实时荧光定量PCR技术检测牙周炎致病菌中16S rRNA DNA探针的制备

利用实时荧光定量PCR和细菌16S rRNA测定技术制备牙龈卟啉菌染色体探针,并进行检测,为进一步研究牙周病可疑致病菌提供方法.主要方法是:厌氧环境下培养牙龈卟啉菌,抽提细菌DNA;根据基因库已知牙龈卟啉菌16S rRNA DNA序列,设计特异性的TaqMan探针和一对引物;经实时荧光定量PCR仪进行细菌DNA样本的PCR反应获得反应曲线.结果表明,细菌DNA样本经PCR反应后,在15个循环时,开始出现扩增曲线,此后荧光逐渐增强,在26个循环后达峰值.由此可见,利用细菌16S rRNA技术制备致病菌染色体探针,经实时荧光定量PCR测定,可以对目标微生物进行准确定性和定量.     

SLE患者血清抗Sm抗体免疫PCR的方法学评价

目的为SLE患者血清抗Sm抗体提供免疫PCR测定方法.方法评价免疫PCR方法检测抗Sm抗体的特异性、敏感性、重复性和相关性.结果免疫PCR方法测定SLE患者血清抗Sm抗体特异性强,敏感性是ELISA方法的107倍,而且与ELISA方法呈高度正相关.结论免疫PCR方法用于血清抗Sm抗体测定具有临床实用价值.     

不同品种猪解耦联蛋白基因3′调控区的遗传变异

对猪UCP3基因3′调控区进行了克隆测序，通过序列比对分析发现长白猪、内江猪、民猪和二花脸猪存在15个碱基位点的多态，利用PCR-RFLP分析长白猪、大白猪、内江猪、民猪、二花脸猪及梅山猪存在连续的9个多态位点，经X^2检验发现二花脸猪与长白猪、大白猪、内江猪和民猪差异极显著，与梅山猪差异显著，梅山猪与长白猪、民猪差异显著，提示太湖猪具有独特的种质特性。     

转基因花卉的DNA提取与多重PCR分析

分别以CTAB法、DNA提取试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊3种花卉的基因组DNA，凝胶电泳结果表明试剂盒提取的效果较好。设计合成了3对引物，分别扩增花椰菜花叶病毒（Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因（nos）终止子、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(nptⅡ）基因。普通PCR检测结果表明，3种花卉6个样品中仅矮牵牛的1个样品含有这3种转基因成分，酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性。尝试以多重PCR同时检测转基因矮牵牛与对照阳性质粒中的2个或3个转基因成分，得到预期结果。     

小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白7原核表达载体的构建

胰岛素样生长因子结合蛋白7（简称IGFBP7）广泛存在于多种正常的组织中，但在相应的肿瘤细胞中的含量极微。试验表明，它在肿瘤发生的不同阶段抑制其生长。采用RT－PCR和Nest-PCR方法，从正常的小鼠脾脏中扩增得到IGFBP7 cDNA片段，测序正确后，克隆于融合表达载体pRSETC中构建原核表达重组体。     

从微量全血直接进行反转录-聚合酶链反应

在转录水平上研究基因表达及调控,通常要求制备纯度高、未降解的总RNA。提取总RNA的方法一般较复杂。Kawasaki描述过一个从1—2ml全血制备RNA的方法。本文报道了一个更为简便的从微量全血不经抽提RNA直接进行RT-PCR的方法。即将2—20μ1全血低渗破红细胞,离心得到白细胞沉淀,在有RNA酶抑制剂存在的条件下再低渗使白细胞破坏,释放出RNA。此液直接用于RT—PCR,并与用AGPC法抽提的总RNA为     

电势降落对DNA分子器件电荷输运的影响

基于晶格格林函数和Landauer-Büttiker公式,研究了脱氧核糖核酸分子器件在不同电势降落下的电荷输运性质。界面处的电势降落可以导致负微分电导现象的出现,而且随着电势降落在脱氧核糖核酸分子上的比例的提高,这个效应更加明显。电势降落导致的分子轨道的局域化是产生负微分电导现象的关键因素。     

HCV基因分型在丙肝诊断和治疗中的应用

目的 建立ＨＣＶ基因分型方法，研究ＨＣＶ基因型与肝病程度的关系，探讨ＨＣＶ基因型与ＩＦＮ－ａ２ｂ抗病毒疗效的关系。方法 ＨＣＶ基因组ＮＳ５区ＰＣＲ扩增产物酶切分型。结果 ７３例ＨＣＶ感染者中有ＨＣＶⅡ型４５例，ＨＣＶⅢ型２８例。Ⅱ型ＨＣＶ感性肝炎３１例，肝硬化１４例；Ⅲ型ＨＣＶ感染者中有慢性肝炎２６例，肝硬化２例。Ⅱ型ＨＣＶ感染者的肝硬化发生率显著高于Ⅲ型ＨＣＶ感染者（Ｐ〈０．０５）。所有病人均应     

High-quality reference genes for quantifying the transcriptional responses of Oryza sativa L. (ssp. indica and japonica) to abiotic stress conditions

Rice (Oryza sativa L.) is important to food security and is also an excellent model plant for numerous cereal crops. A functional genomics study in rice includes characterization of the expression dynamics of genes by quantitative real-time PCR (qPCR) analysis; this is a significant key for developing rice varieties that perform well in the face of adverse climate change. The qPCR analysis requires the use of appropriate reference genes in order to make any quantitative interpretations meaningful. Here, the new potential reference genes were selected from a huge public database of rice microarray experiments. The expression stability of 14 candidates and 4 conventional reference genes was validated by geNorm PLUS and NormFinder software. Seven candidates are superior to the conventionally used reference genes in qPCR and three genes can be used reliably for quantitating the expression of genes involved in abiotic stress responses. These high-quality references EP (LOC_Os05g08980), HNR (LOC_Os01g71770), and TBC (LOC_Os09g34040) worked very well in three indica genotypes and one japonica genotype. One of indica genotypes including the Jasmine rice, KDML105 developed in Thailand for which no reference genes have been reported until now.     

猪瘟病毒RT—PCR产物的T载体克隆,测序及同源比较

利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶的无模板延伸活性制备了可直接克隆ＰＣＲ产物Ｔ载体，苗对猪瘟病毒ＨＣＬＶ株的ＲＴ－ＰＣＲ产物进行了克隆。