表达的影响,应用ELISA测定细胞上清液中VEGF的分泌情况.实验表明,桦树皮提取物能显著抑制人脐静脉内皮细胞增殖,最高浓度150 μg/mL其抑制率达48.4%,能明显抑制人脐静脉内皮细胞内VEGFmRNA的表达及VEGF分泌.结果表明桦树皮提取物可通过抑制细胞内VEGF mRNA的表达及VEGF的分泌有效抑制人脐静脉内皮细胞的增殖.     

基于兼并引物的PCR扩增特定基因的效果比较

根据NCBI上的DNA拓扑异构酶Ⅱ基因序列设计兼并引物,采用常规PCR、降落PCR、巢式PCR三种方法扩增糙皮侧耳和阿魏侧耳的拓扑异构酶Ⅱ部分基因序列,比较三种方法扩增效果的特异性、灵敏度.结果表明,巢式PCR的灵敏度和特异性都优于常规PCR和降落PCR,并且巢式PCR的灵敏度是常规PCR灵敏度的100倍以上,更加适合兼并引物扩增.这对利用兼并引物获取特异基因具有指导意义.     

奶牛病毒性腹泻-黏膜病毒(BVDV/MDV)病实证分析

采用酶联免疫吸附反应试验(ELISA),对南京某奶牛场的近期有流产史奶牛以及临场表现正常奶牛的血清进行BVDV及相应抗体的检测,再用反转录PCR(RT-PCR)技术对受感染奶牛所感染的BVDV类型进行分析。结果发现,该奶牛场近期有流产史奶牛BVDV重度感染,88个样本中,有84个检出BVDV,感染率高达97.62%,其中单独感染BVDV-Ⅰ(CP)型的比率有29.76%,单独感染BVDV-Ⅱ(NCP)型的比率为25%,同时感染两型的比率为42.86%。根据相对应的抗体检测结果发现有疑似持续感染(PI)牛存在。25个正常血清样本中,有8个样本检出携带有BVDV,且都是BVDV-Ⅰ(CP)型,与近期有流产史奶牛感染BVDV状况有明显差异,但由于正常血清样本数量过少,还需进一步深入研究。     

HIV相关性口腔白色念珠菌rDNA基因型研究

目的:了解HIV感染人群和健康人群口腔白色念珠菌基因型的分布情况。方法:运用CA-INT特异性引物聚合酶链反应方法扩增白色念珠菌包含1类内含子的编码rRNA的25S rDNA区,根据扩增条带大小进行基因分型,并应用χ2检验对54株HIV感染人群和54株健康人群口腔白色念珠菌基因型别进行分析。结果:CA-INT特异性引物PCR法可将108株口腔白色念珠菌分为A、B和C型,以A型最多见,两组人群口腔白色念珠菌基因型分布基本相同,但HIV感染人群口腔白色念珠菌A型所占构成比高于健康人群,差别有统计学意义。结论:HIV感染人群和健康人群口腔白色念珠菌均具有基因多态性,CA-INT特异性引物PCR法是较好的口腔白色念珠菌种内菌株间鉴定的方法。     

李斯特菌检测技术研究进展

在李氏杆菌的6个菌属中,只有李斯特菌和人类的李斯特菌症相关.因此,李斯特菌最有检测意义.本研究介绍了利用血清学、PCR、单克隆抗体和仪器法对李斯特菌的检测方法.并指出,随着分子生物学的快速发展,建立一个快速准确的检测方法成为可能.     

赤红球菌甲苯胁迫响应蛋白基因的克隆、生物信息学分析和表达变化研究

从赤红球菌SD3中克隆了一个甲苯胁迫响应蛋白基因tsrp1,该基因长度为417 bp,在GenBank的登录号为MK371001.该基因编码的蛋白质Tsrp1由138个氨基酸残基组成,理论分子量为14.2 kDa,理论等电点为4.82,不稳定系数为18.68,总平均疏水指数为-0.154,属于酸性稳定的亲水蛋白.Tsrp1无信号肽和二硫键、无跨膜区、无保守结构域,存在于细胞质中.在R.ruber SD3中Tsrp1蛋白与R. rhodochrous、R. zopfii、R. pyridinivorans、R. hoagii、M. brevis和C. manganitolerans中的序列相似蛋白的相似性分别为94.93%、71.29%、67.96%、44.58%、42.05% 和35.00%.通过分子对接发现Tsrp1与c-di-GMP存在相互作用.在甲苯和苯酚胁迫下,在赤红球菌SD3中tsrp1基因的表达分别为原来的40.19倍和14.73倍.     

PCR扩增HBV x基因特征序列检测乙肝病毒DNA

提出了通过扩增特征序列检测乙肝病毒DNA的新方法．根据乙肝病毒DNA保守区的特点,利用Primer Premier 5.0设计出乙肝病毒x基因的特异性引物,并在以血清DNA为模板的聚合酶链反应体系中进行扩增,由此检测待测血清中是否存在乙肝病毒DNA．实验结果表明,该方法较传统的酶联免疫法灵敏,可以检测出酶联免疫法所检测不到的乙肝病毒,具有与免疫印迹一样的准确度;通过与以乙肝病毒s基因为靶序列的PCR反应体系比较,发现乙肝病毒x基因比s基因在序列上更为保守,更适合做乙肝病毒DNA检测的特征序列．     

马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因5′上游调控区的分离和序列分析

利用单一特异引物聚合酶链反应技术，将马铃薯ＤＮＡ中天冬氨酸蛋白酶抑制剂家族一成员的５′上游区分离，并克隆进ｐＵＣ１８质粒ＳｍａＩ位点中．用３２Ｐ中标记的单一特异引物──ＰｒｉｍｅｒＡ为探针，经斑点杂交得一阳性克隆．ＤＮＡ测序获得含有马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因５′上游区的插入物的核苷酸序列．从这序列结构中见到ＴＡ富含区，并发现典型的调控序列ＴＡＴＡ和ＣＡＡＴ．此上游序列与国外所得到的天冬氨酸蛋白酶抑制剂的上游区相比较在序列和ＴＡＴＡ及ＣＡＡＴ盒的位置上有着很大的不同．