碱性成纤维细胞生长因子对无血清培养大鼠生长板软骨细胞的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）用于无血清培养扩增软骨细胞的可行性及最适质量浓度。方法：分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞（rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC）。细胞化学和免疫细胞化学染色的方法检测第1代RGC中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。观察0．1、1．0、10．0和100．0μg/L bFGF对无血清培养RGC形态的影响,并分别用^3H—TdR和^3H—Proline掺入法检测上述质量浓度bFGF对无血清培养RGC增殖和胶原合成的影响。结果：第1代RGC表达蛋白多糖和Ⅱ型胶原,保持了软骨细胞的分化表型。随着bFGF质量浓度的增加RGC的形态由多角形变为梭形和圆形。与无血清对照组相比,上述4个质量浓度的bFGF均显著促进RGC的增殖和胶原合成（P〈0．05）,其中1．0和10．0μg／L bFGF促RGC增殖的作用与10％胎牛血清（FBS）对照组差异无显著性意义（P〉0．05）,但促胶原合成作用较弱,相当于10％FBS对照组的印％左右（P〈0．05）。结论：bFGF可用于无血清扩增软骨细胞,1．0～10．0μg/L是适宜的质量浓度范围,但其促胶原合成作用较弱,还需添加其他因子以弥补促胶原合成作用的不足。     

BMSCs与软骨细胞共培养复合BMG修复关节软骨缺损的实验研究

本文探讨BMSCs与同种异体肋软骨细胞共培养及复合自体“双相”骨基质明胶（BMG）修复关节软骨缺损的可行性。①获取两种细胞的P2代随机分为三组：共培养组、高浓度软骨细胞组,低浓度软骨细胞组,体外培养2周后检测各组GAG含量。②改良的Urist法制备自体“双相”BMG支架,并与共培养细胞体外培养5天。⑤制备56只兔膝关节软骨缺损模型,随机分为5组。实验组植入共培养细胞-BMG复合体,对照组植入单纯BMG支架,空白组不作特殊处理。术后1、2、5个月取材行大体、组织学观察和改良的Pineda法评分。结果：①2周后A组培养液的GAG含量明显多于B、C组,差异有统计学意义（P〈0．05）。②电镜示“双相”BMG呈多孔网络状结构,细胞黏附其表面,生长良好。③术后3个月实验组软骨缺损由透明软骨修复,对照组和空白组仅由部分纤维组织填充。实验组各时期的评分优于对照组和空白组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：OBMSCs与同种异体肋软骨细胞共培养,可被诱导分化为软骨细胞,减少了软骨细胞的用量;②共培养细胞与自体“双相”BMG复合可有效地修复关节软骨缺损。     

DiI荧光标记的软骨细胞与支架材料复合后的观察

目的:通过Dil荧光染料标记观察软骨细胞在聚乳酸/乙醇酸共聚物支架(PLGA)体外和体内培养环境中的生长状态,为研究组织工程化软骨探索一种理想的软骨细胞示踪方法.方法:体外分离培养大鼠剑突软骨细胞,应用DiI标记软骨细胞,通过MTT法测定细胞的增殖活性.DiI荧光标记的软骨细胞种植于PLGA支架上分两组:一组体外培养1周,另一组体外培养1周后,再植入同系大鼠大网膜体内培养1周.分别取出细胞一支架复合物,在荧光显微镜下观察体外和体内条件下软骨细胞的荧光表达情况.结果:应用DiI标记不影响软骨细胞的增殖,MTT测定结果显示标记组和对照组的A值未见显著性差异(P>0.05).标记后的软骨细胞显示环状红色荧光,胞核未着色.体外培养和体内培养的软骨细胞一支架复合物,均可在荧光显微镜下观察到红色荧光表达.结论:DiI荧光染料能够有效标记软骨细胞,标记的细胞一支架复合物可直接在荧光显微镜下进行观察,可作为体外和体内构建组织工程软骨的较好的示踪方法.     

成人骨髓间充质干细胞体外扩增和定向诱导分化为骨和软骨细胞的研究

体外扩增和定向诱导成人骨髓间充质干细胞(MSC)向骨细胞和软骨细胞分化.从正常成人骨髓中分离MSC,经纯化和扩增后分别用地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C诱导MSC向成骨细胞分化;用无血清培养基和转化生长因子-β诱导MSC向软骨细胞分化;诱导期间用光镜检测分化情况,并通过细胞化学和免疫组化方法检测钙沉积、碱性磷酸酶、软骨细胞分泌的酸性蛋白聚糖以及Ⅰ和Ⅱ型胶原表达情况.5.5×105个成人骨髓MSC在体外扩增15代后可获得7.5×1012个细胞,扩增约1.36×107倍;在地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C诱导培养的第7天,光镜下可观察到少数细胞逐渐由梭形变成多角形,碱性磷酸酶呈阳性,于培养的第21天可观察到钙沉积,Ⅰ型胶原呈阳性反应.成人MSC在无血清培养基中和TGF-β诱导下可向软骨细胞分化,阿茜蓝染色可观察到蓝染的酸性蛋白聚糖,Ⅱ型胶原呈阳性反应.因此,成人骨髓MSC在体外可定向诱导分化为骨细胞和软骨细胞.     

不同硒浓度对鸡胚软骨细胞的骨架与胞外基质中胶原微原纤维的影响

大骨节病是一种发生在我国低硒地带的地方病,病区的水、土、粮食以及病人的毛发、血液等的硒含量都处于低硒状态,补充Na_2SeO-3可明显预防此病的发生。大骨节病主要的病变是骨端软骨细胞坏死。微量元素Se对软骨细胞的生长、发育有无明显的作用?本文在离体条件下对这方面进行了初步探索。     

基底硬度介导IL-1β调控软骨细胞炎症响应

【目的】基质力学微环境异常是导致骨性关节炎（osteoarthritis, OA）的关键因素之一。然而,软骨细胞在基质力学微环境发生变化过程中的炎症响应目前尚不清楚。【方法】利用聚二甲基硅氧烷（polydimethylsiloxane, PDMS）模拟正常和OA软骨细胞周基质（pericellular matrix, PCM）硬度,制备不同硬度的细胞培养基底,定量分析基底硬度和炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)协同作用对软骨细胞形态、炎症介质和基质重塑蛋白表达的影响。首先,定量分析了不同基底硬度和IL-1β对软骨细胞前列腺素E2(prostaglandin, PGE2)和一氧化氮（NO）分泌水平的影响;其次,采用免疫荧光技术分析了IL-1β对不同硬度基底上软骨细胞铺展面积和核面积的影响;最后,采用Western blot分析了不同硬度基底上软骨细胞Ⅱ型胶原（type Ⅱ collagen, COLⅡ）和基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13, MMP13)蛋白水平的表达。【结果】实验结果表明,基底硬度介导软骨细胞对...     

川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞增殖和凋亡影响

目的 观察川芎嗪对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞的增殖及凋亡的影响.方法 兔原代软骨细胞培养及鉴定,用IL-1β10ng/ml和/或不同浓度川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48h后,利用流式细胞仪检测各组软骨细胞的周期及凋亡率;利用MTT法检测软骨细胞的生长状态.结果 与对照组比较,IL-1β诱导下软骨细胞的凋亡率显著增加,差异具有显著统计学意义(P＜0.01);加入川芎嗪能明显降低IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率,有显著统计学意义(P＜0.01);与对照组比较,IL-1β诱导下软骨细胞被明显阻滞在G1期(P＜0.01);加入川芎嗪能明显降低IL-1β对软骨细胞G1期的阻滞作用,细胞增殖指数明显增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞抑制凋亡并促进生长.     

mir92a acts to maintain Bmp activity during pharyngeal cartilage formation

Craniofacial malformation is a common congenital birth defect usually associated with abnormal development of pharyngeal arches.Most skeletal elements of the skull,such as bone and cartilage,are derived from cranial neural crest（CNC）.CNC cells originate from neural folds,migrate into the craniofacial regions,proliferate to expand chondrogenic progenitors,and then differentiate into chondrocytes,