牡蛎共生细菌的分离、鉴定及次级代谢产物生物活性研究

对日照海域野生牡蛎共生细菌进行分离鉴定,研究其次级代谢产物的生物活性.采用常规平板分离方法对牡蛎共生细菌进行分离、培养并进行分子生物学鉴定;采用改良Ellman法和DPPH自由基清除法对共生菌的次级代谢产物进行抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)和抗氧化活性筛选.结果表明,从日照海域野生牡蛎中共分离得到62株共生细菌,其中,4株属于孤菌属,6株属于芽孢杆菌属,4株为鲁杰式菌属,3株为黄杆菌属,3株为交替单胞菌属,1株为嗜热脂肪芽孢杆菌属,其余均为交替假单胞菌属。共生细菌中对AChE具有较强抑制活性的有13株,尤其是菌株HYML-1-11和HYML-1-62,抑制AChE的IC_(50)值分别为5.01和4.53μg·mL~(-1);具有一定抗氧化活性的有22株,其中HYML-1-6、HYML-1-11、HYML-1-18、HYML-1-24、HYML-1-39、HYML-1-47和HYML-1-62号菌株的次级代谢产物(5μg·mL~(-1))对DPPH自由基的清除率均达40%以上.     

乙酰胆碱酯酶阳性神经在大鼠小肠壁丛内分布的研究——酶组织化学法

大鼠小肠壁切片和撕片标本,用酶组织化学法观察小肠壁层和肠肌丛内乙酰胆碱酯酶(AchE)阳性神经的分布。结果发现:(1)小肠壁各层和肠肌丛内神经纤维十分丰富,神经纤维的分布密度从十二指肠向空肠到回肠有逐渐增高趋势。(2)肠肌丛中有大量酶阳性神经元胞体,密布于节(丛)和节间束内,有些细胞突起在丛内和节间交织成网,有的突起末端膨大呈终扣样与邻近的细胞体呈突触样接触,小肠各段肠肌丛的节细胞酶活性和分布密度有明显差别:回肠>空肠>十二指肠,分别为37.1％,33.5％,28.7％。     

蛇床子总香豆素的杀螺活性研究

研究蛇床子总香豆素的杀螺效果,及对钉螺酯酶同工酶以及糖原的影响,以探究其杀螺机理.用不同浓度(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00mg/L)蛇床子总香豆素处理液处理钉螺,发现10mg/L以上浓度处理3~4d可100%杀死钉螺,且处理液浓度和处理时间与钉螺的死亡率显著的正相关.用浸杀48h的LC50浓度(4.64mg/L)蛇床子总香豆素药液浸泡钉螺,于浸泡后24、48、72、96h挑选活螺,检测钉螺酯酶同工酶活性及软体组织糖原的变化情况.结果表明:浸泡的96h内,钉螺酯酶活性先升高,后降低,最后几乎完全丧失;体内糖原含量则随浸泡时间的延长而降低,浸泡96h后糖原含量下降30.06%.     

重离子(N_(14)~(7 ))注入对小麦过氧化物同功酶的影响

采用中科院兰州近代物理研究所20MeV离子注入机产生的不同剂量（5×106P／cm2,1×109P／cm2）的N_(14)~(7 )离子对小麦“82579”进行了注入,并采用垂直板聚丙烯酰胶凝胶电泳技术对其注入后小麦种子过氧化物同功酶进行了研究．结果表明：重离子（N_(14)~(7 )）注入小麦后,对小麦根、芽、胚、胫乳过氧化物同功酶均具有影响,尤其是对胚的影响较为明显,与对照相比主要表现为带的缺失．     

人胎肺细胞培养液中类血小板生成素的初步研究

人正常胎肺细胞用含１０％小牛血清的ＭＥＭ培养液原代培养,后用无血清的１９９培养液继续培养．硝酸纤维膜的斑点酶联免疫印迹法测定显示所收集的无血清培养液中含有能与人重组血小板生成素单抗结合的蛋白质．免疫细胞化学检测发现培养的肺细胞与血小板生成素单抗有明显阳性反应．用小鼠骨髓乙酰胆碱酯酶阳性细胞法测定肺细胞在不同培养时间所收集的培养液促血小板生成活性的大小,结果显示收集的培养液有明显刺激活性并且其活性与肺细胞的密度有相关性．     

盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)KAX-3和AK127细胞形态发生和同工酶的比较研究

比较了盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)野生型细胞KAx-3和突变型细胞AK127在多细胞发育过程中的形态发生.两者有明显的区别;突变细胞的发育只能停留在细胞疏松聚集阶段,而野生型细胞能顺利完成整个发育过程.利用SDS-PAGE电泳比较分析了两者在重要发育阶段的三种同工酶:醋酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)和谷氨酸脱氢酶(GDH).结果发现AK127细胞发育阶段含有两种醋酶成分a和p,而KAX-3细胞中只有一种醋酶a;而且AK127细胞中苹果酸脱氢酶(MDH)含量在发育后14 h和16 h均高于KAX-3细胞;谷氨酸脱氢酶(GDH)同工酶在发育后14 h时相对含量高于KAX-3细胞,而在发育后16 h含量却低于KAX-3细胞.这些数据显示了两种类型细胞的同工酶有明显的差异;表明突变细胞基因的表达发生了一定的改变,由此说明了gp150分子在盘基网柄菌细胞发育中有重要作用.     

辣椒不同发育时期的同工酶研究

利用聚丙烯酰胺垂直板电泳技术对5个辣椒品种9个发育期的过氧化物酶同工酶、超氧化物歧化酶同工酶和酯酶同工酶进行了研究．发现不同发育时期3种酶的同工酶酶谱均有不同程度的变化．过氧化物酶同工酶酶谱在五层花序期最丰富,共有11条酶带,而在双叶期和四叶期,未检测到过氧化物同工酶酶带;超氧化物歧化酶酶谱在二层花序期最丰富,共有9条酶带,而在双叶期酶带数最少,仅为3条;酯酶同工酶酶谱在六层花序期最丰富,共有6条酶带,在六叶期和二层花序期酶带数最少,只有1条．通过分析这3种同工酶的总酶谱,找到了区分5个辣椒品种的标志性酶带．     

乙酰胆碱酯酶电极反应机理

在研究酶电极基础上探讨了电极上的反应机理。以乙酰胆碱酯酶催化活性为基础的抑制型酶电极的电极反应是:1)催化底物水解;2)底物中的I-被氧化为I2;3)底物氯化硫代乙酰胆碱分解产生的硫代胆碱含有的-SH基在银基汞膜电极上与汞生成硫醇汞盐。硫代胆碱在玻碳电极表面的氧化,为具有吸附性的不可逆过程,电极反应的电子转移数n=2,反应速率常数k=0.29s-1。     

阿魏酸酯酶在体外模拟猪胃肠道中的稳定性

模拟了胃(肠)液中pH值、蛋白酶、进食量和微量金属离子等对阿魏酸酯酶(FAE)酶活稳定性的影响.结果表明:模拟胃液环境对阿魏酸酯酶酶活影响显著,模拟肠液环境对阿魏酸酯酶稳定性影响较小;蛋白酶酶活的增加不利于阿魏酸酯酶稳定性,但影响不显著;混合金属离子对阿魏酸酯酶稳定性影响不显著;进食量增加可以保护阿魏酸酯酶通过胃液环境,进入小肠发挥作用.在模拟胃液中,阿魏酸酯酶的酶活迅速降低,1 h时,酶活为25%左右,调整为小肠环境时,对阿魏酸酯酶有瞬时激活作用;5 h时,酶活为30%左右;胃肠道pH值是影响阿魏酸酯酶酶活的主要因素,胃蛋白酶、肠道中的金属离子对阿魏酸酯酶酶活影响较小,进食量对肠道中阿魏酸酯酶有保护作用,模拟肠液对经过模拟胃液处理的阿魏酸酯酶有瞬时激活作用.     

Effects of dietary nickel on detoxification enzyme activities in the midgut of <Emphasis Type="Italic">Spodoptera litura</Emphasis> Fabricius larvae

Nickel accumulated in midugt of Spodoptera litura Fabricius could induce the expression of metallothionein, one of the most important detoxification proteins in organisms. In the present study, the effects of dietary nickel on the activities of detoxification enzymes, such as carboxylesterase （CarE） and giutathione S-transferase （GST） in the midgut of S. litura larvae have been studied to get an understanding of the detoxification mechanisms of S. litura larvae to excessive nickel. Results showed that CarE activities in the midgut of the 5th instar larvae decreased at lower levels of nickel （≤5 mg/kg）, while increased with increasing nickel doses at higher levels of nickel （≥10 mg/kg） exposure in successive 3 generations. CarE activities of the 6th instar larvae were also characterized as inhibited at low levels of nickel exposure, and improved at higher levels in the 1st generation. CarE activities of 6th instar larvae in the 2nd and 3rd generations were all lower than that in control. However, GST activities in the midgut of the 5th and 6th instar larvae all increased with increasing nickel doses （1 --20 mg/kg） in diets.