电压门控性钾离子通道对人骨肉瘤细胞增殖的影响

研究钾离子通道在人骨肉瘤细胞的表达及通道抑制剂对人骨肉瘤细胞系增殖的影响.通过RT-PCR对三株人骨肉瘤细胞系MG63、Saos-2和SOSP-9607中相关钾离子通道,包括kv1.1, kv1.3, kv1.5, kv2.1, kv3.3/3.4, kv4.1, kv5.1, kv9.3, herg, heag 和kcnq1的基因表达进行检测;用非特异性的电压门控性钾离子通道抑制剂4-AP(4-aminopyridine,4-氨基吡啶)和氯化铯(CsCl),特异性的HERG、HEAG 、和KCa通道抑制剂E-4031、丙咪嗪(imipramine) 和TEA (tetraethylammonium,四乙铵)通过MTT法检测抑制剂对三株人骨肉瘤细胞系MG63、Saos-2和SOSP-9607细胞增殖的影响.通过RT-PCR发现kv1.3, kv1.5, kv2.1, kv3.3/3.4, kv4.1, kv9.3, herg和heag通道基因在三株骨肉瘤细胞系中均有表达,而kv5.1通道基因只在MG63细胞中表达,kcnq1通道基因只在SOSP-607和MG63细胞中表达.MTT法检测发现:E-4031, imipramine 和TEA 对三株骨肉瘤细胞的增殖没有明显的影响,而4-AP药物浓度在3 mol和5 mol时对细胞增殖影响明显.CSCL药物浓度在5 mol时对细胞增殖也有影响,但影响程度较4-AP小.提示钾离子通道在RNA水平广泛地表达于实验的三株人骨肉瘤细胞中,但只有电压门控性钾离子通道参与细胞增殖过程的调节.     

应用RT-PCR方法研究FSK88处理的UMRl06细胞TGF-β1的基因表达

FSK88是本实验室从植物中提取纯化的二萜类活性物质．是一种诱导分化剂．以大鼠成骨肉瘤细胞(UMRl06)为模型．分别用FSK88、RA、FR处理UMRl06细胞．研究了FSK88处理的UMRl06细胞TGF-β1的基因衰达．结果与对照组相比。FSK88组TGF-β1的基因表达上调了23．18％．     

保肢手术与个案化疗治疗骨肉瘤临床研究

为增加瘤段骨灭活的彻底性，缩短其手术灭活时间，并实施手术前后多种有效药物的个案化疗，而进行了瘤段骨超声灭活再植保肢手术与瘤细胞培养敏感药物个案化疗治疗骨肉瘤临床前瞻性随同对照研究，结果表明，观察组瘤段骨术中灭活时间明显缩短（约２０ｍｉｎ），随访期间（平均２．５ａ）无瘤生存率（６６．７％），高于对照组（手术前后固定方案非选择性化疗加单纯酒精灭活再植术）（２３．５％；Ｐ〈０．０５）。其术后合并症，局部     

人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

为了研究人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞(以下简称"MG-63细胞")形态与超微结构及终末分化指标的影响,鉴定其对MG-63细胞的诱导分化作用,以50 μg/mL人参皂甙Rg1处理MG-63细胞,光学显微镜与电子显微镜观察MG-63细胞形态、超微结构变化,免疫细胞化学方法检测成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化,并同步以HMBA处理MG-63细胞作为阳性对照.光学显微镜与电子显微镜观察结果显示细胞形态与超微结构产生了细胞形态规则、大小一致、细胞铺展体积增大,核质比例减小、核内核仁数目减少、细胞器丰富发达等与正常细胞相似的恢复性变化.观察到MG-63细胞终末分化指标I型胶原、骨粘素、骨钙蛋白的阳性表达及钙化糖原颗粒的增多与典型骨节结的形成,其变化结果与HMBA处理细胞类似.本研究证实人参皂甙Rg1能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并增强成骨细胞相关的终末分化指标的表达,从而对MG-63细胞的终末分化具有一定的诱导作用.     

基于分层赋时着色Petri网的临床路径建模

为了实现按病种设计的最佳医疗护理诊治方案和建立临床路径诊治系统,提出一种基于分层赋时着色Petri网(HTCPN)对复杂病种建立临床路径模型的方法,实现了对诊疗状态、信息流转及诊疗活动间的关系的可视化监控.基于标准元语言(SML)函数的设计,所建模型支持诊断决策信息和检查结果的实时输入,同时能够预测分析变异情况并实现路径的自动调整.设定任务时间戳对不同的患者到达速率分布进行数据仿真,基于仿真结果给出资源配置建议以改善临床路径实施效果.实验结果表明,基于HTCPN的临床路径在定性定量分析医疗诊治流程的基础上可以优化临床路径,继而为建立临床路径管理系统提供了依据.     

骨肉瘤患者行大剂量甲氨蝶呤化疗后 24h血药浓度分析

目的分析骨肉瘤患者使用大剂量甲氨蝶呤化疗后的24 h内血药浓度情况.方法将46例骨肉瘤患者作为研究对象,采用大剂量甲氨蝶呤治疗,观察化疗后24 h患者的血药浓度(C_(24 h)).结果 C_(24 h)存在规律性,与甲氨蝶呤血药浓度达标所用时间成正比.结论对C_(24 h)进行检测有益于尽早处理高血药浓度,对后续治疗计划的调整具有临床参考意义.     

人骨肉瘤细胞适配体的早期筛选

目的体外随机合成单链寡核苷酸备选文库,以骨肉瘤U-2 OS完整细胞作为靶点,筛选出与其结合的高特异性、高亲和性单链DNA(ss DNA).方法将体外合成随机碱基序列的单链DNA文库与人骨肉瘤U-2 OS细胞相结合,收获与靶细胞结合的单链DNA,通过优化PCR条件进行大量扩增后,应用生物素-链霉亲和素亲和层析柱分离出正链DNA.结果以10,14以及18个循环时扩增ds DNA产物最理想;应用生物素-链霉亲和素磁珠分离法制备的正链ss DNA纯度高,可有效保证次级文库的筛选.结论应用Cell-SELEX技术可成功筛选早期ss DNA文库,为后续获得针对人骨肉瘤U-2 OS细胞的高特异性适配体奠定实验基础.     

磷酸壳寡糖修饰阿霉素脂质体的制备及体内外评价

本研究首次合成了磷酸壳寡糖-胆固醇接枝物(PCS-Chol),并对其结构、取代度和特性黏度等进行了考察.制备了由该接枝物所修饰的磷酸壳寡糖-阿霉素脂质体(PCS-DOX-L),考察了该脂质体的粒径、包封率、形态以及体外释放.采用MTT法评价了该制剂对MG63细胞的毒性,并进一步研究了其在荷瘤裸鼠体内的组织分布情况.结果表明,该脂质体的粒径为209. 5±0. 5 nm,包封率为(85. 4±2. 2)%;体外释放具有一定的pH响应性和缓释特性.MTT实验表明该脂质体对MG63细胞的毒性具有时间和浓度双依赖性.荷瘤裸鼠的体内分布实验表明,PCS-L具有一定的骨肉瘤靶向性.本研究初步证明了PCS在体内具有良好的骨靶向性,所修饰形成的PCS-L可用于骨肉瘤的靶向治疗.     

丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用

应用细胞培养、台盼蓝拒染计数、光学显微镜观察、流式细胞仪检测及免疫细胞化学等技术研究中药有效成分丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制作用．实验结果显示，丹参酮ⅡA处理MG-63细胞后，细胞增殖活动受到抑制，抑制率为52．10％，细胞倍增时间由对照组的48h延长至65h；细胞发生G0／G1期阻滞，G0／G1期细胞比例由对照组的47．5％上升到59，5％，S期细胞比例则由对照组的20．0％下降至9．0％；并出现细胞形态规则、大小趋于一致、细胞体积增大、核质比例减小等变化；MG-63细胞增殖分化调控相关的癌基因c-fos和c-myc表达活性降低．结果表明，丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖有显著抑制作用，其作用可能与干预c-fos和c-myc等癌基因表达从而调控细胞周期有关．     

Human Soluble TRAIL Protein Inducing Apoptosis in Osteosarcoma Cell

This study is to examine the effect of human recombinant soluble TRAIL （TNF-related apoptosis-inducing ligand） protein inducing apoptosis in MG-63 human osteosarcoma cells. The inhibitive rates of TRAIL to MG-63 cells were detected by MTT assay. The apoptosis induced by TRAIL in MG-63 human osteosarcoma cells was analyzed with FACS and TUNEL and the apoptotic bodies were observed by transmission electron microscope. MTT assay showed that the inhibitive rates of 500, 1 000, 2 000 and 4 000 ng/mL TRAIL for 24 h were 10.1%, 24.3%, 50.6% and 97.7% respectively. Flow cytometric analysis showed that after MG-63 cells were treated with 2 gg/mL TRAIL for 6 h, obvious apoptotic peak would immediately appear before diploid peak. Human soluble TRAIL protein can quickly kill MG-63 osteosarcoma cells selectively, and may have potential value for clinical treatment of osteosarcoma.