春化相关基因ver203F cDNA 3′末端的克隆及序列分析

以差异筛选技术克隆到的春化相关基因ｃＤＮＡ ｖｅｒｃ２０３为基础,设计５’端引物,利用ＲＡＣＥ克隆策略,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增得到ｃＤＮＡ的３‘末端序列ｖｅｒ２０３Ｆ（１１９７ｂｐ）,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析表明其全长约２．０ｋｂ,且其表达具有春化处理的特异性。检索表明该基因序列（ＡＢ０１２１０３）与一大麦茉莉酸诱导基因有部分同源性,推测该基因在调控开花过程中可能参与茉莉酸介质的信号传导途径。     

克隆与序列分析中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）HSP70基因全长ORF的RACE

采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆中华绒螯蟹(Edocheirsinensis)的Hsp70基因并进行序列分析.以中华绒螯蟹卵组织cDNA为模板,克隆测序后拼接得到一条长2 429 bp的cDNA序列,序列分析表明其覆盖了完整编码区,编码649个氨基酸.经antheprot分析发现2个Hsp70基因的签名序列:IFDLGGGTFDVSIL,IVLVGGSTRIPKIQK;Dnak特征基序DLGTF-S-V;非细胞器基序:RARFEEL;核定位信号标签:KKDPSESKRALRRL;胞质Hsp70特征基序GPTIEEVD.经BLASTn和BLASTx软件分析,该编码区核苷酸序列与凡纳滨对虾(Litopenaeus uannamei)、斑节对虾(Penaeus monodon)的相似性分别为85.30%和84.89%.根据核苷酸序列所推导出的Hsp70氨基酸序列,其与斑节对虾、罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)的相似性分别为93.23%和93.40%.本研究克隆了中华绒螯蟹的Hsp70基因,为进一步深入研究锯缘青蟹的抗逆机理及其遗传改良奠定了基础.     

结核分枝杆菌对感染小鼠肺泡巨噬细胞转铁蛋白受体和铁蛋白表达的影响

探讨不同毒力结核分枝杆菌感染对小鼠肺泡巨噬细胞转铁蛋白受体(TfR)和铁蛋白(Fn)表达的影响及其时相性变化。利用制备的卡介苗(以下简称BCG)和结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株(以下简称H37Rv株)悬液,分别经小鼠尾静脉注射,建立各组小鼠感染模型,各组小鼠感染模型建立成功后,分别于第1、3、5、7、9、11、13、15天,进行各组小鼠肺泡灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取各组小鼠肺泡巨噬细胞。应用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR和Fn的表达。利用ELISA方法检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR的表达结果显示:H37RV组与BCG组小鼠肺泡巨噬细胞TfR表达均高于空白对照组,在感染第7、9、11天差异最明显,具有统计学意义(P0.05)。利用Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR表达结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37RN组、BCG组、空白对照组三组之间差异有统计学意义(P0.05)。用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37RV组与BCG组的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达量明显减低,并且于第7天时表达量最第,异有统计学意义(P0.05)。结核分枝杆菌感染小鼠,导致小鼠肺泡巨噬细胞TfR的表达增高,而Fn的表达降低。不同毒力的结核杆菌感染后Fn蛋白表达差异并不明显,而不同毒力的结核杆菌感染后TfR蛋白的表达有差异性。     

TNV-A~C亚基因组表达及基因编码产物对局部枯斑症状的影响

利用烟草坏死病毒A中国大豆分离物(Tobacco necrosis virus A Chinese isolate,TNV-AC)的全长侵染性cDNA克隆构建系列突变体进行体外转录.在枯斑寄主苋色藜(Chenopodium amaranticolor)上的侵染性检测结果表明,TNV-AC亚基因组RNA1的转录起始位点位于基因组RNA的G2184,亚基因组RNA2的转录起始位点位于基因组RNA的G2460.进一步分析表明,亚基因组RNA1中p8和p6基因的翻译灭活突变可导致病毒在苋色藜上的侵染症状消失,但不影响病毒在烟草原生质体中的复制,说明p8和p6基因产物可能影响病毒在细胞之间的移动,是病毒造成枯斑所必需的基因.通过原核表达产物分析,证明了亚基因组RNA2中外壳蛋白(coat protein,CP)基因的可读框起始于基因组RNA的2612~2614位AUG.CP可读框核苷酸替换或缺失突变分析表明,完整的CP蛋白虽不是病毒建立侵染所必需的,但其翻译起始密码子区域的核苷酸序列保守性及可读框核酸序列的完整性对病毒侵染苋色藜后产生枯斑的数量、显症时间和病毒RNA的积累量具有明显影响.综合以上结果,对TNV-AC的cp基因在侵染枯斑寄主苋色藜过程中的其他功能进行了讨论.     

TNV-AC亚基因组表达及基因编码产物对局部枯斑症状的影响

利用烟草坏死病毒A中国大豆分离物(Tobacco necrosis virus A Chinese isolate, TNV-AC)的全长侵染性cDNA克隆构建系列突变体进行体外转录. 在枯斑寄主苋色藜(Chenopodium amaranticolor)上的侵染性检测结果表明, TNV-A^C亚基因组RNA1的转录起始位点位于基因组RNA的G²¹⁸⁴, 亚基因组RNA2的转录起始位点位于基因组RNA的G²⁴⁶⁰. 进一步分析表明, 亚基因组RNA1中p8和p6基因的翻译灭活突变可导致病毒在苋色藜上的侵染症状消失, 但不影响病毒在烟草原生质体中的复制, 说明p8和p6基因产物可能影响病毒在细胞之间的移动, 是病毒造成枯斑所必需的基因. 通过原核表达产物分析, 证明了亚基因组RNA2 中外壳蛋白(coat protein, CP)基因的可读框起始于基因组RNA的2612~2614位AUG. CP可读框核苷酸替换或缺失突变分析表明, 完整的CP蛋白虽不是病毒建立侵染所必需的, 但其翻译起始密码子区域的核苷酸序列保守性及可读框核酸序列的完整性对病毒侵染苋色藜后产生枯斑的数量、显症时间和病毒RNA的积累量具有明显影响. 综合以上结果, 对 TNV-A^C的cp基因在侵染枯斑寄主苋色藜过程中的其他功能进行了讨论.     

蜘蛛丝蛋白的研究进展

蜘蛛丝属线状蛋白质,具有独特的结构和性能特点,是世界上拉力强度和弹性最强的纤维之一,其强度比钢还要硬.一些蜘蛛丝蛋白的基因已被克隆出来,并且用不同的表达载体表达,同时进行了成丝研究.由于蜘蛛丝性能独特,在许多领域具有良好的应用前景.     

兔生长激素cDNA克隆和表达

从兔脑下垂体中的mRNA中,利用合成引物逆转录PCR,获得了前体和成熟生长激素的cDNA,成熟生长激素的cDNA克隆在pET-3a表达载体并转化到大肠杆菌BL21(DE3 plys)中,获得了高效表达,表达量达到大肠杆菌总蛋白的40%。     

淡水养殖鱼类血清转铁蛋白耐低氧特性的研究

用聚丙酰胺凝胶电泳、含铁蛋白质专一染色法及利凡诺溶液沉淀法确定了鲤鱼、鲫鱼等１２种淡水养殖鱼的血清转铁蛋白在聚丙烯酰胺中的位置,鉴定出８类鲤鱼、６类鲫鱼和３类白鲢的血清转铁蛋白的特异类型,并分析了转铁蛋白多态体的表现型和基因型,测定了锂鱼、鲫鱼、白链和鳙鱼的血清铁浓度,铁结合能力及铁饱和度,通过分析淡水养殖鱼类耗氧量及窒息点临界含氧量与血清转铁蛋白的关系,证实了鱼类转铁蛋白具有耐低氧的特性     

RHD基因转录子的选择性剪切

通过RT-PCR技术分析红系细胞和非红系细胞RHD的转录情况,同时进一步比较不同D表达个体的RHD的转录关系.采用逆转录PCR（RT-PCR）技术检测HL-60,K562,Jurkat,THP-1,胚肺成纤维细胞系（HECF）,10名不同Rh表型个体的网织红细胞（CcDEe 3名,CCDEe 2名,CCDee 2名,CcDee 2名和CCDuee 1名）以及10名不同Rh表型（2 CCDEe,2 CCDee,2 ccDee,2 CcDee,ccDEe和CcDEe）个体的白细胞的RhD mRNA,然后进行cDNA测序分析.结果表明,HL-60,Jurkat,THP-1,胚肺成纤维细胞系（HECF）以及不同Rh表型个体的外周血有核细胞中除网状红细胞外皆不存在RhD mRNA,K562具有一个正常的RHD基因转录本,而不同表型个体的网织红细胞具有复杂的RhD cDNA形式,有的缺少RHD基因的外显子7,有的缺少外显子7～9或外显子4～9,但这些个体都有一个正常形式的RhD mRNA.由此得出结论,选择性剪切使RHD基因的产生多种形式的转录子,但这些不同形式的转录子仅来自红系的血细胞如网织红细胞和K562细胞系,白细胞、单核细胞、T淋巴细胞以及胚肺成纤维细胞都不具有RHD的mRNA.     

人伴侣蛋白CCT的 β亚基全长cDNA克隆、表达及染色体定位的研究

伴侣蛋白能促进其他底物蛋白形成正确折叠结构,而本身并不成为底物蛋白的组分。在真核细胞质中的伴侣蛋白ＣＣＴ主要是参与协助细胞骨架蛋白的构成,为细胞生长所必需。通常哺乳动物的ＣＣＴ是由７￣９种不同亚基所组成的蛋白复合体,从人的睾丸组织ｃＤＮＡ文库中分离出一条新的全长ｃＤＮＡ,在其１９３５ｂｐ序列中含有一个长１６０５ｂｐ的可读框,它编码了５３５个氨基酸。基于从该ｃＤＮＡ推导的蛋白质与啤酒酵母、裂殖酵母、