用加端PCR技术改造h－IGF－1cDNA

用ＤＮＡ合成仪合成了分别带有ＰｓｔＩ位点和ＳａｌＩ位点及终止密码子的２个用于扩增ｈＩＧＦ－１ｃＤＮＡ的ＰＣＲ引物．利用合成的引物，７００ｂｐ长的ｈＩＧＦ－１ｃＤＮＡ模板和Ｔａｑ聚合酶进行ＰＣＲ扩增．扩增产物经电泳鉴定后克隆进Ｍ１３ｍｐ１８载体，进行核苷酸序列分析．结果显示：ＰＣＲ产物含已发表的ｈＩＧＦ－１成熟蛋白的编码序列和５＇端的ＰＳｔＩ位点及３＇端的ＳａｉＩ位点及终止密码ＴＡＧ．用加端ＰＣＲ技术成功地扩增和改造了ｈＩＧＦ－１的编码序列．     

Studies inin situ PCR detected by the BrdU antibody technique

Using the BrdU antibody technique followed by an immuno-chemical staining (BAT), the amplification of DNA fragments specific to human Y chromosome on cell specimen slides was efficiently detected. Whether direct BrdU incorporation into PCR products orin situ hybridization with PCR products on slides, the amplified target DNA fragments of specimen were visualized by BAT under the microscope. The availability of BAT and differences in the sensitivity and efficiency between BAT and dig-11-dUTP labeling in cellin situ PCR were discussed. Zhang Xiyuan: born in Oct. 1935, Professor, Current research interest in Cellular and Molecular Biology Supported by the National Natural Science Foundation of China     

胚胎种植前遗传学诊断研究进展

目的:综述胚胎种植前遗传学诊断(PGD)研究最新进展,以指导临床实践。方法:光盘检索相关文献并进行综合分析。结果:PGD是进行优生优育的重要方法,主要采用聚合酶链反应技术(PCR)与荧光原位杂交技术(FISH)。结论:PGD具有广阔的应用前景。     

PCR技术研究新进展

介绍了实时定量RT-PCR的原理、方法和应用,包括SYBR Green I、AmpliSensor、Lightcycle技术和Complex探针技术;同时还对原位PCR技术的原理、方法和应用,简并PCR的原理、方法和应用作了综述。     

人血管内皮抑制素基因在毕赤甲醇酵母中的表达

对发生突变的人血管内皮抑制素基因进行了PCR修正,并将其连接到pAO815载体上,然后克隆进大肠杆菌TOP10F＇中,提取质粒测序,证实序列正确.再用电激法转化毕赤甲醇酵母KM71,利用RDB平板和PCR技术筛选出阳性克隆菌落后,甲醇诱导表达,SDS-PAGE电泳检测显示重组的人血管内皮抑制素蛋自在毕赤甲醇酵母KM71中获得了有效表达.     

突变型大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因的合成

利用PCR定点突变技术，以野生型大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因为模板，获取3种突变型(Cys85Ser．Cysl51Ser，Cys85／151Ser)二氢叶酸还原酶(DHFR)基因．用限制性内切酶BamH Ⅰ与Pst Ⅰ将3种突变基因片段插入到克隆载体pUC18上，进行蓝白筛选，将筛选的克隆进行DNA序列测定．     

利用PCR扩增的核糖体DNAs鉴定禾顶囊壳菌和瓶梗霉

小麦全蚀病是由禾顶囊壳菌引起的小麦根部病害,在全世界范围内普遍发生.用传统的方法鉴别和区分病原菌与非致病菌花费时间长而且有时不准确.本研究利用PCR技术,扩增了15个禾顶囊壳菌和瓶梗霉分离株的核糖体DNAs,并用限制性内切酶Dde I酶切后电泳,结果表明,该法可有效鉴别禾顶囊壳菌和瓶梗霉这2个不同的种.     

基于无线网络的入侵检测

无线网络的安全问题越来越突出,而无线网络中的Rogue攻击技术更是无线网络中有别于有线网络的特殊情况.在分析Rogue设备的检测原理及技术基础上给出了一个在WLAN环境下的入侵检测方案,此方案能防止黑客攻击.     

t-PA cDNA基因的克隆及测序

从基因工程菌株里氏木霉中提取基因组DNA,根据t-PAcDNA序列设计一对引物,利用PCR法扩增目的基因,将其与pMD18-T-Vector连接后转入大肠杆菌,通过Amp抗性和蓝白斑筛选出重组菌株,PCR法和双酶切法鉴定后再进行测序鉴定,测序结果表明:克隆的t-PAcDNA的第34位、450位和521位基因发生了突变。     

转基因油菜籽多重PCR-DNA芯片联用检测方法的研究

根据转基因油菜中所转入的外源基因，选择CaMV35S启动子、FMV35S，PAT基因和目的基因mCP4-EP-SPS，BAR，MS8，RF3以及内源PEP基因设计特异性引物，采用多重PCR法对待测样品进行扩增，通过缺口平移法合成DIG-dUTP标记杂交探针，并制备基因芯片，在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时，比较了芯片检测的特异性和重复性，并对检测的灵敏度进行测试，结果表明，该方法具有较好的特异性和重复性，检测灵敏度可达0．1％，由于采用了多重PCR技术一次可同时检测多个基因，提高了检测的准确性和效率．