酶化学修饰的研究进展

化学修饰已成为改进酶理化性质和生物活性的有效方法 ,引起了人们高度的重视 .本文主要介绍酶化学修饰的目的、意义、方法 ,以及修饰剂的选择、种类 ,评述了酶化学修饰领域的主要进展、研究概况及其应用     

在Co2+注入修饰电极上米托蒽醌的电化学行为及其应用

米托蒽醌(MX)在0.005mol*L-1 Tris-0.05mol*L-1 NaCl (pH7.1)缓冲溶液中, 在Co离子注入玻碳修饰电极(Co/GCE)上,有一灵敏的伏安还原峰,峰电位为-0.68V,峰电流与MX的浓度在1.8×10-7～9.0×10-6 mol*L-1 间呈线性关系,检出限为9.0×10-8 mol*L-1.将该法用于病人尿样的测定,回收率为94.6%～105.7%. 用线性扫描和循环伏安法研究该体系的电化学行为和电催化.实验表明,体系为不可逆过程.Co/GCE上的电流比GC电极的大,扫速对催化效率的影响实验证明,存在着催化作用.X射线光电子能谱(XPS)和俄歇电子能谱(AES)实验表明,Co确实被注入在GC表面,注入的Co催化了MX的还原.     

试析电化学装置两极机制及命名原则

阐述了电化学装置两极机制及其命名原则，从氧化还原观点阐明了电化学反应的实质；从热力学角度论证了能量转换的特点。     

脲酶高产菌的筛选和产酶条件的研究

从红壤稻田分离产胞外脲酶活性高的细菌、放线菌和真菌各20株.细菌、放线菌、真菌产脲酶活力的平均值分别为0.764,1.104,0.847μmol/min.产脲酶能力大小为:放线菌>真菌>细菌.我们研究了一株放线菌Dactylosprangiumaurantiacum产胞外脲酶的条件.结果表明:该菌产酶的最佳培养时间为42h;产酶的最佳培养温度为28℃;产酶的最佳起始pH为7;葡萄糖、鼠李糖和甘露糖等碳源对产酶有利;硝酸铵、氯化铵和硫酸铵对产酶有利;钙、镁等金属离子能促进产酶.     

红豆杉组织、细胞培养物紫杉醇快速检测

利用薄层层析，高效液相色谱，酶联免疫吸附等方法对国内4种1变种红豆杉及其组织，细胞培养物进行紫杉醇快速定性，定量检测，试验结果表明，国内4种1变种红豆杉及其组织，细胞培养物中都含有紫杉醇，其中东北红豆杉及其培养物中紫杉醇含量较高。     

应用三电极系统研究相比为1时可质子化的药物在水/1,2-二氯乙烷界面上的转移反应

采用一种新设计的电解池, 利用三电极系统研究了相比为1(r = V_o /V_w)时可质子化药物在水/1,2-二氯乙烷界面(W/DCE)上的转移反应, 确定了它们的亲油性. 该系统是将含有支持电解质的水溶液滴在银/氯化银电极上, 然后将1,2-二氯乙烷溶液覆盖在水溶液的表面, 再与有机相参比电极和对电极构成常规的三电极系统. 由不同pH值下测得的循环伏安图计算出了阿米替林、苯海拉明和苯海索3种药物离子在W/DCE上的标准离子分配系数、标准离子转移电位及标准离子转移吉布斯自由能等. 由实验结果构建的离子分布图可用来预测和解释可离子化物质在两互不相溶溶液界面上的转移反应机理等.     

水疱性口炎病毒L蛋白N端存在新的定位信号

水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV) L蛋白是该病毒复制酶的主要成分, 分子量约为241 kD. 通过构建L蛋白缺失突变体与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的方式, 将融合蛋白置于T7启动子或CMV启动子下游, 在多种动物细胞中瞬时表达了重组的融合蛋白. 荧光显微镜观察结果显示, 仅保留N端96个氨基酸残基或缺失N端120个以上残基时, 融合蛋白均匀分布于整个细胞质中, 而含有N端120个以上残基时, 融合蛋白呈点状或局部分布于核周围部位. 截取L蛋白96～120氨基酸片段, 连接到GFP蛋白氨基端, 同样融合蛋白亦特异性地分布到核周围局部区域. 进一步研究含定位信号的25个残基片段发现, 仅13个残基的肽段QGYSFLHEVDKEA(108 ~ 120)就具有定位功能, 缺失D或V均导致定位信号完全丧失. 含有这13个残基的GFP融合蛋白, 在多种细胞和不同表达模式下均显示了同样的分布规律, 表明L蛋白N端这种定位信号具有独立的定位功能, 并且在不同细胞中是保守的.     

优系青蒿法呢基焦磷酸合酶基因的克隆和酶学分析

从青蒿(Artemisia annua L)高产株系025的cDNA文库中克隆到了一个编码青蒿法呢基焦磷酸合酶(AaFPS1)的cDNA(af1). 序列分析表明, 这一cDNA编码一个含343个氨基酸残基的蛋白质, 分子量为39 kD. 推导出的氨基酸序列与来自其他植物、哺乳动物及酵母的FPS相似, 也包含异戊烯基转移酶和聚异戊烯基合酶所共有的5个保守域. 此cDNA在大肠杆菌中的表达产物表现出明显的FPS酶学活性. 通过离子交换层析纯化后, 进一步测定了其酶学动力学. 上述结果将进一步推动青蒿素生物合成分子调控的研究.     

血红素蛋白质-甲基纤维素膜修饰电极的表征和催化特性

用紫外-可见和红外光谱及原子力显微法表征了血红素蛋白质-甲基纤维素膜修饰电极。紫外-可见和红外光谱显示，在甲基纤维素(MC)凝胶中，蛋白质保持原始构象；在溶液pH3．0—10．0范围内，蛋白质的构象可逆地变化。原子力显微图像表明蛋白质与MC水凝胶之间存在较强的作用。研究了血红素蛋白质催化还原O2、H2O2和NO的机理。实验表明，还原O2和NO时，血红素蛋白质-MC修饰电极能重复使用，催化活性几乎不变；而催化H2O2时，催化活性下降较快，表明其反应历程有显的差异。稳定的蛋白质-MC修饰电极能定量测定H2O2和NO2^-。     

樟树(Cinnamomum camphora)对钉螺过氧化物酶影响的研究

分别用新鲜樟树的根皮、茎皮、叶的水浸液处理钉螺，结果表明：樟树各部分的水浸液均有很好的灭螺效果；灭螺效果的顺序依次为：根皮、茎皮、叶；樟树各部水浸液对钉螺的过氧化物酶有明显影响，经处理1—3天样品的酶活高于对照组，处理4天的酶活最强，而处理5天的酶活则大大减弱。在这一处理过程中，有时出现新的酶带，有时又有酶带消失。