日本血吸虫卵壳蛋白编码基因的扩增及克隆

目的:扩增和克隆日本血吸虫卵壳蛋白编码基因(SjESG),以研究其作为候选疫苗分子和药物靶点的可能性.方法:合成引物,以日本血吸虫雌、雄虫cDNA第一链为模板,RT-PCR扩增日本血吸虫卵壳蛋白编码基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建原核表达重组质粒,并经限制性核酸内切酶酶切分析和PCR鉴定.结果:从雌虫cDNA中扩增出624bp SjESG基因,原核表达重组质粒pET32a(+)-SiESG经限制性核酸内切酶酶切和PCR均获得624bp的DNA片段.结论:成功构建原核表达重组质#ipET32a(+)-SjESG.     

信息生物学--关于编码信息量的两个假设

提出并论证了关于编码信息量的两个规律.第一,基因组的编码信息量在进化中随时间增加.第二,基因序列的碱基频数分布决定于多样性的稳定化.此二规律和其他规律一起构成了信息生物学的理论基础.不同于生物信息学,信息生物学将以生命信息的遗传,传输,调节和表达的基本规律为研究中心.     

利用环介导恒温扩增法简易诊断松萎蔫病Takuya Aikawa,Natsumi Kanzak,Taisei Kikuch

诊断松萎蔫病的传统方法是从木质组织中分离松材线虫,然后用显微镜进行形态学鉴定。基于DNA分子检测的方法尽管很灵敏,不需要固定发育阶段的松材线虫,但是仍然需要用Baermann 漏斗法分离线虫,并且需要昂贵的仪器。笔者研发了利用环介导恒温扩增法检测松材线虫的存在,该方法包括：(1) 从木块中提取DNA;(2) DNA 扩增;(3) 通过反应溶液的颜色做出诊断。该方法仅使用培养箱且整个过程只需要90 min,比以往方法更加简便和快速。     

三点苜蓿盲蝽线粒体Cyt b基因扩增条件研究

以三点苜蓿盲蝽为材料,采用SDS-蛋白酶K消化法提取其基因组DNA,利用CB-1、CB-2昆虫通用特异性引物对线粒体Cyt b基因433 bp片段进行PCR扩增,获得三点苜蓿盲蝽线粒体Cyt b基因的最佳扩增条件.     

扩增引进限制性酶切位点技术检测CYP2C9基因的多态性

建立了一种简便、快速、准确的检测CYP2C9基因Arg144Cys位点和Ile359Leu位点多态性的新方法.该方法采用与模板具有1个碱基错配的引物通过PCR在扩增产物中引进限制性酶切位点,即扩增引进限制性酶切位点(amp lification-created restriction sites,ACRS),其中通过上游引物在扩增Arg144Cys位点的片断中引入AvaⅡ切点,使得野生型基因CYP2C9*1和突变型基因CYP2C9*2的PCR产物中分别含有2个和1个AvaⅡ切点;通过下游引物在扩增Ile359Leu位点的片断中引入MvaⅠ切点,使得野生型基因CYP2C9*1和突变型基因CYP2C9*3的PCR产物中分别含有1个和2个MvaⅠ切点.将来自Arg144Cys位点和Ile359Leu位点的PCR产物各取一份测序,表明错配碱基成功引入PCR产物中.将包含Arg144Cys位点的PCR产物用AvaⅡ消化,将包含Ile359Leu位点的PCR产物用MvaⅠ消化,然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染进行基因分型.由于野生型基因和突变型基因的PCR产物中都至少含有1个酶切位点,能完全避免因限制性核酸内切酶失活或酶切不完全而导致的基因分型错误.     

中心区和边缘区大仓鼠种群的遗传多样性

生态环境破碎对种群遗传多样性的影响是当前异质种群理论与保护生物学研究的热点之一。应用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术,以１９９９年华北平原及周边５个地区的大仓鼠（Ｃricetulus triton)种群为实验材料,研究了中心区、边缘区和半岛区种群遗传多样性的差异,发现：（１）位于分布中心区的饶阳种群遗传多样性较高,位于次中心的固安、太康种群遗传多样性次之,位于边缘区和半岛区的顺义和门头沟种群遗传多样性较低;（２）种群遗传多样性与该种群离边缘区的距离呈显示正相关;（３）许多ＲＡＰＤ位点表型频率在５个地区存在显著差异,边缘区种群ＲＡＰＤ位点缺失明显多于中心区种群,有个ＲＡＰＤ位点表型频率与纬度呈显著相关。研究结果表明,造成不同地区种群遗传多样性差异的主要因素是边缘和片段效应,遗传漂变和近亲交配的效应是导致边缘种群遗传多样性降低的主要因素,研究结果支持边缘效应,隔离小种群遗传多样性降低的观点。     

东方蜜蜂微孢子虫环介导恒温扩增检测方法的建立

以从重庆酉阳分离到的东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)为研究对象,以该物种16SrDNA作为靶标,设计引物并采用环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测东方蜜蜂微孢子虫。实验结果显示,LAMP检测的最佳条件为内引物浓度5μmol·L-1,聚合酶用量800U;以研究对象16SrDNA质粒为模板,LAMP检测的最低质量浓度为1.735×10-2ng·μL-1,PCR检测的最低质量浓度为1.735×10-1ng·μL-1;以研究对象基因组DNA为模板,LAMP检测的最低质量浓度为1.475×10-3ng·μL-1,PCR检测的最低质量浓度为1.475×10-1ng·μL-1;以研究对象基因组DNA、正常中蜂(Apis cerana)中肠基因组DNA、正常意蜂(Apis mellifera ligustica)中肠基因组DNA、正常家蚕(Bombyx mori)中肠基因组DNA、蜜蜂球囊菌(Ascosphaera a pis)孢子基因组DNA和中蜂囊状幼虫病毒cDNA作为模板进行检测,其中只有以研究对象基因组DNA为模板时,LAMP扩增才有条带。以上研究提示具有高灵敏度和高特异性的LAMP检测方法是东方蜜蜂微孢子虫检测的一个有效工具,可为后期在养蜂场建立快速有效的检测工具奠定基础。
     

中国水仙种质资源的遗传多样性分析

用随机扩增多态DNA（RAPD）标记方法对中国水仙主要栽培品种及不同的生态类型进行了遗传多样性检测。从98个随机引物中筛选出16个有效引物，共扩增出120条DNA带，其中多态位点39个，占32．5％。相对其他作物，中国水仙遗传多样性水平偏低。中国水仙遗传多样性贫乏可能是现有中国水仙品种稀少的重要原因。用UPGMA法对各样品间的Nei氏相似性系数进行聚类分析。结果显示，崇明水仙与漳州水仙亲缘关系十分密切，平潭水仙与漳州水仙亲缘关系相对较远。平潭水仙和崇明水仙各居群内的遗传分化很小，而漳州水仙居群内遗传多样性较为丰富。以栽培品种看，单瓣水仙与重瓣水仙亲缘关系密切，“金三角”与单瓣水仙、重瓣水仙两者的亲缘关系较远。基于研究结果，提出采用新技术引进新种质选育水仙新品种的思路和保护中国水仙资源的重要性。     

蓖麻蚕性细胞发育过程染色体的银染观察

用银染法观察了蓖麻蚕生殖细胞的染色体。结果表明：有丝分裂中期染色体上无特异的ＮＯＲｓ；精母细胞减数分裂偶线期和粗线期核仁逐步弥散，粗线期之后有一个染色体分散为染色质，核仁弥散于其中形成嗜银的二价体的第二收缩期和混乱期；卵母细胞的相应时期，有一个核仁扩增的过程。依据染色体嗜银性的强弱，探讨了前期Ⅰ，中期Ⅰ以及有丝分裂中期染色体的ｒＤＮＡ转录活性。     

2.15 kDa人脑髓鞘硷性蛋白cDNA的体外扩增

髓鞘硷性蛋白(MBP)是脊椎动物神经系统髓鞘膜的外周蛋白,它对有鞘神经的绝缘和块速传导具有重要作用.人和鼠MBP基因均含7个(Ⅰ—Ⅶ)外显子,但其原始转录体剪接方式不同.人MBP至少有21.5,20,18.5和17kDa等4种,其中唯21.5kDa是