用微量单管RT-PCR快速检测及定型脊髓灰质炎病毒

介绍一种逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的简单快速检测和定型脊髓灰质病毒（ＰＶ）的方法，无需提取ＰＶＲＮＡ共用一种缓冲系统，将ＲＴ和ＰＣＲ试剂混合在２０μＬ反应体系中，整个操作可置于一不间断温度循环程度程序中完成，一步法ＲＴ－ＰＣＲ与常ＲＴ－ＰＣＲ及中和抗体试验对ＰＶ的检测结果完全一致，它的检测敏感度可达５ＴＣＩＤ５０／ｍＬ，该法需要时间，费用和污染的都大大减少，而且特别适于临床常规诊断和鉴别     

用聚合酶链式反应扩增抗冻肽基因并在双元表达载体中克隆

抗冻肽基因导入植物的第一步合成了５＇－末端分别带有限制性酶ｘｂａＩ和ＫｐｎＩ识别位点的一对引物，以美洲拟鲽抗冻肽的ｃＤＮＡ克隆为模板，用锚定聚合酰酶链反应扩增了抗冻肽基因，并克隆到细菌表达载体ｐＧＥＭ３２ｆ（一）和植物表达盒式载体ｐＧＡ６４３中，以限制性酶切分析和菌落杂交技术证明了转化子质粒ＤＮＡ中的含有抗冻肽基因，又用ＰＣＲ方法扩增了转化子的抗冻肽基因，从而证实了克隆成功。     

应用聚合酶链反应检测环境污水脊髓灰质炎病毒的研究

用聚合酶链反应技术检测５个市县１５份环境污水中肠道病毒，其中１１份阳性，与细胞中和试验鉴定阳笥结果符合率９０．９０％－１００％，该法不仅简单，敏感，特异分型，而且可作型内鉴别，使细胞中和试验分型和Ｔ特征型内鉴别所需１４ｄ缩短到２ｄ。为环境样品中脊髓灰质炎病毒污染提供了检测手段。     

二甲亚砜在聚合酶链反应扩增载脂蛋白E基因中的作用

目的：探讨二甲亚砜（DMSO）在聚合酶链反应（PCR）中扩增人类载脂蛋白E基因中的作用。方法：在不同质量分数DMSO的存在下,以PCR技术增人类载脂蛋白E基因片段。限制性内切酶酶切检测扩增产物。结果：在质量在分数5%-10%的DMSO下,可以成功地扩增到人类载脂蛋白E基因的第4外显子片段。结论：在DMSO作用下,PCR扩增增强了特异性。扩增的人类载脂蛋白E基因片段可以进行基因限制性片段多态性的分析。     

应用二温式多重PCR技术鉴别鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒

为了简化聚链反应（PCR）程序和加快检测速度,将二温式PCR与多重PCR结合起来,建立一种同是检测鸡传染性支气管炎病毒（IBV）和鸡传染性喉气炎病毒（ILTV）的二温式重PCR技术,试验根据IBV和ILTV的基因文库,设计2对分别与IBV和ILTV某段基因序列互补的引物。用这2对引物同一样品中的IBV、ILTV核酸模板进行二温式多重PCR扩增,结果均同时得到2条特异性大小与实验设计相符的1720bp(IBV)和647bp(ILTV）的扩增带,而对其他6种禽病病原的扩增结果均为阴性,敏感性测定结果表明明,该二温式多重PCR技术检出10pg的IBV RNA模板和10pg的ILTV DNA模板。     

PCR检测白血病患者外周血中EB病毒的DNA

目的：了解白血病患者ＥＢ病毒感染情况。方法：收集２１例急性淋巴细胞白血病、１例慢性淋巴细胞白血病、１５例急性粒细胞白血病、８例慢性粒细胞白血病患者及３２例正常对照组的外周血,分离单个核细胞,提取ＤＮＡ,应用ＰＣＲ方法检测ＥＢ病毒ＤＮＡ。结果：在１例初诊慢性粒细胞白血病病人样本中发现ＥＢ病毒阳性,余均为阴性。结论：白血病患者存在ＥＢ病毒感染情况,但并不普遍。     

人神经生长因子基因克隆

人神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)是迄今已明确多肽结构和编码基因序列的极少数内源性神经活性因子之一,已知其β亚基(β-NGF)能促进中枢和外周某些神经元的正常发育与分化,对损伤神经元有促再生和保护作用,并经动物模型在体实验初步证明在脑损伤、老化防治方面具有应用前景,上述报道主要来自小鼠颌下腺NGF的实验研     

HBV C区基因扩增与PCR条件的优化

目的:为提高PCR检测乙型肝炎病毒(HBV)的特异性和灵敏度,降低成本,对PCR条件进行优化.方法:将HBV特异性基因片段转化到大肠杆菌DH5α中,提取质粒,利用PCR扩增HBV C区基因,对PCR条件中的退火温度、Mg2 浓度进行优化,并比较3种不同Taq DNA聚合酶的灵敏度.结果:HBV C区基因扩增的最佳退火温度为58℃,最佳Mg2 浓度为1.5mmol/L,Biostar Taq DNA聚合酶扩增到10-6.讨论:对HBV C区基因进行了转化和PCR实验条件的优化,为扩大PCR在乙型肝炎病毒(HBV)检测领域中的应用提供实验依据.     

117β-雌二醇对小鼠脾脏CD11c阳性树突状细胞白细胞介素和TNF-α表达的影响

在mRNA水平上研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对小鼠脾脏CD11c阳性树突状细胞(spleenCD11c-positive dendritic cells,SDCs)合成的细胞因子IL-6,IL-10,IL-12和TNF-α的调节作用.方法:免疫磁珠法纯化小鼠CD11c阳性SDCs,用不同浓度的...     

人IFN-γ在大肠杆菌中高效表达和色谱复性研究

从健康人外周血分离单核细胞，经LPS刺激后提取总RNA，用RT—PCR扩增hIFN-γ的cD—NA。将扩增产物克隆后进行序列分析证明，克隆的hIFN-γcDNA除存在2个序列多态性位点外，与天然的干扰素氨基酸序列完全一致。利用温控表达系统在大肠杆菌中实现了hIFN-γ的高效表达，表达的目的蛋白可占茵体总蛋白的55％。用5L和50L发酵罐放量生产的产物，经高效疏水色谱HPHIC直接复性和纯化得到了重组hIFN-γ纯品，其比活性与天然蛋白相近．