人类PIF1蛋白质N-末端多肽的表达纯化和生物学活性研究

解螺旋酶参与几乎体内所有的DNA代谢,具有重要的生理功能。为了从分子水平阐述人类PIF1解螺旋酶的生理功能,我们以HeLa细胞的cDNA文库为模版,PCR扩增得到PIF1基因5’端含有1～534核苷酸的cDNA序列一PIFAC。在PIF△C的5’端引入六组氨酸标签后插入pET15b表达载体,得到重组质粒pET15-PIF△C。以此重组质粒转化Rosetta TM2（DE3）感受态细胞,使PIFAC蛋白质在大肠杆菌中得到表达。在4℃通过快速液相色谱纯化系统,通过一系列色谱层析柱纯化了PIFAC蛋白质。以纯化的PIFAC蛋白质免疫家兔制备了抗血清,并检测了纯化的PIFAC的生物化学活性。结果显示不含解旋酶模序的人类PIF1蛋白质的N-末端,具有使单链DNA复性的特性。PIF1解螺旋酶具有解开DNA双链和使双链DNA复性这一矛盾的特性,暗示了人类PIF1解螺旋酶可能参与损伤DNA的修复,包括断裂的双链DNA的修复。     

几种鹤类线粒体DNA的差异和亲缘关系分析

采用聚合酶链式反应,从丹顶鹤(G.joponensis♂)、白枕鹤(G.vipio♀)、灰鹤(G.grus)及丹顶鹤♂和白枕鹤♀的4个杂交子代中分别扩增出线粒体DNA细胞色素b基因,并测定出细胞色素b碱基序列,它们之间的序列差异在0.1%～7.2%之间.序列分析表明几种鹤类细胞色素b基因序列的碱基变化主要是转换和颠换,转换的比率大于颠换;绘制几种鹤类细胞色素b之间的亲缘关系进化树表明丹顶鹤和灰鹤的进化距离更近,4个杂交子代与母本白枕鹤的亲缘关系更近.     

CTAB法提取动物DNA

针对实际操作中常用的动物基因组DNA提取方法所面临的一些不足,对CTAB法进行改进,将其运用于动物基因组DNA的提取。结果表明,改进后的CTAB法具有时间短、质量高、成本低的优点,与实验教学中植物DNA和RNA提取的方法相一致,使分子生物学教学用品一体化,价格低廉化,效果改进,是一个不仅可以用于研究,也可以大规模用于实验教学的好方法。     

聚乙烯基吡咯烷酮对质粒DNA降解效应的研究

为评估聚乙烯基吡咯烷酮（Polyvinylpyrrolidone,PVP）的生物可利用性,研究了不同相对分子质量PVP对闭合环状双链质粒DNA pBR322的降解效应.实验结果表明：在常温、非光催化条件下,相对分子质量小的PVP（PVP8000）可引起质粒DNA构象的改变,并且这种效应与反应温度、反应时间及PVP的相对...     

DNA的CD谱和ORD谱的变换

本文介绍了用ＫｒｏｎｉｇＫｒａｍｅｒｓ变换公式将ＤＮＡ的ＣＤ谱变换成ＯＲＤ谱的方法，并将实验结果作了变换计算     

中华假磷虾线粒体DNA COⅠ基因片段序列分析

采用苯酚-氯仿提取、异丙醇沉淀提取中华假磷虾基因组DNA;以相应引物经PCR扩增得到线粒体DNA COⅠ片段;PCR产物采用化学法与载体(pGEM-T Easy Vector)重组基因、热休克法转化重组质粒至感受态大肠杆菌(JM109)、氨苄LB培养基扩大培养;测序.结果表明,中华假磷虾线粒体COⅠ碱基709 bp,其碱基组成A、T、G、C含量分别为28.59%、35.35%、17.61%和18.45%(国际基因库索引号AY754819);与同科内其它3属10种磷虾的mtCOⅠ基因片段核苷酸组成相似.     

内蒙古岱海9种鲤科鱼LDH同工酶谱的比较研究

用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对岱海水体中９种鲤科鱼类进行了ＬＤＨ同工酶谱比较研究．结果表明，种间谱型有明显差异．同工酶谱经主成分分析（ＰＣＡ）表明，草鱼和瓦氏雅罗鱼被划为一类群，在分类学上它们属雅罗鱼亚科，红鲤和普鲫被划为一个类群，它们属于鲤亚科，而红锗、团头鲂和Ｈ．ｌｅｕｃｉｓｃｕｌｕｓ被划为另一类群，它们均属亚科；鳙和白链在分类学上属鲢亚科，同工酶分析表明：鳙接近鲤亚科，而白鲢更接近于亚科．可见，这些类群的划分与经典系统分类基本上一致，表明ＬＤＨ同工酶谱的主成分分析在鱼类分类和演化研究中是一可取的研究方法．     

低功率密度微波辐射对人细胞的非热效应

采用频率为２４５０ＭＨｚ，功率密度为３，５和７ｍＷ／ｃｍ＾２的微波照射人精子１ｈ，发现３ｍＷ／ｃｍ＾２和７ｍＷ／ｃｍ＾２的微波对人精子的活动度、存活率、畸形率和穿卵率没有任何影响，而５ｍＷ／ｃｍ＾２的微波对从精子的活动度、存活率、畸形率及其穿卵率有显著的影响。实现表明，微波的非热效应不仅存在，且在５ｍＷ／ｃｍ＾２附近有明显的功率密度窗效应。     

核酸疫苗研究与发展前景

核酸疫苗是近几年新兴的一种疫苗,是将编码的保护性抗原基因构建真核表达质粒直接导入动物体细胞内,使外源基因通过机体内源性表达系统并提呈给免疫系统,诱发产生特异性的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗又称为基因疫苗或DNA疫苗,这种免疫称为核酸免疫、基因免疫、DNA介导的免疫以及遗传免疫等。目前,核酸疫苗已在病毒性疾病、细菌性疾病、寄生虫免疫、抗肿瘤免疫、预防变态反应中发挥了巨大的作用,在畜禽传染病方面主要用于猪瘟、猪口蹄疫、禽流感、鸡新城疫、鸡马立克氏病、传染性支气管炎等。一、核酸疫苗的免疫机理核…     

研究蛋白质相互作用的新系统——酵母双杂交系统

自酵母双杂交系统创建以来,已经成为研究蛋白质相互作用的重要手段,被广泛用于各个生物学研究领域,揭示了大量未知蛋白质之间的相互作用,近来,在经典的酵母双杂交系统基础上,又相继提出许多新的研究方法,如：三杂交系统,单杂交系统,逆向双杂交系统,ＳＯＳ富集系统等,酵母双杂交及其衍生系统已经成功地运用于蛋白质之间,蛋白南与ＤＮＡ、ＲＮＡ、配体之间的相互作用的研究。